国家自然科学基金(81200376) 作品数:11 被引量:8 H指数:2 相关作者: 徐开林 赵恺 尹玲玲 赵冬梅 田宇 更多>> 相关机构: 徐州医学院附属医院 徐州医学院 徐州医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目 中国博士后科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
移植物抗宿主病小鼠肠道病变与肠系膜淋巴结T细胞活化状况的动态分析 2013年 异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)是目前治愈恶性血液病的有效途径,但移植物抗宿主病(GVHD)仍然是allo.HSCT患者死亡的重要原因。肠道GVHD发生率高、症状重、对患者全身状况影响大,直接关系到患者的预后及生活质量。在GVHD小鼠肠道发生免疫病理损伤时,肠系膜淋巴结(MLN)中T细胞活化、增殖及亚群分化情况及其与肠道病理损伤相关性目前尚未明确。本研究我们利用小鼠异基因骨髓移植(BMT)后的GVHD模型,检测MLN中T细胞活化、分化及功能,分析其对GVHD肠道损伤的指示意义。 赵恺 黄栋 赵冬梅 陈翀 吴庆运 潘彬 曾令宇 李振宇 姚瑶 徐开林关键词:移植物抗宿主病 肠系膜淋巴结 T细胞活化 肠道病变 小鼠 免疫病理损伤 ^60Coγ射线致死剂量全身照射对小鼠脾脏和肠系膜淋巴结T细胞亚群表面免疫分子表达水平的影响 被引量:1 2016年 目的探讨小鼠接受^60Coγ射线致死剂量全身照射(TBI)后,脾脏和肠系膜淋巴结T细胞活化分子和黏附分子表达水平的变化。方法于2012年7月至10月,选择12只无特定病原体(SPF)级雄性BALB/c小鼠为研究对象。研究对象纳入标准:周龄为10~12周龄,体重为20-25g。按照完全随机法将其分为TBI组(接受致死剂量TBI)和对照组(未照射),每组6只。TBI组予^60Coγ放射源一次性照射(剂量率为0.66Gy/min,总剂量为7.5Gy)。于照射后第7天,脊椎离断处死两组小鼠,无菌条件下,取其脾脏、肠系膜淋巴结,研磨后采用密度梯度离心法收集单个核细胞。采用流式细胞术检测两组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结中,CD4^+T,CD8^+T,辅助性T细胞(Th)1及细胞毒性T细胞(Tc)1细胞表面CD44和CD62L的表达水平。并采用统计学方法比较两组小鼠上述免疫分子表达水平。结果照射后第7天,TBI组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结CD44^+CD4^+T细胞比例为(88.1±1.1)%和(76.7±1.8)%,均低于对照组的(95.0±1.1)%和(92.8±1.4)%,且差异有统计学意义(t=-11.01、-17.82,P〈0.05);而CD44^+CD8^+T细胞的比例分别为(99.0±0.3)和(92.5±1.7)%,均高于对照组的(88.7±0.8)%和(83.4±1.6)%,差异亦有统计学意义(t=31.15、9.54,P〈0.05)。TBI组小鼠肠系膜淋巴结CD44^+Thl比例为(4.1±0.4)%,高于对照组的(1.0士0.2)O,且差异有统计学意义(t=14.78,P〈0.05);而两组小鼠脾脏CD44^+Th1比例比较,差异无统计学意义(t=-0.93,P〉0.05)。TBI组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结CD44^+Tc1比例分别为(65.5士4.6)O和(26.6±2.8)%,较对照组的(41.8±1.5)%和(18.7±1.3)%增高,且差异有统计学意义(t=9.97、6.51,P〈0.05)。TBI组小鼠的脾脏和肠 田宇 赵冬梅 尹玲玲 阮素红 赵恺 徐开林关键词:全身照射 CD8阳性T淋巴细胞 CD4阳性T淋巴细胞 Th22细胞及其效应因子白细胞介素-22在移植物抗宿主病中研究进展 2013年 辅助性T细胞22(Th22)细胞属于CD4+T细胞亚群,其在感染性疾病、自身免疫性疾病以及肿瘤中作用已有研究。近来有研究证实Th22细胞在移植物抗宿主病(GVHD)中的发挥重要作用。笔者就近年来Th22细胞及其效应因子IL-22在GVHD中研究进展作一概述。 赵冬梅 赵恺 徐开林关键词:移植物抗宿主病 白细胞介素-22 辅助性T淋巴细胞 特异性敲除T细胞中Blimp-1对小鼠脾淋巴细胞数量及功能的影响 2015年 目的研究B淋巴细胞诱导成熟蛋白(Blimp-1)对脾脏淋巴细胞数量及功能的影响。方法实验小鼠分为T细胞Blimp-1敲除组(Blimp-1CKO)和对照组(wild-type,WT)。获取小鼠脾脏单个核细胞并计数,流式细胞仪检测T、B淋巴细胞各亚群细胞数、比例及其分泌的细胞因子、表面受体CCR7、S1P1表达。结果与对照组小鼠相比,Blimp-1CKO小鼠脾脏单个核细胞数,T、B淋巴细胞总数及CD4^+T、CD8^+T、CD19^+CD5^+CD1d^+B细胞绝对数均明显升高(P〈0.05),Blimp-1CKO小鼠CD19^+CD5^+B细胞的数量和比例均显著上升(P〈0.01)。Blimp-1CKO组CD4^+T和CD8^+T细胞分泌的IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-2水平较对照组增高(P〈0.05)。Blimp-1CKO小鼠CD8^T细胞表面的CCR7表达较对照组降低(P〈0.05),而两者S1P1表达水平差异无统计学意义。结论Blimp-1对T细胞的数量、亚群平衡、表型、功能的维持都具有重要作用,特异性敲除T细胞Blimp-1对淋巴细胞的影响不仅局限在T细胞,还影响到B细胞亚群。 阮素红 赵恺 田宇 袁姝姝 夏洁云 陈翀 徐开林关键词:T淋巴细胞 B淋巴细胞 白细胞介素22对移植物抗宿主病小鼠胸腺的修复作用及功能的影响 2014年 目的 探讨白细胞介素22(IL-22)对异基因骨髓移植(allo-BMT)后并发移植物抗宿主病(GVHD)小鼠胸腺的修复作用及其对胸腺免疫功能的影响.方法 分别以6~8周龄、雄性C57BL/6和BALB/c小鼠为供受鼠,建立GVHD模型.实验分为正常对照组、GVHD小鼠注射IL-22组(BS+IL-22)、GVHD小鼠注射PBS组(BS+PBS).采用锥虫蓝染色法检测移植后不同时间点小鼠胸腺细胞数量.采用流式细胞术检测胸腺T细胞各亚群的比例、分泌IFN-γ和IL-17效应性T细胞及CD4+T和CD8+T细胞比例.结果 +14d时BS+IL-22组小鼠的胸腺细胞总数[(14.6±5.1)×10^4]明显高于BS+PBS组[(6.2±2.9)×10^4];BS+IL-22组小鼠胸腺细胞数量随移植时间延长持续增多,到+21和+28 d细胞数量与正常对照组小鼠相比差异无统计学意义,且仍高于BS+PBS组.小鼠allo-BMT后注射IL-22对胸腺成熟CD4+和CD8+T细胞的比例无影响,但可显著提高未成熟CD4+CD8+T细胞亚群的比例.IL-22可上调胸腺IFN-γ+CD4+T细胞[(2.42±0.75)%]和IFN-γ+CD8+T细胞[(5.44±0.47)%]比例,而对IL-17+CD4+T细胞和IL-17+CD8+T细胞无影响.结论 IL-22可加速allo-BMT后小鼠胸腺的修复过程,并增强胸腺CD4+和CD8+T细胞分泌IFN-γ的能力. 赵恺 赵冬梅 尹玲玲 潘彬 徐开林关键词:白细胞介素22 骨髓移植 移植物抗宿主病 髓细胞白血病干细胞表面标志蛋白白细胞介素-1辅助蛋白及其在血液系统疾病中的研究进展 被引量:1 2015年 白细胞介素(IL)-1受体辅助蛋白(IL-1RAP)已被证实作为IL-1受体Ⅰ型(IL-1R Ⅰ)的共同受体,参与IL-1的效应发挥.最新研究表明,IL-1RAP是新鉴定的髓细胞白血病干细胞(LSC)表面标志蛋白,且IL-1RAP抗体,可通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用(ADCC),杀灭慢性髓细胞白血病(CML)患者体内的LSC,而不损伤正常造血干细胞(HSC).另有研究发现,IL-1RAP表达水平与急性髓细胞白血病(AML)临床预后密切相关,IL-1RAP表达水平亦是预测骨髓增生异常综合征(MDS)危险度的潜在指标.笔者拟就髓细胞白血病LSC表面标志蛋白IL-1RAP及其在血液系统疾病中的研究进展进行综述如下. 尹玲玲 赵恺 徐开林关键词:白血病干细胞 白血病 TIRC7在慢性髓系白血病患者单核细胞中的表达 2018年 目的探讨T细胞免疫应答cDNA7(TIRC7)在慢性髓系白血病(CML)患者单核细胞(MNC)中的表达水平。方法收集24例CML患者(CML组)及6例健康志愿者(对照组)的新鲜骨髓或外周血,采用琼脂糖凝胶电泳及实时荧光定量PCR法检测TIRC7基因在MNC中的表达水平。结果应用TIRC7引物可扩增出大小约210bp的片段,与理论值相符。CML组TIRC7扩增条带亮度较弱,而对照组TIRC7条带明亮。CML组TIRC7相对表达量为0.085(0.032,0.197),低于对照组的0.960(0.715,2.027)(P<0.01)。结论 TIRC7在CML患者MNC中的表达水平较低,可能在CML的发生、发展中起重要作用。 尹玲玲 朱锋 赵恺 徐开林关键词:慢性髓系白血病 单核细胞 抗人IL1RAP单克隆抗体重、轻链基因的克隆及重组嵌合受体的构建 被引量:1 2015年 目的:克隆抗人IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)单克隆抗体(McAb)可变区基因及构建嵌合抗原受体(CAR)重组质粒。方法:采用RACE、重叠延伸PCR技术,从3H6E10、10D8A7杂交瘤细胞总RNA中克隆扩增IL1RAP McAb的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)段DNA,并连接成IL1RAP特异性单链抗体可变区基因片段(scFv)。将hCD8α跨膜段、hCD137胞内段、hTCRζ链、hCD8α引导肽(Signal peptide)、scFv-anti-IL1RAP连入载体LV-Lac,并与辅助载体pMD2.G、psPAX2共同转染293FT细胞,包装获得病毒颗粒。结果:获得了两种抗人IL1RAP McAb的VH及VL基因,3H6E10 VH和VL基因全长402 bp和393 bp,可分别编码134、131个氨基酸;10D8A7 VH和VL基因全长423 bp和381 bp,可分别编码141、127个氨基酸。构建重组表达载体LV-3H6E10 scFv-ICD、LV-10D8A7 scFv-ICD(ICD:CD8α跨膜段-CD137胞内段-TCRζ链)后,经测序证实目的片段序列正确。重组质粒转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。结论:本实验成功构建了能特异性结合人IL1RAP蛋白的嵌合受体,为以后制备IL1RAP-CAR杀伤性T细胞疫苗打下基础。 尹玲玲 阮素红 田宇 赵恺 徐开林关键词:基因克隆 重组质粒 Th17细胞及Treg在急性移植物抗宿主病中的研究进展 被引量:1 2013年 移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)的主要并发症。T细胞诱导和活化是GVHD发生的中心环节。辅助性T细胞(Th)17细胞及调节性T细胞(Treg)作为新近鉴定的T细胞亚群,两者之间存在相互调节关系,并且在GVHD中发挥了重要作用。笔者现就近年来Th17细胞和Treg细胞及两者在aGHVD中相互调节作用的研究进展作一综述。 赵冬梅 赵恺 徐开林关键词:移植物抗宿主病 TH17细胞 IL1RAP单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2 2015年 目的:制备针对白血病干细胞(LSC)表面标志蛋白IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。方法:杂交瘤细胞3H6E10、10D8A7种植BALB/c小鼠腹腔,收获腹水,纯化后得到特异性抗人IL1RAP的单克隆抗体。分别应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Nondenaturing-PAGE)、ELISA和Western blot法对纯化单克隆抗体分别进行抗体纯度、效价和敏感性检测。结果:获得了两种IL1RAP纯化单克隆抗体,命名为3H6E10 Mc Ab和10D8A7 Mc Ab,其纯度分别为95%和94%;两种纯化的单克隆抗体效价为1∶81000,且能特异性识别IL1RAP纯化蛋白、正常人及白血病病人的细胞内源性蛋白。结论:本研究成功制备了能特异性结合人IL1RAP的纯化单克隆抗体,为将来有效清除体内LSC提供了新途径。 尹玲玲 阮素红 田宇 徐开林 赵恺关键词:单克隆抗体 白血病干细胞