辽宁省博士科研启动基金(20071057)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王金旭赵军李旋亮方永辉吴长德更多>>
- 相关机构：沈阳农业大学沈阳市畜牧兽医科学研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 辽宁绒山羊朊蛋白基因克隆与原核表达被引量：1
- 2011年
- 为了构建辽宁绒山羊朊蛋白(PrP)基因原核表达质粒,试验根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列及pEASY-E1载体多克隆位点设计引物,采用PCR方法扩增了辽宁绒山羊的朊病毒基因,将基因克隆到pEASY-E1载体中构建重组原核表达质粒,用重组质粒转化E.coli BL21(DE-3)感受态细胞,并用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE电泳鉴定表达的重组蛋白。结果表明:所得到的辽宁绒山羊朊病毒基因完整开放阅读框(ORF)全长为771个核苷酸,编码256个氨基酸的前体蛋白,核苷酸序列同源性为99.6%;共发现了5个碱基突变,即G126A、C414T、A428G、A652C和T718C,其中G126A、C414T为同义突变,A428G、A652C和T718C为异义突变;在pEASY-E1载体中成功克隆了PrP基因,并在E.coli中成功表达了重组的蛋白。说明辽宁绒山羊PrP基因可以在E.coli中表达。
- 龚商羽方永辉林荣峰王金旭赵军李旋亮吴长德
- 关键词：辽宁绒山羊多态性克隆原核表达
