国家科技支撑计划(2008BAI69D00)
- 作品数：3 被引量：11H指数：3
- 相关作者：沈心亮李秀玲徐静陈蕾王欣怡更多>>
- 相关机构：北京生物制品研究所北京天坛生物制品股份有限公司北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肠病毒71型空斑检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较。结果采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测,96h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1～2mm和0.5～1mm。连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%。空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为r=0.972,P=0.006。结论已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法。
- 郝春生赵敏张晨何薇薇王潇潇杨永娟张中洋沈心亮李秀玲
- 关键词：肠病毒71型
- 抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体。方法人工合成SP55和SP70（分别包含VP1的第163～177，208—222位氨基酸）两段VP1的多肽，分别免疫BALB／c小鼠，常规杂交瘤技术进行细胞融合，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价。用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性。结果得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，2株单抗的中和效价分别为1：8和1：16。结论成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体，为其下一步应用打下基础。
- 伊瑶郭敏卓沈心亮余陶贾志远毕胜利李秀玲陈斯勇
- 关键词：肠道病毒属酶联免疫吸附测定
- 抗肠道病毒71型单克隆抗体的制备及鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的制备肠道病毒71型(EV71)单克隆抗体,并进行初步鉴定。方法将RD细胞和Vero细胞培养的EV71原液通过氯化铯超速离心纯化,分别作为免疫抗原和检测抗原,制备单克隆抗体。通过Westernblot分析、间接免疫荧光试验和ELISA法鉴定单抗的特异性。采用间接ELISA法测定单抗的酶标效价,微量细胞培养中和试验测定单抗的中和效价。结果获得1株可稳定分泌抗EV71单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单抗可与EV71特异性结合,酶标效价为1∶204800,中和效价为1∶28。结论已成功筛选出1株分泌抗EV71的单抗细胞株,为建立EV71疫苗抗原含量测定方法奠定了基础。
- 崔文禹徐静李树香刘敬王欣怡赵玉秀陈蕾沈心亮
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体
