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国家自然科学基金(30571377)

作品数:9 被引量:26H指数:3
相关作者:赵启祖邹兴启宁宜宝王琴范运峰更多>>
相关机构:中国兽医药品监察所中国动物疫病预防控制中心更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 9篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 10篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 9篇病毒
  • 8篇猪瘟
  • 7篇猪瘟病
  • 7篇猪瘟病毒
  • 7篇瘟病毒
  • 4篇病毒拯救
  • 3篇疫苗
  • 2篇拯救
  • 2篇非编码
  • 2篇非编码区
  • 2篇感染性克隆
  • 2篇编码区
  • 2篇-UTR
  • 1篇多态
  • 1篇多态性
  • 1篇诱变
  • 1篇牛病
  • 1篇牛病毒性
  • 1篇牛病毒性腹泻
  • 1篇牛病毒性腹泻...

机构

  • 9篇中国兽医药品...
  • 6篇中国动物疫病...

作者

  • 9篇赵启祖
  • 8篇邹兴启
  • 7篇宁宜宝
  • 7篇王琴
  • 5篇赵耘
  • 5篇范运峰
  • 4篇徐璐
  • 4篇朱元源
  • 4篇张仲秋
  • 3篇范学政
  • 1篇韩焘
  • 1篇郑杰

传媒

  • 3篇中国农业科学
  • 1篇病毒学报
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国兽药杂志
  • 1篇中国预防兽医...
  • 1篇中国畜牧兽医
  • 1篇Agricu...

年份

  • 1篇2013
  • 3篇2011
  • 1篇2010
  • 4篇2009
  • 1篇2007
9 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
猪瘟病毒3′非编码区的多态性及其二级结构分析
2010年
【目的】分析CSFV3′-UTR一级序列和二级结构,为研究其对病毒复制、增殖和毒力的关系奠定良好的基础。【方法】利用RT-PCR技术扩增CSFV Thiverval株、HCLV株和Shimen株的3′-UTR并测序,使用DNAstar、Sequencher和RNAstructure软件进行CSFV3′-UTR基因组序列的比对分析和二级结构模拟。【结果】Thiverval株3′-UTR最长可达259个碱基,与母源株Alfort相比,含有32nt的插入,最短只有233个碱基,含有6nt的插入。HCLV株最长有244个碱基,含有17nt的插入;最短有233个碱基,含有8nt的插入。同时,疫苗株的插入片段导致3′-UTR空间构型和自由能发生改变,自由能随着插入片段的增加而升高。【结论】(1)CSFV3′-UTR存在两个高度变异的区域。(2)CSFV疫苗株Thiverval株和HCLV株3′-UTR同一样品不同克隆株中插入片段呈现明显的不均一。(3)疫苗株的插入片段影响3′-UTR二级结构的稳定性,可能是导致疫苗株毒力减弱的原因之一。
范运峰赵启祖赵耘邹兴启张仲秋王琴宁宜宝
关键词:猪瘟病毒不均一性
黄病毒NS2-3/NS3蛋白的结构与功能被引量:10
2007年
郑杰赵启祖赵耘宁宜宝
关键词:NS2牛病毒性腹泻病基因组片段黄病毒科
猪瘟病毒低温诱变疫苗Thiverval株感染性克隆的构建及病毒拯救被引量:5
2009年
采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(HH)核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T1-7。利用T7 RNA聚合酶将线性化重组质粒pAC/F101/T1-7体外转录成基因组RNA,再使用脂质体转染将体外转录RNA转染PK-15细胞。通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,表明成功的从感染性克隆拯救出活病毒粒子。猪瘟病毒低温诱变疫苗"Thiverval"株感染性克隆的构建及病毒的成功拯救,为进一步研究CSFV疫苗株的致弱机制提供了重要工具。
范运峰赵启祖赵耘邹兴启徐璐张仲秋王琴宁宜宝
关键词:猪瘟病毒感染性克隆病毒拯救
Heterogeneity and Secondary Structure Analysis of 3' Untranslated Region in Classical Swine Fever Viruses被引量:1
2011年
The attenuated vaccine strains of CSFV have a 12-nucleotides (nt) insertion in the 3'-UTR of genome as compared to that of CSFV virulent strains. In this study, we found a distinct heterogeneity in the 3'-UTR of attenuated Thiverval and HCLV strains. The longest 3'-UTR of Thiverval strain was 259 base pairs (bp) with a 32-nt insertion, the shortest 3'-UTR had only 233 bp with a 6-nt insertion. The longest 3'-UTR of HCLV strain was 244 bp with a 17-nt insertion and the shortest 3' UTR was 235 bp with a 8-nt insertion. Compared with the published sequences of 3'-UTR of vaccine and virulent strains, the 3'-UTR of CSFV vaccine strains have two variable regions where insertion among the different vaccine strains were frequently found. The first is located between the second conservative TALk codon and the start of T-rich region where we found the variable length insertion in the same vaccine strain Thiveral or HCLV and the second is located between the end of T-rich region and the front of GAA eodon, however, a 4-nt deletion was found in this region in the virulent Shimen strain. These two regions may represent the "hot spot" for mutation. Modeling the secondary structures of the 3'-UTR suggests that the T-rich insertion could result in the change of structure and free energy, thus affecting the stability of the 3'-UTR structure. These findings will help to understand the mechanism of attenuated vaccines and improve vaccine safety, stability, and efficacy.
FAN Yun-fengZHAO Qi-zuZHAO YunZOU Xing-qiZHANG Zhong-qiuWANG QinNING Yi-bao
关键词:HETEROGENEITY
猪瘟病毒Thiverval株3′非编码区插入片段对病毒拯救的影响
2009年
猪瘟病毒(CSFV)疫苗株Thiverval株与亲本病毒Alfort株相比,最明显的区别就是其3'-UTR含有一定长度的插入序列。本研究通过反向遗传学操作,构建了3'-UTR含有19nt、32nt以及插入片段完全缺失的CSFV Thiverval株全长cDNA感染性克隆,将突变病毒基因组进行体外转录,利用BHK-21细胞转染、PK-15细胞传代增殖的方式成功的从3种重组突变感染性克隆中拯救出活病毒粒子,表明CSFV疫苗株3'-UTR插入片段并不影响病毒的拯救。通过3'-UTR二级结构模拟,发现疫苗株的插入片段导致3'-UTR空间构型发生改变、自由能升高、影响二级结构的稳定性,可能是导致疫苗株毒力减弱的原因之一。
范运峰赵启祖赵耘邹兴启张仲秋王琴宁宜宝
关键词:猪瘟病毒病毒拯救
反向遗传操作技术在猪瘟基础理论研究中的应用
2011年
反向遗传操作技术的问世为RNA病毒的研究铺平了道路,研究人员根据需要在DNA水平上对RNA病毒进行加工和修饰,进而深入研究RNA病毒的本质和开发新产品。自反向遗传操作技术在猪瘟病毒上应用以来,在对猪瘟病毒致病机理、分子表达调控机制、细胞生长特性、毒力决定基因等方面的研究已取得明显进展。本文就反向遗传操作技术在猪瘟病毒基础理论研究中的应用作一综述,通过了解病毒基因组的功能、病毒与宿主致病力的关系以及病毒增殖特性等,为研究开发理想猪瘟标记疫苗开拓思路。
朱元源邹兴启赵启祖
关键词:反向遗传操作猪瘟病毒
两株猪瘟嵌合病毒的构建和拯救
为了探索猪瘟病毒(CSFV)结构蛋白与生物学特性的关系,在CSFV T株全长感染性克隆的基础上,利用分子克隆技术,将CSFV T株结构蛋白基因分别用猪瘟弱毒疫苗株C株的结构蛋白基因和猪瘟石门强毒株的结构蛋白基因替换,构建...
朱元源邹兴启徐璐范学政王琴宁宜宝赵启祖
关键词:猪瘟嵌合病毒拯救
文献传递
猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救被引量:10
2011年
【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50.mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒。【结论】成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒。
邹兴启赵启祖范运峰朱元源王琴徐璐范学政宁宜宝
关键词:猪瘟病毒C株传代
从全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒方法的研究被引量:1
2009年
以携带猪瘟病毒Thiverval株全长cDNA克隆的pAC/F101/T1-7载体质粒为模板,在体外转录病毒基因组RNA,并转染PK-15和BHK-21细胞,通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,成功地在两种细胞中拯救出具有感染性的病毒粒子。同时,通过2种细胞转染效率的对比试验,成功建立了利用高转染效率的其它真核细胞作为病毒拯救的过渡细胞,然后再在猪肾细胞系上进行增殖的病毒拯救方式,极大提高了猪瘟病毒拯救的效率。
范运峰赵启祖赵耘邹兴启张仲秋王琴宁宜宝
关键词:猪瘟病毒全长CDNA克隆病毒拯救
猪瘟病毒石门重组标记毒株的构建与拯救被引量:3
2013年
【目的】中国控制猪瘟主要采用疫苗免疫,现有的猪瘟兔化弱毒疫苗有较好的免疫保护效果,但是不能从血清学上区分疫苗免疫猪与自然感染猪,猪瘟标记疫苗的研制与配套检测技术的开发可有效解决这一问题。【方法】利用猪瘟病毒低温诱变弱毒T株感染性克隆,将其全长结构蛋白基因替换为猪瘟病毒石门毒株全长结构蛋白基因,得到猪瘟石门重组病毒的全长感染性克隆pSMT;随后在pSMT E1蛋白的C端插入Flag抗原基因作为鉴别标记,构建猪瘟石门重组标记病毒的感染性克隆pSMT-Flag。经电转染法拯救出两株重组病毒vSMT和vSMT-Flag,通过SK6细胞进行病毒传代以获得重组病毒。【结果】多组酶切鉴定表明两株重组质粒成功构建,PCR扩增及测序、免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)表明重组病毒已成功拯救且能成功传代。【结论】该标记病毒能够与Flag单抗发生特异性反应,且不影响E2蛋白中和表位与猪瘟单抗的结合,因此该毒株为研制CSFV新型标记疫苗提供了思路。
朱元源韩焘邹兴启范学政徐璐王琴赵启祖
关键词:猪瘟重组病毒FLAG标记疫苗
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