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人肿瘤坏死因子β(hTNFβ)在变铅青链霉菌中的表达研究(英文): 2003年; 以变铅青链霉菌为宿主研究了人TNFβ(hTNFβ)的异源表达。应用链霉菌S .venezuelaeCBS76 2 70分泌产生的枯草杆菌蛋白酶抑制剂vsi基因的启动子、表达调控序列和分泌信号肽序列 ,分别对hTNFβ进行了直接分泌表达、分泌融合表达和胞内表达。将hTNFβ的cDNA分别直接融合于vsi信号肽序列下游 2个氨基酸处、vsi全长基因之后以及vsi起始密码子ATG的下游 ,获得的表达盒分别克隆至链霉菌高拷贝质粒pIJ486 ,转化StreptomyceslividansTK2 4,获得了重组菌株S .lividans(pIJ486 hTNFβ)、S .lividans(pIJ486 vsi hTNFβ)和S .lividans(pIVPA hTNFβ)。分别对不同的重组菌株进行摇瓶培养 ,对其培养的上清液和细胞裂解液进行SDS PAGE和Western杂交 ,结果表明 :hTNFβ在重组菌株中均获得了表达 ,且直接分泌产物和胞内表达产物均具有生物学活性。hTNFβ直接分泌表达产物的分子量约为 16kDa,NB培养基中培养 48h时表达水平约为 0 7mg L。胞内表达产物分子量与对照重组hTNFβ一致(18 7kDa) ,但随培养时间的延长逐步降解为 16kDa ,NB培养基中培养 48h时的表达水平 (2 5 1mg L)远高于其直接分泌表达水平。; 洪斌李元Godelieve Van MellaertJozef Anné; 关键词：变铅青链霉菌

缺失氨肽酶N的变铅青链霉菌的构建和鉴定: 2003年; 用PCR方法扩增变铅青链霉菌 (Streptomyceslividans)TK2 4氨肽酶N基因 ,体外插入卡那霉素抗性基因进行失活 ,然后利用不含链霉菌复制起点的重组质粒 pPEPN KAN进行同源重组 ,获得了氨肽酶N缺失的菌株PEPN- 。突变株的胞外氨肽酶N活性与原株基本相同 ,而胞内氨肽酶N的活性明显低于原株 ,为原株的 4 2 5± 5 7%。; 洪斌李元Jozef Anné; 关键词：变铅青链霉菌氨肽酶N

禾本科植物内生真菌研究 5.中国产部分epichloё内生真菌的遗传多样性被引量：8: 2008年; Epichloё内生真菌(epichloё endophytes)是禾本科植物的共生真菌,开展其多样性研究对菌株的生物学特性和进化规律的了解以及开发利用都有着十分重要的意义。本研究筛选了12条随机引物对24株epichloё内生真菌进行RAPD扩增,探讨真菌种类、宿主种类、采集地和菌株间的遗传多样性。结果表明,宿主为拂子茅Calamagrostis sp.、雀麦Bromus sp.、披碱草Elymus sp.、小颖羊茅Festuca parvigluma Steud.的菌株分别独立聚为一个分枝;而宿主为鹅观草Roegneria spp.的Neotyphodium属菌株聚类情况较为复杂;宿主为早熟禾Poas pp.的菌株分别在三个不同的分枝,表现出丰富的遗传多样性。以上结果反应了我国具有丰富的epichloё内生真菌资源,它们和其宿主之间有着比较明显的相互关系。本研究还显示,采集于南京的拂子茅与其内生真菌共生可能发生在较久远的年代。; 陈永敢纪燕玲亢燕孙相辉詹漓晖于汉寿王志伟; 关键词：RAPD 禾本科植物

变铅青链霉菌TK24 secE启动子表达特性的研究被引量：2: 2003年; 通过PCR扩增得到变铅青链霉菌 (Streptomyceslividans)TK2 4secE基因上游 4 96bp的片段 ,其序列与S .coelicolorsecE启动子序列同源性为 99 8%。将该序列克隆到以儿茶酚加氧酶基因 (xylE)为报告基因的链霉菌启动子探测质粒pIJ4 0 83上 ,并转化S .lividansTK2 4原生质体 ,获得了重组菌株S .lividans[pIJ4 0 83 secE]。S .lividans[pIJ4 0 83 secE]菌株发酵结果表明 ,secE启动子为强启动子 ,活性与vsi基因启动子相当。secE启动子的表达在对数生长期达到高峰 ,平台期下降 ;2 8℃发酵培养时secE启动子活性远高于 37℃发酵培养 ;比较了不同发酵培养基Phage ,NB和CM中secE启动子的活性 ;实验结果还表明培养基中葡萄糖含量对secE启动子的表达有抑制作用。; 王丽非洪斌; 关键词：变铅青链霉菌基因表达

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国家自然科学基金(30070009)