国家高技术研究发展计划(2006AA020701) 作品数:9 被引量:22 H指数:2 相关作者: 吴炳义 胡子有 苑召虎 王惠丽 姚芳 更多>> 相关机构: 南方医科大学南方医院 南方医科大学 广州医科大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 更多>>
槲皮素诱导U87细胞凋亡及对MDM2-p53负反馈调节的影响 被引量:2 2014年 目的探讨槲皮素对人脑胶质瘤U87细胞凋亡及MDM2-p53负反馈调节的影响。方法以不同浓度槲皮素(50、100、150μmol/L)处理U87细胞,分别采用流式细胞术、RT-PCR及Western blotting技术检测槲皮素对U87细胞凋亡的影响、MDM2mRNA及p53、caspase-3蛋白的表达。结果槲皮素处理U87细胞48 h后,流式细胞术结果显示细胞凋亡率:Q50组为(22.53±0.72)%,Q100组为(29.06±0.81)%,Q150组为(31.5±0.45)%,明显高于对照组(12.40±0.70)%(P<0.05)。随着槲皮素浓度的升高,泛素连接酶MDM2 mRNA表达量升高,在蛋白水平发现,槲皮素处理后,caspase-3凋亡蛋白表达增加,p53蛋白的表达降低。结论槲皮素可以促进人脑胶质瘤U87细胞凋亡,通过凋亡蛋白caspase-3发挥作用,并且在凋亡过程中可以发生MDM2-p53的负反馈调节。 王惠丽 苑召虎 陈志江 姚芳 胡子有 吴炳义关键词:槲皮素 U87 凋亡 MDM2-P53 细胞外信号调节激酶的磷酸化水平对星形胶质细胞增殖及其细胞周期的影响 2013年 目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的磷酸化水平对体外星形胶质细胞(Ast)增殖及其细胞周期的影响。方法将培养成熟的大鼠原代Ast分为两组,其中一组用ERK1/2磷酸化的特异性抑制剂U0126进行处理(U0126组),另一组不做处理,作为对照组。通过Western Blot技术、Click-iT Edu技术和流式细胞术分别检测两组Ast中ERK1/2磷酸化水平、Ast增殖细胞百分比及各期细胞百分比。结果 U0126组ERK1/2的磷酸化水平(39.13%±6.71%)明显低于对照组(100%)。U0126处理24h后,U0126组Ast增殖细胞百分比〔(2.63±1.14)%〕低于对照组〔(21.43±3.81)%〕(t=21.13,P<0.01)。G1期U0126组Ast〔(93.67±0.68)%〕高于对照组〔(84.63±1.00)%〕(t=12.91,P<0.01);S期U0126组Ast〔(2.90±0.23)%〕低于对照组〔(14.21±1.14)%〕(t=16.87,P<0.01);G2期U0126组Ast〔(3.43±0.88)%〕高于对照组〔(2.08±0.21%)%〕(t=4.35,P<0.05)。结论降低ERK1/2的磷酸化水平可抑制Ast的增殖,并将其阻断在G1期,抑制Ast从G1期向S期的转化,同时抑制其分裂将其阻断在G2期。 苑召虎 胡子有 王惠丽 吴炳义关键词:星形胶质细胞 细胞外信号调节激酶 细胞周期 槲皮素对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响 被引量:12 2013年 目的探讨黄酮类化合物槲皮素对人胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将U87细胞分成Q0、Q50、Q100和Q1504个组,Q0组加适量二甲亚砜(槲皮素溶剂)处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100、150μmol/L。分别通过transwell体外侵袭实验、transwell体外迁移实验、Click-iT Edu test技术和流式细胞术检测槲皮素对其侵袭迁移能力,增殖能力及其细胞周期的影响。结果槲皮素处理36 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150组的侵袭细胞比率分别为:52.08%、24.63%和13.13%,P均<0.05。槲皮素处理12 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为:49.46%、26.78%和14.56%,P均<0.05。槲皮素处理24 h后,Q0、Q50、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为25.21%、18.38%、16.74%和15.24%。G0/Gl期C6细胞所占比例分别为71.14%、72.71%、69.29%、66.47%,S期分别为25.32%、22.48%、21.96%、23.32%,G2/M期分别为3.53%、4.80%、8.75%、10.25%;Q100、Q150组的G2/M期细胞比例与Q0组比较,P均<0.05。结论槲皮素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭迁移能力;并可通过阻断U87细胞的细胞周期进程来抑制其增殖。 苑召虎 胡子有 张兰兰 颜晓慧 王惠丽 吴炳义关键词:槲皮素 迁移 增殖 细胞周期 酒精能够减少斑马鱼胚胎的神经前体细胞并抑制其神经元和神经胶质细胞的分化(英文) 被引量:1 2014年 目的研究不同浓度的酒精对斑马鱼的神经前体细胞、神经元和神经胶质细胞的影响。方法在斑马鱼卵受精后5 h,在斑马鱼培养液中加1%、2%或2.5%的酒精。采用原位杂交和实时定量PCR的方法检测不同细胞的mRNA水平的变化,以反映酒精对斑马鱼胚胎神经发育的影响。结果不同浓度酒精处理后,斑马鱼胚胎神经前体细胞和神经元显著减少,并且随着酒精浓度的增加其数量减少更加显著。早期的神经胶质细胞标志物的表达随着酒精浓度的增加在尾部减少,而在头部增加。成熟的神经胶质细胞标志物表达随着酒精浓度的增加而显著减少。结论酒精可以导致斑马鱼胚胎神经前体细胞、神经元和胶质细胞数量减少,并抑制神经元和神经胶质细胞的分化。 殷果 姚芳 陈小辉 王楠 王惠丽 常红恩 苑召虎 吴炳义关键词:酒精 斑马鱼 神经前体细胞 神经胶质细胞 荧光定量PCR和环介导等温扩增方法检测隐球菌CAP10基因的比较研究 被引量:6 2012年 目的建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点。方法针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAMP两种方法检测定量的质粒,分析其敏感性和特异性,并检测临床标本。结果荧光定量PCR检测CAP10质粒的敏感性为6.8×101拷贝,LAMP方法的敏感性为6.8×103拷贝,PCR检测阳性率比LAMP方法高。两种方法特异性好,对脑膜炎奈瑟菌、白色念珠菌、热带念珠菌、黄曲霉、黑曲霉和大肠埃希菌的检测结果均为阴性。结论成功建立了检测CAP10基因的荧光定量PCR方法敏感性和特异性高,但是需要特殊仪器;LAMP方法敏感性较低,但其操作简单,无需特殊仪器和设备,加入核酸染料即能观察结果。两者均适用于新型隐球菌感染的检测。 韩慧 胡子有 吴炳义关键词:荧光定量PCR 环介导等温扩增技术 新型隐球菌 基于PMMA毛细管电泳芯片的多位点突变检测研究 2012年 利用基于激光诱导荧光(LIF)检测的芯片毛细管电泳平台,批量制作了低成本聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)芯片,通过修饰管道,优化有效分离距离、分离介质等条件,可在90s内完成DNA片段的分离检测,实现单碱基分离,并在此平台上成功地对遗传性耳聋三个常见突变位点实现分型检测,为这种低成本的PMMA芯片应用于分型相关的临床诊断领域奠定了基础。 马辰 张冠斌 邓涛 王怡瑞 邢婉丽 程京关键词:芯片毛细管电泳 激光诱导荧光 遗传性耳聋 突变检测 广州市吸毒强戒人员HIV-1基因亚型分布的初步研究 2012年 目的分析吸毒人群HIV感染者中HIV-1的基因序列特征,初步确定其感染的基因亚型和各亚型的流行趋势。方法在Genbank中查找HIVgag基因的序列,设计巢式PCR引物。从全血中提取样本的基因组DNA,进行巢式PCR,对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序,所获序列与国际参考株序列进行比对,确定基因型或亚型。结果对36例HIV-1感染者样本进行扩增,PCR共检测出29例阳性样本,27例测序成功,其中16例为CRF08-BC重组亚型、7例为CRF07-BC重组亚型、4例为CRF01-AE重组亚型,15例阴性对照均无目的条带。结论在广州吸毒强戒人员HIV-1型中以CRFBC亚型为主,其次为CRF01-AE亚型。应加强对HIV-1毒株亚型的监测,以制定更好的防治策略。 石泽林 韩慧 吴炳义关键词:HIV-1 吸毒人群 基因型 槲皮素对星形胶质细胞增殖及细胞周期相关蛋白cdc25A的影响 2013年 目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中进行培养。分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化。结果与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合;槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92%降低到2.74%,G1期星形胶质细胞百分比从82.04%增加到92.06%,其S和G2期有一个相应的减少;50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50%,具有明显的统计学差异(F=40.579,P<0.01)。结论通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期。 苑召虎 胡子有 姚芳 张兰兰 颜晓慧 李科 曾勇 吴炳义关键词:星形胶质细胞 槲皮素 细胞周期 CDC25A 基于表面等离子体共振成像的蛋白质分子检测研究 表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)是一种表面敏感的生物分子非标记实时无损光学检测技术,通过对纳米厚金属膜(金或银)表面附着的待测物质折射率变化的测量,可以监测待测物质的变化(1... 徐书宽 黄国亮 邓橙 朱疆 寒超 阳小勇基于微流体芯片的等温扩增检测技术研究 1985年 Mullis 发明多聚酶链反应(PCR,Polymerase chain reaction)技术,使昂贵、繁杂、条件苛刻的分子生物学试验变得简易、经济、使用方便,是基因分析技术的一项重大突破。不过,PCR 方... 黄国亮 寒超 徐书宽 邓橙 朱疆 阳小勇