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限制性显示-聚合酶链反应扩增苏云金杆菌基因片段的克隆与分析被引量：1: 2003年; 目的运用限制性显示-PCR技术(RD-PCR)扩增苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因片段,并进行克隆、测序分析.方法设计特异性引物扩增长片段Bt基因,对扩增产物进行RD-PCR扩增,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定.提取阳性克隆质粒进行测序分析.结果运用RD-PCR技术,将长片断的基因(2 000-3 000 bp)分为多个短的片段,片段长度较为均一(200～600 bp).测序结果表明,所扩增的片段均属于特异扩增的Bt基因.结论运用RD-PCR技术可以将长片段基因进行片段化,使其适用于基因芯片的探针.; 李侠马文丽庞义张宝姜立郑文岭; 关键词：苏云金杆菌基因克隆基因芯片

细小病毒B19 Oligo探针设计被引量：2: 2004年; 利用BLAST软件对细小病毒B19的序列进行序列比对,获得特异序列;利用生物学软件Oligo6.40设计特异性高、Tm值接近、长度均一的Oligo探针。结果获得了13条70bp的Oligo探针,用于芯片打印及细小病毒B19的检测。表明利用BLAST系统和生物学软件Oligo6.40设计细小病毒B19诊断芯片的探针是一种简便而有效的方法。; 吕梁马文丽孙朝晖马晓冬郑文岭; 关键词：细小病毒B19 生物信息学 BLAST

松胞素B对白血病K562细胞基因表达谱的影响: 2003年; 背景与目的:近年来兴起的DNA芯片技术能在一次杂交中同时监测数以千计的基因表达,能大大加速肿瘤药物作用机制的研究和药物治疗靶点的发现。本研究的目的是利用基因表达谱芯片研究松胞素B(cytochalasinB,CB,旧称细胞松弛素B)对白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法:利用限制性显示RCR(restrictiondisplayPCR,RD-PCR)技术扩增K562细胞cDNA片段,取其中277个cDNA片段按设计的矩阵打印在玻片上,制成基因芯片;用CB处理K562细胞24h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术进行扩增标记;与芯片杂交后扫描分析处理前后表达差异的基因。结果:在所收集的探针中,对照组和处理组细胞间存在差异表达的基因。共筛选到CB处理后表达下调的基因18条。结论:CB诱导后的K562细胞部份基因表达呈下调趋势,其中大部分基因与细胞增殖、信号转导、转录调节相关。; 危敏马文丽宋艳斌冯春琼石嵘郭秋野郑文岭; 关键词：基因芯片 K562 基因

以ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体: 2006年; 目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建供载体pUni/Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合,构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4.1/pUni-HGH,使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下,EcoRI单酶切及BamHI/EcoRI双酶切鉴定重组质粒。结果:由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实,用ECHO克隆系统构建的融合质粒中,确实含有人生长激素带内含子的基因序列。结论:用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体,且方便、快捷,为取代原核生物表达系统生产人生长激素,提供了依据。; 汪宗桂郑文岭马文丽梁念慈; 关键词：人生长激素

抗SARS病毒的药物及疫苗设计研究进展被引量：2: 2004年; 目的　介绍抗SARS病毒的药物及疫苗设计策略。方法　综述近期国内外相关文献。结果　这些策略主要包括阻断病毒与宿主细胞脂膜融合 ,阻止病毒颗粒复制等 ,以及与此相关的抑制剂、多肽等药物的设计以及灭活病毒疫苗、DNA疫苗、重组载体疫苗等的设计策略。结论　它们将为人类最终攻克SARS病毒发挥重要的作用。; 赵慧郑文岭崔东江晓曦马文丽; 关键词：SARS-COV 抗病毒药物疫苗

大肠杆菌murB和birA基因的转录通读现象被引量：1: 2003年; 在对应用限制性显示 PCR技术构建的大肠杆菌 poly(A)化mRNA的cDNA文库鉴定中 ,发现了一克隆的基因片段同时跨越了murB和birA基因的部分序列 ,提示这 2个基因存在转录通读现象 ,设计引物 ,利用逆转录后的产物为模板 ,进行了验证。结果表明murB和birA基因存在转录通读现象。; 胡子有马文丽吴清华张宝宋艳斌彭翼飞郑文岭; 关键词：大肠杆菌转录

基因芯片技术检测丁型肝炎病毒的研究被引量：5: 2004年; 目的制备检测丁型肝炎病毒(HDV) 基因芯片。方法针对HDV基因保守区域设计多对PCR引物。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术得到多个HDV特异性基因片段,序列分析表明,所扩增的片段均属于HDV特异基因。杂交结果显示,样品和HDV诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论用基因芯片检测HDV具有敏感、高效、检测结果可靠的优点,有着较大的应用前景。; 孙朝晖郑文岭张宝石嵘马文丽; 关键词：基因芯片技术丁型肝炎病毒敏感性特异性

信号肽对外源蛋白分泌效率的影响被引量：30: 2003年; 信号肽在引导外源蛋白分泌过程中具有重要作用,从信号肽疏水性结构、构建分泌型载体以及分泌增强子、定位信号等几个方面介绍了信号肽对外源蛋白分泌效率的影响,在大量生产以酵母为表达载体的治疗性蛋白方面具有广泛的应用前景。; 赵慧郑文岭马文丽; 关键词：信号肽酵母表达系统外源蛋白

通路克隆系统:DNA重组技术的新进展被引量：17: 2003年; 近几年新发展了一种载体间DNA片段相互灵活转化的多功能系统 ,即通路克隆系统(gatewaycloningsystem)。它是一种位点特异的DNA重组技术 ,包括PCR产物的定向克隆 ,DNA片断高效、广泛的亚克隆 ,氨基或羧基末端的融合蛋白表达等。重点阐述了该系统的作用原理、特点及其应用。; 汪宗桂郑文岭马文丽; 关键词：DNA重组技术定向克隆亚克隆

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