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SYBR实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞AnnexinⅡmRNA方法的建立及应用: 2014年; 目的建立检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,并用其测定人乳腺癌细胞MDAMB-231和MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根据人AnnexinⅡmRNA的保守序列设计特异性引物,提取人乳腺癌细胞总RNA,并逆转录为cDNA,胶回收纯化PCR产物,并与pGM-T载体连接构建质粒标准品,进一步通过SYBR Green实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞中AnnexinⅡmRNA水平。结果该方法标准曲线的r2为0.997,融解曲线分析显示单个峰,pGM-T AnnexinⅡ质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.2%、7.8%(高拷贝)和9.1%、12.3%(低拷贝)。进一步研究表明人乳腺癌细胞MDA-MB-231中AnnexinⅡmRNA水平显著高于MCF-7细胞(P<0.01)。结论建立的检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法特异性、重复性好,可用于人乳腺癌细胞中AnnexinⅡmRNA的定量检测。; 郭变琴黄学梅吴立翔

AnnexinⅡ在4株人乳腺癌细胞中的表达及意义被引量：4: 2008年; 目的:研究人乳腺癌细胞中AnnexinⅡ基因的表达情况,阐明AnnexinⅡ基因与乳腺癌细胞侵袭力的关系.方法:采用SYBR实时荧光定量PCR,Western Blot技术分别检测MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7共4株人乳腺癌细胞AnnexinⅡ mRNA和蛋白的表达情况;免疫细胞化学检测AnnexinⅡ蛋白在4株人乳腺癌细胞中的定位;Millicell小室测定4株人乳腺癌细胞体外侵袭能力.结果:MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的AnnexinⅡ mRNA表达量分别为0.67±0.21,0.38±0.03,0.05±0.03,(4.06±0.81)×10-5,任两组细胞间AnnexinⅡ mRNA的表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的AnnexinⅡ蛋白表达量:WesternBlot结果分别为1.47±0.06,1.10±0.05,0.70±0.03,0.09±0.01;免疫细胞化学结果分别为3423±312,2767±147,2001±245,353±128;任两组细胞间AnnexinⅡ蛋白表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的体外侵袭力分别为135.3±7.6,147.2±8.9,79.4±2.9,15.3±4.4,除MDA-MB-435S细胞与MDA-MB-231细胞无显著差异外,其余两组细胞侵袭力有显著性差异(P<0.05).结论:在所检测的4株人乳腺癌细胞中,AnnexinⅡ表达量与细胞体外侵袭力呈正相关.; 郭变琴陈婷梅文阳安; 关键词：免疫组织化学侵袭力

钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及侵袭转移能力的影响: 2009年; 目的:探讨低氧条件下钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及其侵袭转移能力的影响.方法:在培养基中加入150μmol/LCoCl2模拟化学缺氧;将实验分成对照组、CoCl2组、CoCl2和钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil,VPL)组.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组中HIF-1α的mRNA水平;蛋白印迹实验和免疫细胞化学检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中HIF-1α蛋白的表达;Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测各实验组中细胞侵袭迁移能力的改变.结果:两株细胞各实验组都存在HIF-1α的mRNA转录和蛋白的表达,CoCl2组HIF-1αmRNA水平和蛋白水平较对照组显著增高(P<0.01),加VPL干预后,HIF-1αmRNA水平和蛋白水平都大大降低(P<0.01),MCF-7和MDA-MB-231间有显著差异(P<0.01);两株细胞的侵袭迁移能力VPL+CoCl2组较CoCl2组明显降低(P<0.05),MDA-MB-231更明显(P<0.01).结论:阻断钙信号转导途径可以使HIF-1α的表达下调,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭转移能力.; 廖晓敏汤为学赖洁娟蒲淑萍孙双凌; 关键词：钙信号肿瘤细胞系 HIF-1Α表达

siRNA沉默AnnexinⅡ基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的影响被引量：1: 2009年; 目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默AnnexinⅡ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学特性的影响。方法体外化学合成AnnexinⅡ序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用荧光显微镜观察转染效率。收集siRNA干扰的细胞,RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测AnnexinⅡmRNA和蛋白的抑制水平,并采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期的变化,Millicell小室测定细胞侵袭、迁移能力的变化。结果AnnexinⅡ-siRNA能有效抑制AnnexinⅡmRNA和蛋白的表达(P<0.05);经siRNA干扰后的细胞,细胞增殖能力显著减低(P<0.05);G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少(P<0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05)。结论采用siRNA干扰AnnexinⅡmRNA和蛋白表达后,能有效逆转乳腺癌细胞的某些恶性生物学特点,表明AnnexinⅡ与乳腺癌的发生、发展及转移有一定的关系。; 郭变琴陈婷梅文阳安; 关键词：RNA干扰细胞增殖细胞周期

特异性小干扰RNA沉默Annexin Ⅱ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移力的影响被引量：5: 2009年; 目的:探讨RNA干扰技术沉默Annexin Ⅱ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移力的影响。方法:体外化学合成Annexin Ⅱ基因序列特异性双链小干扰RNA(Annexin Ⅱ-siRNA),转染高转移人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,用荧光显微镜观察转染效率,逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹检测Annexin Ⅱ mRNA和蛋白表达水平;通过生长曲线和体外侵袭迁移实验,观察乳腺癌细胞恶性生物学行为的改变。结果:Annexin Ⅱ-siRNA能有效抑制Annexin Ⅱ mRNA和蛋白表达(P<0.05);经siRNA处理的细胞,细胞生长速度明显降低(P<0.05),侵袭迁移力显著下降(P<0.05)。结论:沉默Annexin Ⅱ基因表达可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭迁移力。; 郭变琴文阳安陈婷梅; 关键词：RNA干扰乳腺癌 ANNEXIN

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重庆市自然科学基金(2006BB5427)