上海市自然科学基金(06ER14090)
- 作品数：5 被引量：46H指数：4
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- Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞活化的关系研究被引量：10
- 2009年
- 目的探讨Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞（HSC）活化的关系。方法清洁级SD雄性大鼠20只，均分为模型组和对照组。模型组采用腹腔注射四氯化碳（CCh）和高脂饮食诱导肝纤维化，对照组予以正常饮食。第8周末取模型组存活大鼠与对照组中大鼠各5只处死，取左叶肝脏组织。HE、Masson染色观察两组肝组织病理变化；逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）检测纤维化大鼠肝脏中表达Hedgehog通路成员超音速Hedgehog信号通路（Shh）、膜受体patched（Ptc）、smoothened（Smo）和核转录因子Gli表达；实时荧光定量PCR法检测Hedgehog通路成员及HSC活化标志基因α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA在两组大鼠肝脏中的表达差异。体外培养HSC-T6细胞，RT-PCR检测HSC-T6细胞株中Hedgehog通路成员的表达；四甲基偶氮唑盐比色分析（MTT）法检测不同浓度．环耙明（Cyclopamine，Cyc）对HSC-T6增殖的影响；分别用0、100μmol／L的Cyc干预HSC-T6，实时荧光定量PCR法检测Shh、Smo、Ptc、Gli-1及α-SMAmRNA表达差异。结果模型组大鼠肝脏有大量脂质及胶原沉积，且肝脏组织中均有Shh、Smo、Ptc、Gli-1表达。荧光定量PCR结果示模型组大鼠Shh、Smo、Gli-1及ccSMAmRNA表达均较对照大鼠升高（20．45±3．31、12．78±0．53、10．88±2．41、4．91±2．59比1；P值均〈0．05）。Cyc在体外对HSC-T6有明显的抑制作用，且抑制作用呈剂量依赖性（F=636．81，P〈0．01）。荧光定量PCR结果示，用Cyc100μmol／L干预的HSC-T6中，Ptc、Smo、Gli-1和fSMA表达量分别为0．20±0．11、0．21±0．08、0．28±0．05和0．27±0．10，与Cyc0μmol／L干预比较差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论肝纤维化过程中Hedgehog通路成员表达增高，抑制Hedgehog通路可抑制HSC活化，推测Hedgehog通路通过活化HSC促进肝纤维化的发生。
- 刘珺徐选福王兴鹏牛培勤杨文娟郭传勇
- 关键词：肝硬化肝星状细胞
- Hedgehog-Gli信号通路在肝星状细胞激活中的作用被引量：3
- 2009年
- Hedgehog信号通路是生物体内重要的调节昆虫和哺乳动物胚胎发育的经典通路之一。其调控发育过程中及组织损伤过程中干细胞的分化、移行和增殖。肝纤维化是慢性肝脏疾病共同的病理过程,也是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,其核心环节为肝星状细胞的异常活化。然而长期以来Hedgehog通路在肝纤维化过程中对肝星状细胞的调控作用未得到认识。近年来,学者逐渐意识到经典的Hedgehog信号通路与肝星状细胞的活化有关,然而作用机制尚不明确。
- 刘珺徐选福杨文娟郭传勇
- 关键词：肝星状细胞肝纤维化
- Hedgehog-Gli1信号通路对肝星状细胞增殖和凋亡的调控作用被引量：15
- 2009年
- 目的研究肝星状细胞（HSC）中hedgehog（Hh）信号通路成员Shh、patched、smoothened（Smo）和Gli—1的表达，及Hh通路抑制剂环耙明对HSC—T6细胞株增殖、凋亡及其激活的影响。方法体外培养HSC株，提取细胞总RNA，用RT—PCR扩增Shh、patched、Smo、Gli1基因；用环耙明作用HSCT6后采用四甲基偶氮唑盐法检测其在体外对HSCT6的抑制情况，流式细胞仪检测其对HSCT6细胞周期的影响，碘化丙啶和膜联蛋白-V双染荧光标记法及提取细胞DNA检测HSCT6细胞凋亡，荧光定量聚合酶链反应检测Gli1、转化生长因子D1、血小板衍生生长因子、Bcl-2mRNA的表达水平。结果HSC—T6中表达有Hh通路家族成员。环耙明在50、100、150、200、250μmol／L作用下，4值分别为1．55±0．07、1．19±0．05、0．78±0．06、0．48±0．03、0．38±0．04，正常对照组为1．74±0．03，环耙明组与正常对照组相比，F=636．81，P〈0．01，差异有统计学意义。流式细胞术测出干预后环耙明G0／G1期细胞所占比例为65．08％±1．50％，正常对照组为55．41％±2．54％，两组比较，f=-8．05，P〈0．01。药物干预后提取DNA及碘化丙啶和膜联蛋白V双染荧光标记均检测出HSC—T6细胞凋亡。荧光定量结果表明，经环耙明干预后，HSCT6细胞中Gli1、转化生长因子β1、血小板衍生生长因子、Bcl-2mRNA的目的基因相对表达量分别0．28±0．05、0．13±0．04、0．07±0．04、0．17±0．02，正常对照组为1，各基因表达量较正常对照组均明显降低，f值分别为23．09、31．34、43．87和59．10，P值均〈0．01，差异有统计学意义。结论HSCT6中存在Hh信号通路，环耙明能抑制HSC增殖及增殖周期，促进活化的HSC凋亡，其抑制HSC活化可能是通过抑制Hh—Gli-1信号通路的结果。
- 刘珺徐选福杨文娟郭传勇
- 关键词：肝纤维化肝星状细胞信号传导细胞凋亡
- 星状细胞活化及其作用研究进展被引量：20
- 2008年
- 肝星状细胞（HSC）是启动肝纤维化（HF）整个事件的开端，在HF过程中扮演着重要的角色。活化的HSC在肝损伤部位移行、增殖，表达各种细胞外信号转导通路蛋白，产生大量细胞外基质（ECM）成分和细胞因子（CK），是HF形成的中心环节；在HF的恢复期，有与肝脏疤痕降解一致的广泛性的HSC凋亡。因此，诱导活化HSC的凋亡可使HF发生逆转。目前，活化HSC已被看作抗HF治疗的主要靶点。现就HSC活化与HF的关系作一综述。
- 刘珺郭传勇
- 关键词：肝细胞星形细胞肝硬化
- 红花注射液对肝星状细胞HSC-T6增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响被引量：13
- 2009年
- 目的研究红花注射液对肝星状细胞(hepatic steuate cell,HSC)HSC-T6增殖、凋亡及凋亡相关基因bcl-2及bax mRNA表达的影响。方法体外培养HSC株,用不同质量浓度的红花注射液处理HSC-T6,采用MTT法检测细胞增殖;采用5、10、20 mg/mL红花注射液干预细胞24 h,流式细胞仪检测细胞周期;倒置显微镜下观察细胞凋亡形态学改变;并用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA Ladder凋亡梯度;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪分析凋亡率;Real ti me-RT PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA的表达水平。结果红花注射液对HSC增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量和时间依赖性;红花注射液(10、20 mg/mL)作用24 h流式细胞术测出G0/G1期细胞所占比例增多,与对照组比较差异显著(P<0.05、0.01);药物干预后细胞表现不同程度的凋亡,琼脂糖电泳可见DNA出现断裂、PI/Annexin V双染流式细胞仪分析对照组凋亡率为(0.73±0.33)%,红花注射液在5、10、20 mg/mL凋亡率分别为(2.04±0.58)%、(9.46±1.29)%、(16.55±1.27)%,差异显著(P<0.01);Real ti me-RT-PCR结果显示红花下调抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达,同时上调HSC-T6的促凋亡基因bax的mRNA表达。结论红花注射液能抑制HSC增殖及增殖周期,促进活化的HSC凋亡,其机制可能是调控bcl-2/bax mRNA的表达。
- 刘珺徐选福杨文娟郭传勇
- 关键词：红花注射液肝星状细胞增殖凋亡
