国家自然科学基金(31001065)
- 作品数：21 被引量：80H指数：5
- 相关作者：宋战昀杨倩郑言王振国王向辉更多>>
- 相关机构：吉林出入境检验检疫局吉林农业大学甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 核酸适配体在病毒检测中的研究进展被引量：5
- 2013年
- 核酸适配体指利用SELEX技术筛选出的寡聚核苷酸片段,它可以特异性地识别靶标并与之结合,且该技术具有成本低、亲和力高、特异性强等优点。目前,核酸适配体已广泛地应用于基础研究、临床诊断、疾病治疗等多领域,并且显示出巨大的应用潜力。结合近年来核酸适配体在病毒检测研究领域的最新研究成果,凭借适配体独特的性质在检测方面发挥的重要作用,综述了核酸适配体在人类免疫缺陷病病毒、肝炎病毒、流感病毒、SARS病毒等病毒检测方面的最新研究进展,展望了核酸适配体在病毒检测领域的发展趋势。
- 李敏思伏小平宋战昀付志金
- 关键词：SELEX病毒适配体
- 黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株5'UTR的序列分析
- 2015年
- 蜜蜂黑蜂王台病毒（Black queen cell virus,BQCV）是引起蜜蜂蜜蜂黑蜂王台病的病原体,主要侵染蜜蜂蜂王幼虫。BQCV基因组为单正链RNA,包括5＇端的ORF 1和3＇端的ORF 2两个开放阅读框。分别编码非结构蛋白和结构蛋白。本实验室首次成功分离鉴定得到中国首株BQCV毒株,命名为中国BQCV-JL1株。该株全长为8 358 nt。【目的】本文主要研究该株核苷酸序列位置为1~1 124 nt的片段,该段序列的1~545 nt为该毒株的5＇UTR区域。【方法】通过Blast及DNAStar等软件对核苷酸及氨基酸序列进行分析。【结果】5＇UTR区域的同源性为94%~99%,为高度保守序列。【结论】经Mega5软件作多重序列对比分析得知,该中国BQCV-JL1株的5＇UTR区域与其他毒株差异性很大,经分析推断原因为碱基的缺失与碱基置换。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 关键词：RT-PCR
- 检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立被引量：2
- 2016年
- 为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒（SBV）的环介导等温扩增方法（LAMP）,本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列（AF092924.1）设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性。反应结束后在反应体系中加入SYBR Green I的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×10~1拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致。本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测。
- 王向辉郑言隋佳辰张健杨倩宋战昀王振国
- 关键词：环介导等温扩增技术
- 蜜蜂残翼病毒中国DWV-JL1株衣壳蛋白基因序列分析
- 2015年
- 蜜蜂残翼病毒是引起蜜蜂残翼病的病原体。吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心将成功分离鉴定得到的中国首株蜜蜂残翼病毒毒株命名为“中国DWV—JL1株”，全长9826nt。本文主要研究中国DWV—JL1株核苷酸序列位置为2880～3792nt之间的片段，该段序列为编码衣壳蛋白的一部分，为相对保守序列。通过RT—PCR、克隆及质粒双酶切鉴定分析，得到一段大小约900bp的片段。通过BLAST、进化树及残基化分析，有96％-97％的同源性。氨基酸序列差异性仅为7％。该段序列与韩国株的亲缘关系最近，而与欧洲和美洲各国家获得的毒株序列亲缘关系较远，推测中国DWV—JL1株起源于亚洲。
- 张健杨倩宋战昀郑言王向辉隋佳辰王全凯王振国牟峻
- 关键词：RT-PCR进化树衣壳蛋白
- 黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：1
- 2015年
- 收集吉林蜂场的蜜蜂蜂蛹病料的RNA作为扩增模板,依据GenBank公布的黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)的全基因组序列,自行设计了10对引物,运用RT-PCR首次获得中国BQCV毒株的全基因组序列,命名为中国BQCV-JL1株。其全基因组序列由8 358个碱基组成,与GenBank公布的其他6株BQCV毒株的全基因组序列相比,同源性为86%~93%。中国BQCV-JL1株ORF 1的位置为546nt^4 676nt(4 131nt),ORF 2位于5 750nt^8 203nt,两个ORFs之间存在一段长为543nt(4 891nt^5 433nt)的ORF3。中国BQCV-JL1株第一个基因功能区ORF1′的位置为546nt^5 429nt,包含ORF 1和ORF 3。在ORF2之前存在内部核糖体进入位点(IRES),其末尾3碱基为CCU(5 642nt^5 644nt),为促进ORF 2翻译的起始密码子,中国BQCV-JL1株第二个基因功能区ORF2′的位置为5 642nt^8 203nt。中国BQCV-JL1株与Hungary 10(EF517515)同源性最高(93%),且分析核苷酸序列和氨基酸序列,与South Korea(JX149531)株最接近,表明中国BQCV-JL1株与South Korea(JX149531)株均有可能来自欧洲。中国BQCV-JL1株与其他6株全基因组序列在ORF位置划分上存在差异,其原因是部分位置发生基因突变。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 关键词：全基因组序列RT-PCRRDRP
- 羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺验证被引量：3
- 2016年
- 目的对羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺进行验证。方法模拟生产条件,选择猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、伪狂犬病病毒(pseudo rabies virus,PRV)、鸭肝炎病毒Ⅰ型(duck hepatitis virus-Ⅰ,DHV-Ⅰ)、牛滤过性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)作为指示病毒,采用高温碱化和醇洗灭活/去除病毒,Karber法计算病毒滴度,荧光PCR检测病毒灭活/去除效果。结果 3批甲壳素经碱化反应处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.736、≥6.597、≥6.138和≥5.806 log TCID50/0.1 ml;3批羧甲基壳聚糖经醇洗处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.763、≥6.569、≥6.167和≥5.587 log TCID50/0.1 ml。碱化反应与醇洗处理前感染PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ样品荧光PCR检测平均Ct值分别为23.465、23.387,24.873、24.706,26.887、25.376,27.386、24.629,处理后样品的荧光PCR检测平均Ct值均>40。结论羧甲基壳聚糖经高温碱化和醇洗反应处理均能有效灭活病毒,保证了产品的安全性。
- 杨倩宋战昀张旭光李敏思王向辉隋佳辰张健郑言魏春艳王振国
- 关键词：甲壳素羧甲基壳聚糖
- 新城疫病毒血凝素蛋白RNA适配体的筛选及活性研究被引量：5
- 2014年
- 核酸适配体与单克隆抗体相比具有更高的分辨率,能识别配体间一个基团的细微差别,且所需的结合活性位点更小。本试验通过SELEX技术,体外经过12轮筛选获得了能够与F48E9株新城疫病毒特异性结合的3个RNA适配体,命名为FHN12-45-3、FHN12-36-6和FHN12-19-9。RNA适配体的二级机构预测结果显示,所筛选获得的RNA适配体空间结构以外环、内环、发夹环及突起结构为主。特异性试验结果显示,适配体FHN12-45-3经ELISA和Dot-blot试验证实能够区分不同株的新城疫病毒。生物学活性试验结果显示,适配体FHN12-45-3能够减少4个单位的F48E9株病毒血凝效价,初步表明适配体与F48E9株病毒可能的活性作用位点在血凝素蛋白上,在鸡胚成纤维细胞培养体系中适配体FHN12-45-3能够减少84.62%的F48E9株病毒蚀斑,荧光定量RT-PCR方法检测适配体FHN12-45-3能够减少培养体系中77.73%病毒载量,表明筛选的RNA适配体在细胞水平能够有效的抑制F48E9株新城疫病毒的复制。
- 李敏思宋战昀冯新杨倩郑言魏春艳王伟利王振国付小平
- 关键词：新城疫病毒血凝素蛋白SELEX
- Taq Man探针实时荧光PCR方法检测黑蜂王台病毒的方法建立和应用被引量：3
- 2015年
- 为了建立实时荧光PCR方法以检测蜜蜂黑蜂王台病毒,试验依据Taq Man荧光标记探针技术原理,针对蜜蜂黑蜂王台病毒编码衣壳蛋白的保守序列区域,设计出1对特异性引物和1条探针,建立了一种快速检测黑蜂王台病毒(BQCV)的荧光PCR方法,对2005年从12省收集到的18种蜜蜂病料进行检测,确定各地区感染BQCV情况。结果表明:该方法对蜜蜂黑蜂王台病毒有较好的特异性,与其他蜜蜂病毒之间均无交叉反应;检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μL阳性质粒,可对低病毒含量的样品进行准确检测;变异系数为1.3%;应用该方法对2005年从12省收集到的18种蜜蜂病料进行检测,4 h内即可报告检测结果。说明该方法具有快速、灵敏、特异及重复性好等优点,适用于蜜蜂中黑蜂王台病毒的快速检疫。
- 杨倩宋战昀石建平张健王振国孟庆峰崔焕忠王全凯李敏思郑言
- 关键词：TAQ荧光PCR检测
- 蜜蜂黑蜂王台病研究进展被引量：3
- 2015年
- 蜜蜂是自然界中最重要的授粉昆虫,既能维护自然生态系统的多样性,又能保持农业生态系统的增产效应。但近年来蜜蜂疫病频发给养蜂业带来巨大的损失。黑蜂王台病自1955年首次报道以来,目前呈世界性分布,主要感染蜂王幼虫和蛹,引起虫体变暗变黑,甚至导致整个巢房壁变黑,可引发蜜蜂大量死亡。该病为季节性流行,且常呈隐性感染,可通过水平和垂直途径传播,微孢子虫不仅作为媒介生物在该病的传播中起到重要作用,同时微孢子虫感染蜜蜂后会导致隐性感染黑蜂王台病毒的蜜蜂迅速发病致死。黑蜂王台病毒宿主范围广,不仅可以感染多种蜂属,而且还可感染蜘蛛、蜈蚣等节肢动物。该病毒可与其他蜜蜂病毒发生合并感染。本文对黑蜂王台病的发生、流行过程、地域分布、传播途径等方面的研究进展进行综述。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 黑蜂王台病毒基因组结构研究进展被引量：1
- 2015年
- 蜜蜂病毒被认为是主要威胁蜜蜂健康的因素之一,是引发蜜蜂蜂群大量死亡及蜂群衰竭的关键因素[1-7].首次鉴定出蜜蜂病毒并认定其为新的感染蜜蜂的病原体是在20世纪初期.目前,已知可感染蜜蜂的病毒高达20种,其中包括18种RNA病毒,其中的某些病毒已在全球范围内广泛传播[8-10].蜜蜂病毒能够影响蜜蜂形态、生理和行为,并与弱群及蜜蜂死亡息息相关[11].蜜蜂黑蜂王台病是由黑蜂王台病毒（Black queen cell virus,BQCV）引起的一种蜜蜂蜂王幼虫病害.BQCV由Baliey等于1977首次报道,该病毒是从蜂王幼虫和封盖蜂王蛹中分离得到,感染的蜂王蛹死亡并且其颜色由棕色变暗变黑,随后蜂房壁开始变黑,BQCV的名称也因此而来[12].
- 杨倩宋战昀张健石建平崔焕忠王振国孟庆峰王全凯李敏思郑言王向辉
- 关键词：RNA病毒基因组结构黑蜂蜂王幼虫VIRUS
