南方医科大学南方医院院长基金(2008C005)
- 作品数：8 被引量：50H指数：5
- 相关作者：孙凯吴承堂雷尚通王伟曾俊杰更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南京军区福州总医院更多>>
- 发文基金：南方医科大学南方医院院长基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MicroRNA-221通过抑制CDKN1C/p57表达促进结肠癌细胞增殖被引量：11
- 2011年
- 目的探讨microRNA-221(MIR221)对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响。方法常规培养人结肠癌Caco2细胞系,预先给予或不给予CDKN1C/p57干扰性小RNA(anti-p57-siRNA)处理,再以脂质体分别转染MIR221前体(pre-MIR221)或MIR221特异性抑制剂(anti-MIR221)寡核苷酸,应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测Caco2细胞中MIR221表达状况,运用半定量RT-PCR及Western-blot分析CDKN1C/p57 mRNA及蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞的增殖状态;构建pGL3-p57荧光素酶报告载体并与pre-MIR221或anti-MIR221共转染Caco2细胞,检测转染细胞中荧光素酶活性变化。结果 Caco2细胞转染pre-MIR221后,CDKN1C/p57蛋白表达水平下降,细胞增殖显著(P<0.01);而anti-MIR221可上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖,且此种抑制作用可被anti-p57-siRNA逆转,说明此种抑制效应确由CDKN1C/p57所介导;在转染重组有CDKN1C/p57基因3'-UTR片段的荧光素酶报告载体的Caco2细胞中,共转染pre-MIR221后荧光素酶活性下降,而共转染anti-MIR221后荧光素酶活性增高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 MIR221可通过与CDKN1C/p57 mRNA 3'-UTR区域结合使结肠癌细胞中CDKN1C/p57蛋白表达下降而促进肿瘤增殖;anti-MIR221则可通过上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应。
- 孙凯王伟雷尚通吴承堂李国新
- 关键词：结肠癌增殖
- 微小RNA-221对结直肠癌中CDKN1C/P57表达调控的研究被引量：16
- 2011年
- 目的 观察结直肠癌组织和细胞中微小RNA-221（miR-221）和CDKN1C/P57表达情况,并探讨特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖、凋亡及CDKN1C/P57表达的影响.方法 应用实时荧光定量PCR检测34例结直肠癌组织和相应癌旁组织、以及4种人结直肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miR-221表达情况;采用半定量RT-PCR和Western-blot法分析CDKN1C/P57mRNA及蛋白表达情况;将miR-221和anti-miR-221寡核苷酸通过脂质体转染Caco2细胞系,通过MTT法及流式细胞仪观察细胞的增殖及凋亡情况.结果 miR-221在结直肠癌组织中的相对表达量为2.041±1.401,明显高于癌旁组织（0.806±0.341,P＜0.01）;同样,miR-221在4种人结直肠癌细胞系中的表达亦高于正常对照细胞.CDKN1C/P57 mRNA水平在结直肠癌与癌旁组织中差异并不显著;但其蛋白相对表达量结直肠癌组织显著高于癌旁组织（3.019±1.708比0.972±0.316,P＜0.01）.癌细胞转染anti-miR-221后,CDKN1C/P57蛋白表达上调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率增高,G0/G1期细胞比例增加同时S期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C/P57蛋白表达水平下降,从而促进结直肠癌发生发展;anti-miR-221可通过抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,以抑制结直肠癌细胞生长;miR-221有可能成为结直肠癌生物治疗的新靶点.
- 孙凯曾俊杰王伟吴承堂雷尚通李国新
- 关键词：结直肠肿瘤增殖细胞凋亡
- 特异性miR-221抑制剂对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：9
- 2011年
- 目的探讨miR-221在结直肠癌细胞中的表达状况及特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用实时荧光定量PCR(real-time Q-PCR)检测四种人结肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miRNA-221表达状况,并以人脐静脉内皮细胞HUVEC作为正常对照;设计并合成miR-221、anti-miR-221(微小RNA抑制剂)寡核苷酸,以脂质体转染Caco2细胞系,以Real-time Q-PCR再次检测转染后细胞中miR-221表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态。结果与正常细胞相比,4种人结肠癌细胞系中miR-221表达均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01);癌细胞转染anti-miR-221后,G0/G1期细胞比例明显增加,而S期细胞比例显著下降,并可见细胞凋亡的发生(P<0.01)。结论 miR-221特异性抑制剂可通过抑制细胞增殖同时诱导凋亡而抑制结直肠癌细胞生长,提示miR-221作为结直肠癌生物治疗有效靶点有进一步研究价值。
- 王伟孙凯吴承堂雷尚通曾俊杰伍颖君李国新
- 关键词：结直肠癌凋亡
- CO_2气腹对结直肠癌细胞增殖及microRNA-221和CDKN1C/p57表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:通过检测不同压力CO2气腹环境下结直肠癌细胞周期和microRNA-221(miR-221)及CDKN1C/p57表达的变化,探讨CO2气腹对结直肠癌细胞增殖的影响。方法:将人结直肠癌CaCO2细胞系分别置于0、10、12和15mm Hg的CO2气腹环境下培养4h,应用实时荧光定量PCR检测CaCO2细胞中miR-221表达状况,运用Western-blot分析CDKN1C/p57蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪观察细胞的增殖状态和分析细胞周期。结果:与对照组相比,15mm Hg的CO2气腹组结直肠癌细胞中miR-221表达量下降[(1.212±0.159)vs.(1.937±0.208)],而CDKN1C/p57蛋白表达增高[(2.017±0.808)vs.(0.972±0.416)],同时细胞增殖抑制率[(32.7±5.1)%vs.(21.8±3.6)%]增加,且G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01);0、10、12mm Hg的CO2气腹组结直肠癌细胞增殖抑制率及miR-221、CDKN1C/p57表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:临床常用压力的CO2气腹对结直肠癌细胞增殖无明显影响;15mm Hg的CO2气腹可抑制癌细胞增殖,其原因可能与miR-221表达下降,继而CDKN1C/p57蛋白表达增高有关。
- 王剑平孙凯雷尚通吴承堂李国新
- 关键词：结直肠肿瘤细胞增殖CO2气腹
- FOLFOX4方案新辅助化疗对转移性结直肠癌患者非瘤肝组织的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨FOLFOX4方案新辅助化疗对结直肠癌并肝转移患者非瘤肝组织的影响.方法 对42例结直肠癌并肝转移患者的肝手术切除标本进行检测分析,通过光镜、透射电镜观察非瘤肝组织的病理学变化并进行分级,应用半定量RT-PCR及Western blot检测非瘤肝组织中结缔组织生长因子（CTGF）表达状况.结果 接受FOLFOX4方案新辅助化疗的19例患者中,12例（63.2%）可观察到非瘤肝组织损伤的组织形态学改变,包括小叶中央区肝窦严重扩张、红细胞淤滞、窦周纤维化和静脉闭塞纤维化等,而非化疗组23例患者均未观察到相应病变：新辅助化疗后非瘤肝组织中CTGF mRNA及蛋白质表达为2.347±1.104和3.021±1.735,分别高于对照组的0.825±0.302和0.982±0.326,差异具有统计学意义（P〈0.01）.结论 转移性结直肠癌患者行全身FOLFOX4方案新辅助化疗可引起肝微血管系统的病理学改变,并通过诱导肝星状细胞产生CTGF而促进肝纤维化进程.
- 孙凯吴承堂雷尚通黄祥成
- 关键词：新辅助化疗结缔组织生长因子FOLFOX4
- 结直肠癌与毗邻癌旁组织中microRNA-221与CDKN1C／p57的差异表达被引量：13
- 2011年
- 目的观察结直肠癌与毗邻癌旁组织中microRNA-221（miR-221）与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57（CDKN1C／p57）的差异表达。方法常规抽提结直肠癌及对照癌旁组织中总RNA及蛋白质，应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测标本中miR-221表达，以半定量逆转录（RT）-PCR和Westernblot分析CDKN1C／p57mRNA和蛋白表达。结果30例结直肠癌与癌旁组织相比，miR-221表达明显上调（2．041±1．401比0．806±0．341），差异有统计学意义（P〈0．01），半定量RT—PCR和Western blot分别证实其町能调节的靶目标CDKN1C／p57在mRNA水平结直肠癌和癌旁组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05），而蛋白质水平在结直肠癌中表达明显下降（3．019±1．708比0．972±0．316，P〈0．01）。结论miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C／p57蛋白表达下降，从而促进结直肠癌的发生发展。
- 曾俊杰孙凯吴承堂雷尚通王伟
- 关键词：结直肠癌实时荧光定量PCR
- 应用实时荧光定量PCR检测结直肠癌与癌旁组织中miRNA-221的差异表达状况被引量：13
- 2010年
- 目的分析结直肠癌与毗邻癌旁组织中miRNA-221差异表达状况。方法常规抽提30例结直肠癌及对照癌旁组织中总RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测标本中miRNA-221的表达状况。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miRNA-221表达明显上调(P<0.01)。结论实时荧光定量PCR是一种较精确的miRNA定量检测方法;miRNA-221可能通过转录后基因沉默机制促进结直肠癌的发生发展。
- 曾俊杰孙凯吴承堂雷尚通王伟
- 关键词：结直肠肿瘤实时荧光定量聚合酶链反应
- miR-221在结直肠癌中的表达及意义被引量：1
- 2011年
- 目的探讨micorRNA-221(miR-221)在结直肠癌与癌旁组织中差异表达状况及其与临床病理特征之间的关系。方法选取南方医院经手术切除的原发性结直肠癌标本30例,常规抽提肿瘤及对照癌旁组织中总RNA,应用Real-time RT-PCR检测标本中miR-221表达状况,并以Northern blot进行验证。结果 30例结直肠癌与癌旁组织相比,miR-221表达明显上调(2.041±1.401 vs.0.806±0.341),差异具有统计学意义(P<0.01),且Real-time RT-PCR与Northern blot检测结果具有高度相关性(r2=0.948,P<0.01);miR-221表达水平与肿瘤TNM分期(P=0.032)以及浸润深度(P=0.021)有关。结论 miR-221在结直肠癌中表达上调并可能参与了结直肠癌的发生发展,miR-221有望成为结直肠癌患者预后判断的潜在标志物;Real-time RT-PCR相比较Northern blot是一种较精确的miRNA定量检测方法,具有样本需求量小、操作流程简化、高效性等优点。
- 王剑平孙凯雷尚通吴承堂
- 关键词：结直肠癌REAL-TIMERT-PCRNORTHERNBLOT
