国家自然科学基金(30571390)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
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- 猪圆环病毒2型感染小鼠脾脏内CD4^+CD25^+调节性T细胞的动态变化被引量：1
- 2010年
- 为分析猪圆环病毒2型(PCV2)感染小鼠后脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)占CD4+T细胞比例的动态变化,探讨Tregs与PCV2感染的关系,本研究选择清洁级昆明小鼠60只,随机分成实验组和对照组,实验组腹腔接种PCV2,分别在接种后第0 d、5 d、10 d、20 d、30 d和60 d取脾脏制备单细胞悬液,用FITC-CD4和PE-CD25单克隆抗体标记Tregs,采用流式细胞仪检测Tregs占总CD4+T细胞百分比的动态变化。结果表明感染组小鼠脾细胞中Tregs百分比从第5 d开始逐步上升,第20 d达峰值后逐渐下降,感染组Tregs百分比第10 d、20 d、30 d时显著高于对照组(p<0.05),但第60 d两组间差异不显著(p>0.05)。试验结果证明PCV2感染昆明小鼠后,可在小鼠脾脏内诱导明显的Tregs增殖,这些增殖的细胞可能在PCV2感染中发挥免疫抑制作用。
- 许道军余兴龙邓治邦袁安文王乃东薛立群
- 关键词：PCV2CD4+CD25+调节性T细胞小鼠
- 猪圆环病毒2型基因1群B亚簇的体外培养特征被引量：1
- 2013年
- 为探寻猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中的复制特征,将PCV2基因1群B亚簇(PCV2–1B)病毒感染PK15均质细胞A10,待感染细胞层长满,对其进行连续传代;对第5、6代细胞进行维持培养,即在细胞长满后隔天更换培养基,以维持细胞良好的生长;用第10代带毒细胞的培养液接种A10细胞,并进行换液维持培养。PCR与定量PCR检测结果表明,PCV2–1B病毒感染A10细胞后,其病毒基因组的含量在感染细胞长满之前(约96 h)随着细胞的增多而上升,同时也随着传代次数的增多而上升;换液维持培养的细胞,在维持10 d后PCV2–1B病毒基因组的含量能维持在107～108拷贝/mL,而第10代带毒细胞的培养液接毒A10之后,病毒基因组含量随细胞增多而上升,在达到约108拷贝/mL后,病毒基因组含量维持在107～108拷贝/mL。
- 罗维赵墩吴海超蒋大良余兴龙
- 关键词：猪圆环病毒2型PK15细胞毒株
- 适合猪圆环病毒2生长的PK15均质细胞株的构建被引量：5
- 2013年
- 为筛选出PCV2培养滴度最高的PK15细胞克隆株,采用稀释法从PK15混合细胞中分离单细胞克隆株,获得的细胞克隆用于接毒试验,即用同步接种法将猪圆环病毒2(PCV2)病毒细胞混合液以1∶100的比例接种单克隆细胞,接毒后经PCR与定量PCR检测得出A10细胞克隆培养PCV2,获得的病毒含量最高。将A10细胞进行第2轮细胞克隆,之后用同步接种法和异步接种法将PCV2感染A10细胞,并检测A10细胞接毒后的PCV2 DNA含量,2种接毒方法获得的最高PCV2基因组的拷贝数分别为3.0×109、6.2×109/mL,高于用PK15混合细胞培养PCV2所获得的最高PCV2基因组拷贝数(107/mL)。综合以上结果,构建的PK15均质细胞克隆株比PK15混合细胞更适合PCV2的培养。
- 罗维赵墩蒋大良余兴龙
- 关键词：PK15细胞细胞克隆定量PCR
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究被引量：6
- 2007年
- 为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a(+)中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后,所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-21。PCV-2 Cap基因3’端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 侯强红余兴龙李微李润成罗维刘浩尹恒刘忠华
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫原性
- 病料中猪圆环病毒(PCV)的分型检测及PCV2型不同毒株的培养被引量：1
- 2013年
- 对湖南各地区送检猪病料进行了猪圆环病毒(PCV)的PCR检测,并对PCV阳性病料的DNA进行了猪圆环病毒1(PCV1)与PCV2的PCR分型检测。结果表明:送检的192份样品中,有117份为PCV阳性;117份PCV阳性样品全部含有PCV2的DNA,其中2份既有PCV2也有PCV1的DNA;对病料中的PCV2进行克隆,获得的序列均为PCV2–1基因组,对其中2株毒株的序列进行感染性克隆病毒的构建,拯救的病毒命名为PCV2(2–1)和PCV2(4–1);对PCV2(2–1)和PCV2(4–1)进行培养,结果 2株病毒均可以在换液维持的细胞中有效的复制。
- 罗维赵墩王湘吴海超蒋大良余兴龙
- 关键词：感染性克隆毒株
