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人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备: 2012年; 为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示:蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105,腹水的抗体效价为1×107;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。; 吴俊文许凤熊璎珞鲁健邱义兰刘胜姿李烨刘如石; 关键词：原核表达电洗脱单克隆抗体 Β-ACTIN

一株高效稻草纤维素降解真菌的筛选与鉴定被引量：4: 2011年; 采用刚果红羧甲基纤维素钠培养基法、滤纸条降解法和胞外酶活性测定法从长白山原始森林的腐烂枯木和落叶腐质土中筛选一株高产纤维素酶的真菌,结合菌落形态学和分子生物学方法鉴定该菌株为产黄青霉,命名为CBS-1.滤纸崩解实验说明在24 h该菌对滤纸就具有明显的崩解能力,6 d后滤纸的失重率达到24.1%;以稻草粉为底物发酵120 h后,其胞外纤维素酶活性达到33.6 mkat/L,其活性高于已经报道的菌株,是一株具有研究开发潜力的纤维素酶生产菌株.; 熊格生刘志吴莎莎卢向阳刘如石; 关键词：水稻秸秆纤维素酶降解微生物

戊型肝炎病毒IV型衣壳蛋白缺失突变体原核表达与性质: 2014年; 采用PCR技术扩增基因IV型HEV(Hepatitis E Virus,HEV)开放阅读框2(Open Reading Frame 2,ORF2)的缺失突变体(aa384-606),亚克隆到表达载体后,转化到大肠杆菌中进行诱导表达,表达蛋白命名为rP24。SDS-PAGE和免疫印迹实验表明,rP24获得了高效表达,且和单克隆抗体15B2具有强的反应活性。rP24经过包涵体洗涤、溶解复性、离子交换层析和分子筛层析纯化后,免疫印迹实验表明,纯化rP24能与抗HEV ORF2中和单克隆抗体8C11以及HE(Hepatitis E,HE)阳性血清发生很强的免疫反应性,说明rP24上具有构象型中和表位,模拟了HEV衣壳蛋白的空间结构。动态光散色测量结果表明,rP24的平均水化半径为7.48 nm;纯化rP24免疫动物实验表明,rP24具有强的抗原性,小鼠阳转周期短,抗体持续时间长;纯化rP24作为包被抗原检测HE阳性血清和阴性血清,结果显示rP24对HE阳性血清和阴性血清检出率与北京万泰公司的抗HEV-IgG检测试剂盒的检出率一致。这些实验结果说明,具有较好免疫反应性和免疫原性的rP24获得了高效表达,该蛋白模拟了天然病毒衣壳蛋白的中和表位,为进一步研究基因I型和基因IV型HEV感染不同宿主细胞差异的分子机制奠定了基础。; 邱义兰吴俊文邱果李桑李烨刘胜姿刘如石; 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达免疫反应性免疫原性

离子液体-微波辅助提取多花黄精多糖工艺研究被引量：20: 2016年; 目的:研究多花黄精多糖的离子液体-微波辅助提取的最佳工艺。方法:以多花黄精多糖含量为指标,使用单因素和正交试验优化多糖提取工艺。结果:离子液体-微波辅助提取多花黄精多糖的最佳工艺为:多花黄精除杂后的粉末加入0.6 mol/L的离子液体、微波功率320 W、提取125 s,提取率为12.79%(n=5)。结论:离子液体-微波辅助提取法提取多花黄精多糖稳定、可行。; 粟敏陈琳龙昱黄春霞; 关键词：单因素试验正交试验

抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究被引量：1: 2014年; 人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。; 邱果许凤邱义兰廖旻晶李烨刘胜姿李桑刘如石; 关键词：人巨细胞病毒 PP65蛋白杂交瘤细胞单克隆抗体

戊型肝炎病毒研究新进展被引量：5: 2011年; 戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是引起全球多地区大规模流行和散发病例的急性病毒性肝炎的病原体,发展中国家尤为突出;我国是戊型肝炎(hepatitis E,HE)流行的高发区.HE是一种人畜共患病,猪是人HEV病毒的主要储库,因而HE已成为一个全球性的的公共卫生问题.对HEV的病毒学和基因组特征、临床表征、流行病学、主要抗原表位以及HEV诊断试剂和疫苗研制的进展进行了综述.; 吴俊文刘胜姿李烨许凤吴莎莎邱义兰刘如石; 关键词：戊型肝炎病毒人畜共患病流行病学诊断试剂疫苗

人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及活性鉴定被引量：3: 2013年; 以病毒全基因组为模板,通过PCR技术扩增HCMV pp65基因编码序列,其产物连接到pMD18-T质粒,酶切并回收目的片段后克隆到表达载体pTO-T7,然后将重组质粒pTO-T7-pp65转化大肠杆菌ER2566,大量表达后将重组蛋白进行质谱法分析鉴定,再利用Western blot以及间接ELISA进行重组蛋白的活性及抗原性鉴定.结果显示:通过SDS-PAGE鉴定可知,大肠杆菌可能表达出了重组蛋白,质谱分析结果说明了重组蛋白为pp65蛋白,具有极高可信度,其相对分子质量约为63 kD,从Western blot和间接ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)的结果可知,pp65蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性与免疫原性,为制备相应的抗原诊断单克隆抗体打下了基础,同时也为开发HCMV IgG快速诊断ELISA试剂盒提供了可选原料.; 许凤邱义兰邱果李桑何赛郑姣李小曼刘如石; 关键词：免疫反应性免疫原性

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湖南省高等学校科学研究项目(10B060)

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