国家自然科学基金(31160016)
- 作品数：7 被引量：39H指数：4
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- 多不饱和脂肪酸与深黄被孢霉低温适应性的关系(英文)被引量：7
- 2015年
- 低温生长的适应是一个复杂的过程,涉及细胞的分子生物学和生物化学等很多方面.前期的研究表明,产油真菌——深黄被孢霉（Mortierella isabellina）M6-22能在5-35℃的温度范围生长.本研究以其为研究对象,分析温度下降引起的M6-22细胞膜流动性、多不饱和脂肪酸含量以及多不饱和脂肪酸合成相关基因的mRNA转录水平的变化.结果显示,在15℃条件下,M6-22的细胞膜流动性明显降低,而多不饱和脂肪酸含量显著提高,由30℃时20.85%增加到15℃时的31.04%,而且15℃时Δ^12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平提高了近3倍,但是Δ^6-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平基本不变.这些研究结果表明,深黄被孢霉M6-22可能通过提高Δ^12-脂肪酸脱氢酶基因的表达水平,增加膜脂中多不饱和脂肪酸含量,维持低温条件下细胞膜的流动性来促进细胞低温环境的适应.本研究将为研究低温条件下多不饱和脂肪酸合成调节机制以及进一步多不饱和脂肪酸工业化生产打下基础.
- 张琦杨昭杰赵汝丽魏云林林连兵季秀林
- 关键词：深黄被孢霉多不饱和脂肪酸膜流动性
- 多不饱和脂肪酸与红冬孢酵母低温适应性的关系研究被引量：5
- 2014年
- 以一株产油酵母——红冬孢酵母(Rhodosporidium kratochvilovae)YM25235作为出发菌株,分析其低温生长适应性与细胞膜流动性、膜脂脂肪酸含量的变化和多不饱和脂肪酸合成关键基因——Δ12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA表达水平的关系.结果显示,YM25235在5～35℃温度条件下均能生长,最适生长温度为30℃.低温条件下细胞膜流动性明显降低,但是多不饱和脂肪酸质量分数由从30℃时的24.35%增加到15℃时的40.32%,而且15℃时Δ12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA水平提高了3.4倍.结果说明低温条件下细胞膜流动性下降,导致多不饱和脂肪酸合成相关基因表达水平提高,使得细胞膜脂中多不饱和脂肪酸含量增加,促进了菌株低温生长适应性.
- 何仕武杨昭杰林连兵季秀玲魏云林张琦
- 关键词：多不饱和脂肪酸
- 多不饱和脂肪酸与粘红酵母低温适应性的关系被引量：4
- 2014年
- 以一株粘红酵母(Rhodotorula glutinis)YM25079为研究对象,分析其低温生长适应性与细胞膜流动性、膜脂脂肪酸含量的变化以及多不饱和脂肪酸合成关键基因——Δ12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平的关系.结果显示,YM25079在5-30℃温度条件下均能生长,最适生长温度为15℃.在15℃培养条件下,YM25079细胞膜流动性没有明显降低,但是多不饱和脂肪酸含量显著提高,由25℃时29.4%增加到15℃时的55.39%,而且15℃时Δ12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平提高了5倍.这些研究结果表明,粘红酵母YM25079的低温生长适应性可能是通过提高多不饱和脂肪酸合成相关基因的表达水平,增加膜脂中多不饱和脂肪酸含量,维持低温条件下细胞膜的流动性来形成的.
- 杨昭杰李凌彦胡彬彬林连兵魏云林季秀玲张琦
- 关键词：粘红酵母多不饱和脂肪酸膜流动性
- 一种高效的真菌总蛋白质提取方法被引量：12
- 2013年
- 蛋白的提取是蛋白质组学研究的首要步骤,其质量的好坏直接影响蛋白质表达分析研究的开展及其结果的准确性。为了从深黄被孢霉M6-22中提取细胞总蛋白质并进一步进行蛋白组学等一些相关研究,采用五种已报道的蛋白质提取方法分别提取深黄被孢霉M6-22的总蛋白质,以蛋白质浓度和SDS-PAGE结果分析相结合的方法比较提取方法。结果显示,其中一种方法提取的蛋白质浓度相对较高而且蛋白质条带丰度最高,进一步对该方法进行了改良,所获得蛋白质的浓度可达约2.99mg/ml。改进后的方法操作步骤简单,蛋白质条带丰度更高。采用改进后的方法提取其他五种真菌的总蛋白质,结果显示其对其他真菌也有很好的提取效果,说明可作为一种真菌总蛋白质的高效提取方法。
- 胡彬彬林连兵魏云林季秀玲张琦
- 两个苹果酸酶的表达和酶学性质分析
- 2019年
- 为了探讨深黄被孢霉M6-22中不同苹果酸酶的性质,研究从深黄被孢霉M6-22中克隆得到苹果酸酶MIME1基因并在大肠杆菌BL21中诱导表达,经镍柱纯化和酶活分析表明所纯化蛋白能催化苹果酸脱羧生成丙酮酸和NADPH,具有苹果酸酶的特性.同时与前期获得的MIME2进行酶学性质分析.结果显示,重组表达的MIME1和MIME2都具有苹果酸酶的性质,但MIME1的最适温度和最适pH分别为28℃和7.5,MIME2的最适温度和最适pH分别为30℃和5.8,而且在最适温度和最适pH条件下所纯化的MIME1和MIME2酶活分别为292.84U/mg和235.14U/mg.进一步酶学性质分析表明,Mg^2+、Co^2+、Cu^2+、Zn^2+可以提高MIME1的活性,其中Cu2+激活作用最为明显,而EDTA、Ca^2+、Mn^2+对MIME1的活性则有抑制作用;Mn^2+、Mg^2+、Co^2+和Ca^2+对MIME2表现出不同程度的激活作用,其中Mn2+激活作用最为明显,而EDTA、Cu2+和Zn2+则对MIME2的酶活表现出明显的抑制作用.这些分析结果表明,同一种细胞中不同的苹果酸酶具有不同的酶学性质,这可能与它们执行不同的生物学功能有关.通过异源表达和分离纯化,研究初步揭示了2个深黄被孢霉M6-22苹果酸酶的一些酶学性质特点,这为以后深入研究该苹果酸酶结构和功能以及与M6-22菌株油脂积累的关系提供了理论依据和参考.
- 李珊杨晓霞季秀玲林连兵魏云林张琦
- 关键词：深黄被孢霉苹果酸酶基因克隆酶学性质分析
- 低温微生物低温适应性的机制及其应用前景被引量：10
- 2012年
- 低温微生物由于长期生活在寒冷的环境中,在自然选择的作用下形成一套独特的与低温环境相适应的细胞结构和分子机制。从细胞结构、组成的变化,以及分子水平等角度阐述了近年来国内外有关低温微生物低温适应性机制的研究进展;探讨了低温微生物在环境净化、食品化工和医药等行业中的广泛应用前景。
- 周巧张琦魏云林林连兵季秀林
- 关键词：低温微生物分子机制
- 深黄被孢霉Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因RNAi表达载体的构建被引量：1
- 2012年
- 深黄被孢霉是国内研究生产γ-亚麻酸(γ-linolenic acid,GLA)和花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)等多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid,PUFA)的主要产油丝状真菌.前期的实验结果表明,深黄被孢霉M6-22具有潮霉素抗性,而且目前也没有关于深黄被孢霉营养缺陷型菌株的报道,限制了一些基于深黄被孢霉菌株进行遗传操作的研究.研究以红色荧光蛋白DsRED基因作为报告基因,构建能同时用于丝状真菌外源基因和RNAi表达载体pS-DsRED.通过PEG/CaCl2原生质体转化法将pS-DsRED导入深黄被孢霉M6-22中进行表达,成功获得产粉红色的阳性菌落,并在此基础上构建了深黄被孢霉Δ12-脂肪酸脱氢酶基因RNAi表达质粒pSREDMID12RNAi,为下一步目的基因的敲除和基因功能分析奠定了基础.
- 丁丽娜胡彬彬林连兵季秀玲魏云林张琦
- 关键词：深黄被孢霉
