天津市自然科学基金(08JCYBJC27600)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：孙晋津陈剑秋李辰运张晓宇孙宁更多>>
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- 肝细胞生长因子在干细胞领域的研究进展被引量：3
- 2012年
- 干细胞（stemcells，SC）是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。目前干细胞移植已广泛应用于造血系统、肾病、下肢缺血及脑瘫等疾病。但如何让干细胞更有效地动员并发挥作用仍然是干细胞治疗的难点。本文旨在就肝细胞生长因子（hepato．cytegrowthfactor，rIGF）对于细胞的影响综述如下。
- 孙宁陈剑秋孙晋津李辰运王嘉玺
- 关键词：肝细胞生长因子干细胞移植干细胞治疗造血系统下肢缺血
- 差速贴壁法培养大鼠骨髓内皮祖细胞的实验研究被引量：5
- 2011年
- 目的:探索一种经济、可靠、稳定、高纯度的内皮祖细胞培养方法。方法:采用密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓血管内皮祖细胞,于包被人纤连蛋白的25mL培养瓶中贴壁培养,收集48h后的未贴壁细胞培养至第7天,通过细胞摄取DiL-acLDL、结合FITC-UEA-1的荧光双染阳性率从功能角度鉴定细胞,并通过流式细胞术动态测定细胞表面抗原CD133、flk-1、VE-cadherin(CD144)及CD31进一步鉴定。结果:48h未贴壁细胞培养,细胞呈短梭形、多角形,胞体小;可见到大量典型的内皮祖细胞克隆;细胞摄取DiL-acLDL,结合FITC-UEA-1荧光双染阳性率为(87.0±6.0)%。细胞表面抗原CD133、flk-1、CD144和CD31阳性率分别为61.01%、8.55%、6.18%和8.20%。结论:差速贴壁法是一种经济、可靠、稳定、高纯度的内皮祖细胞培养方法。
- 李辰运陈剑秋孙晋津张晓宇
- 关键词：骨髓细胞细胞分离单核细胞
- 肝细胞生长因子基因治疗促进大鼠缺血后肢血管新生的研究
- 2012年
- 目的构建肝细胞生长因子（HGF）真核细胞表达质粒pEGFP—HGF—C1，并观察该质粒对大鼠急性缺血肢体血管新生的作用。方法构建含有人HGFcDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFPHGF—C1；脂质体法向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒并测定转染效率；酶联免疫吸附法（EusA）测定细胞上清液中HGF蛋白表达浓度。建立大鼠急性缺血肢体模型；裸质粒pEGFP—HGF-C1200ug／500ul行缺血肢体肌肉注射，术后第3、6、9天取标本行HGF免疫组织化学和蛋白印迹检测；术后第24天取标本行毛细血管密度测定，评价血管新生情况。结果成功构建含人HGFcDNA的真核细胞表达质粒pEGFP—HGF—C1，且可有效转染原代培养的大鼠骨骼肌细胞（0．8％），并表达HGF，第4天达到高峰为（5402．0±227．9）ng／L；蛋白印迹和免疫组织化学法均显示于术后第3、6、9天HGF表达量高于空载和空白对照组，差异有统计学意义（P〈O．05）；术后第24天治疗组毛细血管密度为10．81±2．35，与空载组6．11±0．90和空白组5．45±0．90比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论构建的质粒pEGFP—HGF—C1转染大鼠肌肉组织后表达的HGF促进了缺血部位的血管新生。
- 孙晋津陈博郭亮陈剑秋
- 关键词：肝细胞生长因子质粒缺血
- HGF基因对大鼠血管内皮细胞增殖的作用被引量：2
- 2012年
- 目的构建肝细胞生长因子(HGF)真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,探讨HGF对大鼠血管内皮细胞(VECs)的作用。方法通过亚克隆技术,构建含有人HGF cDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1并测序;向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒pEGFP-HGF-C1,测定转染效率;ELISA法测定细胞上清液中HGF蛋白表达浓度;MTT法测定HGF表达产物对大鼠VECs促增殖作用。结果成功构建正向表达HGF的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,该质粒可有效转染原代培养的骨骼肌细胞并表达HGF,且其表达产物HGF对大鼠VECs的促增殖作用具有量效和时效关系(P<0.05或P<0.01)。结论成功构建的真核表达质粒pEGFP-HGF-C1能有效转染大鼠骨骼肌细胞,分泌的HGF对大鼠VECs有促增殖作用。
- 孙晋津陈博陈剑秋
- 关键词：肝细胞生长因子质粒载体血管内皮细胞
- 转染内皮祖细胞的脂质体与腺病毒载体的比较被引量：1
- 2012年
- 目的:比较脂质体和腺病毒作为肝细胞生长因子(HGF)基因转染内皮祖细胞载体的效力。方法:分离培养大鼠骨髓血管内皮祖细胞,并通过摄取DiL-acLDL、结合FITC-UEA-1及流式细胞术检测表面抗原CD133+进行鉴定。脂质体介导细胞转染,将细胞分为HGF质粒转染组(转染pIRES2-EGFP-HGF质粒)、空载质粒转染组(转染pIRES2-EGFP质粒)和空白对照组。病毒介导细胞转染,细胞分HGF病毒转染组(pAdxsi-GFP-HGF重组腺病毒转染)、空载病毒转染组(导入pAdxsi-GFP腺病毒)和空白对照组。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,ELISA法检测HGF的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖能力。结果:脂质体和腺病毒载体均可成功将绿色荧光蛋白标记的HGF基因转入内皮祖细胞,其中腺病毒转染效率更高,最高可达80%以上,其表达HGF水平以及细胞增殖能力都明显强于脂质体转染。空载病毒转染组细胞增殖与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),而空载质粒转染组细胞增殖明显少于空白对照组(P<0.05)。结论:腺病毒作为HGF基因转染内皮祖细胞的载体相对于脂质体载体具有更高效、低毒、高表达目的基因的优点。
- 孙宁陈剑秋孙晋津李辰运张晓宇邢帅
- 关键词：肝细胞生长因子脂质体腺病毒科内皮祖细胞
