吉林省自然科学基金(20070207)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：孙旸陈光王刚吴铭徐珍珍更多>>
- 相关机构：吉林农业大学更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人胶原蛋白肽在大肠杆菌中的高效表达被引量：7
- 2011年
- 目的:构建含有胶原蛋白基因的原核表达载体pET32a-CP6,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达,为获得大量可溶的胶原蛋白肽提供可靠依据。方法:将重组表达载体pET32a-CP6转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG为诱导剂,对温度、接种量、诱导时机、IPTG诱导浓度等各种发酵参数进行优化,筛选高效表达的发酵条件,并通过Ni-NTA亲和层析进行纯化分析。结果:菌株在37℃、接种量为2%、摇瓶培养约2.5h后,加入终浓度为0.5mmol.L-1的IPTG,37℃诱导5h,收获的蛋白产量最高为31.52mg.L-1,Westernblotting分析该表达产物与人COL6A2单克隆抗体有特异结合能力。结论:优化工程菌高效表达重组人胶原蛋白,纯化重组蛋白。
- 陈光吴铭王刚孙旸
- 关键词：重组蛋白纯化大肠杆菌
- 重组人Ⅵ型胶原蛋白多肽对长波紫外线辐射的人皮肤成纤维细胞损伤的保护作用
- 2011年
- 目的探讨重组人Ⅵ型胶原蛋白多肽(CP6)对长波紫外线(Ultraviolet A,UVA)辐射的人皮肤成纤维细胞(Humanskin fibroblast,HSF)损伤的保护作用。方法 MTT法检测不同剂量UVA辐射对HSF细胞活力的影响,并采用MTT法、An-nexin V/PI流式细胞术和TUNEL法分别检测CP6对UVA辐射的HSF损伤的保护作用。结果辐射强度为5和10 J/cm2的UVA可造成HSF活力降低;与UVA对照组相比,UVA+4 mg/ml CP6、UVA+6 mg/ml CP6和UVA+8 mg/ml CP6组A570值均升高(P<0.05),细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。结论紫外线可造成体外培养的HSF损伤,一定浓度的CP6可提高辐射细胞的存活率,减少细胞凋亡,具有保护作用,其机制可能与其抗氧化、增强细胞活力有关。
- 陈光徐珍珍吴铭王刚孙旸
- 关键词：皮肤成纤维细胞长波紫外线
- 重组人胶原蛋白肽的表达及纯化工艺的优化被引量：2
- 2011年
- 将重组大肠杆菌pC6-BL21活化后,用IPTG诱导表达,探讨了大肠杆菌中重组胶原蛋白肽的最佳表达及纯化条件。结果表明,菌株在37℃,接种量为2%,摇瓶培养3.0 h后,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,30℃诱导5.0 h,收获的蛋白产量最高,经Ni-NTA柱亲和层析纯化,用梯度咪唑缓冲液洗脱蛋白,150 mmol/L咪唑缓冲液洗脱蛋白为纯蛋白,Western blotting分析显示该表达产物与人COL6A2单克隆抗体有特异结合能力。
- 吴铭徐珍珍王刚孙旸陈光
- 关键词：纯化
