国家教育部博士点基金(20070558275)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 相关作者：杨燕陈彦球葛怡琛徐培林张裕平更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学广东省职业病防治院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人核迁移蛋白单克隆抗体的制备及其在人巨核细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:制备人核迁移蛋白(hNudC)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:从人胎肝组织中克隆得到hNudC基因,构建重组表达质粒pET-28b/hNudC,表达带有6-His标记的重组hNudC,用纯化的重组hNudC蛋白免疫BALB/c小鼠制备mAb,用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆,用免疫荧光染色法及Western blot试验鉴定mAb的特异性。结果:获得2株杂交瘤细胞系2C16和2D8,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶64和1∶32;腹水mAb的效价分别为1∶1×105和1∶5×104。mAb与重组hNudC蛋白有较强的特异性反应,免疫荧光染色和Western blot试验证明,制备的mAb可以识别人巨核系白血病细胞株Dami、Meg-01和人脐带血来源的CD41+巨核细胞中表达的hNudC蛋白。结论:成功地制备了特异性抗hNudC mAb,为研究hNudC蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础。
- 陈彦球葛怡琛杨燕
- 关键词：单克隆抗体巨核细胞
- 人核迁移蛋白C在鼻咽癌组织中的表达及临床意义被引量：1
- 2011年
- 目的:明确鼻咽癌(NPC)组织中人核迁移蛋白C(hNudC)的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法和Western blot方法检测80例NPC和30例鼻咽黏膜慢性炎组织中hNudC的表达情况,并应用条带密度分析软件半定量分析Western blot条带密度。结果:在NPC中,hNudC阳性表达率为83.75%(67/80),明显高于鼻咽部黏膜慢性炎症组织23.33%(7/30)(P<0.05),hNudC蛋白的阳性表达率随着NPC临床分期的进展而增加(P<0.05)。结论:hNudC基因表达与NPC细胞恶性增殖密切相关,检测其表达对研究NPC的发生、发展具有一定临床意义。
- 陈彦球杨燕林志斌彭华卢汉桂
- 关键词：鼻咽肿瘤
- mNUDC基因在巴斯德毕赤酵母中表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的:探索小鼠核迁移蛋白C(mNUDC)在毕赤酵母分泌表达的方法。方法:应用PCR扩增本实验室所构建的重组质粒PET28b-his-mNUDC中的mNUDC基因,使用基因重组方法构建毕赤酵母真核表达载体pPICZαA-his-mNUDC,电击转化酵母菌株KM71后,经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定上清中重组mNUDC蛋白表达量。结果:经过PCR方法,有效扩增了mNUDC基因,构建了pPICZαA-his-mNUDC酵母表达质粒,序列分析表明所构建的含mNUDC基因的质粒与设计相同,mNUDC蛋白得到正确表达。使用SDS-PAGE和Western blot方法可以检测到mNUDC的稳定、高效地分泌表达。结论:成功地构建了mNUDC基因的毕赤酵母表达载体pPICZαA-his-mNUDC,并在毕赤酵母中实现分泌型离表达,为进一步研究mNUDC蛋白对小鼠的生物活性奠定了实验基础。
- 陈彦球魏明旭张磊杨燕
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- Mpl与绿色荧光蛋白融合基因的真核载体构建及表达被引量：1
- 2009年
- 目的:探索Mpl与绿色荧光蛋白GFP基因共同转染哺乳动物细胞NIH3T3的方法。方法:采用PCR方法将GFP基因与Mpl基因构建融合荧光蛋白的真核表达载体,用脂质体介导转染NIH3T3细胞和筛选稳定细胞系,使用荧光显微镜方法和Western blotting检测转染效果。结果:利用PCR方法有效扩增了Mpl基因,构建了融合荧光蛋白的真核表达载体,序列分析表明所构建的含Mpl基因的质粒与设计相同,使用荧光显微镜方法和Western blotting检测Mpl融合绿色荧光蛋白表达载体成功转染NIH3T3细胞。结论:成功构建了Mpl荧光表达载体,融合基因可以在NIH3T3细胞中稳定表达,为进一步研究Mpl的生物学活性及其与hNUDC蛋白相互作用提供了重要的理论依据。
- 陈彦球张裕平徐培林杨燕
- 关键词：MPLGFPNIH3T3细胞
- 人核迁移蛋C刺激人造血干细胞增殖分化为巨核细胞研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究人核迁移蛋C(hNUDC)促进人脐血来源的CD34+细胞增殖、分化为巨核细胞的作用。方法:使用DynalCD34体外分离系统收集人脐血CD34+细胞,无血清甲基纤维素半固体法体外培养CD34+细胞12d后,显微镜下观察hNUDC对CD34+细胞分化增殖为小、中、大巨核细胞集落的形态、数目的影响;无血清液体培养体系培养CD34+细胞10d后,流式细胞术检测hNUDC对CD34+细胞分化增殖为CD41+细胞的表达率及其DNA倍性的影响。结果:hNUDC能够明显促进CD34+细胞分化增殖形成中小型CFU-MK集落,可显著增加巨核细胞表面标志物CD41+的表达,CD41+细胞中DNA倍性显著地高于血小板生成素。结论:hNUDC对促进造血干细胞增殖和分化为巨核细胞具有重要作用。
- 陈彦球葛怡琛徐培林杨燕
- 关键词：巨核细胞DNA倍性
