国家自然科学基金(81200505)
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 相关作者：彭亮吴晓蔓罗苏黄瑞娇郭海波更多>>
- 相关机构：广州医科大学南华大学惠州市中心人民医院更多>>
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- 奇异变形杆菌单个菌落培养方法的探讨被引量：2
- 2015年
- 目的探讨奇异变形杆菌单个菌落培养方法,为菌落计数及其它相关实验打下基础。方法分别用含不同硼酸浓度LB培养基、不同琼脂浓度LB培养基、LSW培养基、ss培养基以及普通LB培养基倾注法对奇异变形杆菌进行培养并计算菌落数。结果 1.5%琼脂LB培养基、ss培养基、0.4%硼酸LB培养基、LSW和倾注法所得的菌落数两两比较差异无统计学意义(P>0.05),0.1%硼酸LB培养基、0.2%硼酸LB培养基、2.5%琼脂LB培养基和3.5%琼脂LB培养基所得菌落数差异无统计学意义(P>0.05),而1.5%琼脂LB培养基、ss培养基、0.4%硼酸LB培养基、LSW和倾注法所得的菌落数低于0.1%硼酸LB培养基、0.2%硼酸LB培养基、2.5%琼脂LB培养基和3.5%琼脂LB培养基所得菌落数,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论根据培养时间、菌落大小及菌落数量,选取含0.1%硼酸LB培养基培养24 h为奇异变形杆菌单个菌落计数方法最佳培养方法 。
- 潘嘉韵彭亮罗苏吴晓蔓
- 关键词：奇异变形杆菌培养基
- 奇异变形菌ppk1基因缺失株的构建与鉴定被引量：4
- 2015年
- 目的构建奇异变形菌(PMI)聚磷酸盐激酶1(polyphosphate kinase 1,PPK1)基因缺失株,为研究ppk1基因在PMI致尿路感染中的作用及其机制奠定基础。方法通过融合PCR将目的基因上游及下游同源臂连接成一个片段,并克隆入自杀质粒pCVD442,将重组质粒转化入大肠埃希菌SM10λpir中,再与PMI受体菌进行接合试验,通过氨苄西林、蔗糖筛选得到ppk1基因缺失株(△pk1),进行PCR和DNA测序鉴定;体外比较野生株和缺失株在低营养条件下的生存能力。结果利用融合PCR将目的基因上、下游片段连接成一个重组片段,并连接至pCVD442自杀质粒;重组自杀质粒进入PMI后出现了同源重组事件,同源片段发生替换,ppk1基因被敲除,通过PCR及测序分析证实基因组目的基因已缺失;经体外测定MOPS培养基中的生长曲线,发现敲除株与野生株相比,在低营养环境中生存能力明显降低。结论自杀质粒同源重组方法可用于PMI基因敲除株的构建,是研究PMI基因功能的重要手段,ppk1基因与PMI在低营养环境中的生存能力有关。
- 彭亮潘嘉韵罗苏吴晓蔓
- 关键词：奇异变形菌
- 尿路致病性大肠杆菌ppk1基因缺失株的构建及其生物学特性研究被引量：3
- 2013年
- 目的构建尿路致病性大肠杆菌CFT073的聚磷酸盐激酶1（polyphosphate kinase，PPK1）基因敲除株，并初步探索其体外生物学特性。方法以CFT073株为研究对象，利用Red同源重组技术敲除CFT073的即ppk1基因，构建敲除株△pk1；通过细胞实验即以人膀胱癌上皮细胞5637为体外模型对CFT073野生型菌株、敲除菌株的黏附及侵袭能力进行比较；采用96孔板结晶紫染色法分析CFT073ppk1基因敲除对其生物膜形成能力的影响。结果成功构建了CFT073ppk1基因敲除株；敲除ppk1后，细菌对膀胱癌上皮细胞的黏附、侵袭能力较野生株都明显减弱；△pk1在各时间点570mm处结晶紫吸光度值均较野生株的低。结论利用Red同源重组技术可成功敲除CFT073的ppk1基因，ppk1在尿路致病性大肠杆菌黏附、侵袭尿路上皮及生物膜形成过程中可能发挥了重要作用。
- 罗苏彭亮潘嘉韵吴晓蔓
- 关键词：尿路感染大肠杆菌基因敲除
- ppk1缺失对大肠埃希菌在小鼠膀胱定植及炎症诱导能力的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨聚磷酸盐基因1(ppk1)基因在大肠埃希菌致尿路感染中的作用。方法:建立小鼠急性膀胱炎模型,比较大肠埃希菌(CFT073)野生株和大肠埃希菌ppk1缺失株(△pk1)膀胱定植能力、炎症因子IL-6和TNF-α含量差异以及膀胱病理变化。结果 :△pk1组感染率(73.3%)低于CFT073组(93.3%);△PK1组定植率(0.01%)低于CFT073组(0.5%);CFT073组和△pk1组IL-6和TNF-α含量均高于正常对照组,且△pk1组两种炎症因子含量低于CFT073组,差异有统计学意义;CFT073组和△pk1组膀胱病理切片均出现炎症反应,△pk1组炎症反应轻于CFT073组。结论:ppk1基因在尿路感染中发挥重要作用,其缺失后,大肠埃希菌黏附侵袭能力及诱发炎症能力降低。
- 潘嘉韵彭亮邓聪邓小燕吴晓蔓
- 关键词：尿路感染大肠埃希菌
- 2011-2013年奇异变形杆菌临床分离株的耐药性分析被引量：6
- 2014年
- 目的了解近三年来奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)的临床分布和产ESBLs菌株的检出率,并分析其耐药情况,为临床合理用药提供参考。方法收集广州医科大学附属第二医院2011年1月至2013年12月间临床分离的193株奇异变形杆菌抗菌药物敏感性的检测结果 ,运用WHONET 5.4软件进行统计分析。结果分离的奇异变形杆菌主要分布在尿液(39.90%)和痰(11.40%)中,以及脓液(5.18%)、血液(1.5%)、胆汁(0.52%)和其他(40.93%,如伤口分泌物、宫颈分泌物、导管等)。2011-2013年奇异变形杆菌的ESBLs确证试验阳性率分别为9.30%、22.97%、28.95%,对奇异变形杆菌ESBLs阳性株耐药率较低的抗生素及其耐药率分别为:美罗培南(0.0%),亚胺培南(0.0%),替卡西林/克拉维酸(0.0%),头孢哌酮/舒巴坦(2.5%),哌拉西林/他唑巴坦(5.0%),头孢西丁(7.5%),丁胺卡那(15.0%)。结论奇异变形杆菌中产ESBLs菌株检出率较高,耐药性严重,应加强奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性的监控,有针对性地合理使用抗生素,避免耐药情况进一步加剧。
- 彭亮黄瑞娇肖柯玲夏少梅郭海波吴晓蔓
- 关键词：奇异变形杆菌抗生素耐药性
- 两种方法治疗浸润性膀胱癌的近期临床效果及远期生存率比较被引量：5
- 2014年
- 目的：观察保留膀胱的综合疗法及根治性膀胱切除术治疗浸润性膀胱癌的近期临床效果、远期生存率，为膀胱癌的临床治疗提供依据。方法对2007年10月～2010年10月采用局部肿瘤切除术＋化疗（保留组）及根治性膀胱切除术（全切组）治疗的59例浸润性膀胱癌患者的临床资料进行回顾性分析，比较两组近期临床效果、远期生存率，采用Cox回归分析法分析预后影响因素。结果两组均无围手术期死亡病例，保留组出血量少于全切组，手术时间、住院时间、留置导尿管时间及膀胱冲洗时间均短于全切组，并发症发生率显著低于全切组（P均＜0．05）；两组5年生存率无显著差异（P﹥0．05）。结论与根治性膀胱切除术比较，保留膀胱的综合疗法对浸润性膀胱癌的远期肿瘤学根治效果相似，且具有患者创伤小、术后恢复快及生存质量高等优点，值得临床借鉴。
- 赵铁彭亮王春晖
- 关键词：浸润性膀胱癌局部切除术膀胱全切除术生存率
- ppk1基因缺失对脑膜炎大肠杆菌K1株生物学功能的影响被引量：1
- 2014年
- 目的比较大肠杆菌K1株E44敲除ppk1基因后与野生株之间差异并探讨ppk1基因在E.coli K1株致脑膜炎机制中的作用。方法(1)将野生株与敲除株置于56℃2、4、6 min,以比较二者对热刺激的抵抗力差异;(2)利用电子显微镜直接观察以及采用经典的粘附、侵袭率定量实验比较二者对脑微血管内皮细胞(HBMEC)的粘附和侵袭能力;(3)将细菌与脑微血管内皮细胞共同孵育后,利用激光共聚焦观察二者诱导脑微血管内皮细胞的细胞骨架重排现象。结果与野生株E44相比,ppk1敲除株对于56℃热刺激的抵抗力明显下降;电子显微镜可以观察到,敲除株粘附和侵袭入HBMEC的数量均少于野生株,定量粘附、侵袭实验也进一步证实;借助激光共聚焦发现敲除株诱导HBMEC细胞骨架重排的能力要弱于野生株。结论 ppk1对于脑膜炎大肠杆菌K1株抵抗热刺激、粘附和侵袭HBMEC以及诱导HBMEC的细胞骨架重排具有重要作用。
- 彭亮潘嘉韵罗苏杨正慧黄慕芳曹虹
- 关键词：脑膜炎基因敲除
