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骨髓间充质干细胞应用于急性肺损伤的研究进展被引量：5: 2011年; 急性肺损伤（acute lung injury，ALI）和急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是急性、进行性加重的呼吸困难、难治性低氧血症和肺水肿．其临床病死率接近40％。虽然机械通气及支持治疗为主导的传统治疗能使病死率明显下降．但目前临床上对ALI和ARDS依然缺乏有效的治疗及阻止病程进展的良好方法。随着干细胞研究的深入，; 陈雯朱峰郭光华; 关键词：骨髓间充质干细胞急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征难治性低氧血症进行性加重 LUNG

骨髓间充质干细胞移植对烟雾吸入性损伤兔早期肺组织的影响被引量：3: 2011年; 目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对烟雾吸入性损伤兔早期肺组织损伤的影响.方法采用直接贴壁法体外培养兔MSCs,用流式细胞术鉴定MSCs.将48只兔制备烟雾吸入性损伤模型后按随机数字表法均分成致伤组和MSCs组.MSCs组伤后立即静脉给予含1×107个/ml MSCs的磷酸盐缓冲液（PBS）10 ml;致伤组则给予10 ml PBS.分别于干预后2、6和24 h活杀8只兔,取肺组织行组织病理学观察,同时进行肺损伤评分.结果流式细胞术检测显示所培养细胞为MSCs.肺大体标本和光镜下均观察到MSCs组肺损伤程度较致伤组明显减轻.虽然MSCs组和致伤组伤后2 h肺损伤评分（分）比较差异无统计学意义（4.0±0.7比4.5±0.6,P＞0.05）,但MSCs组伤后6 h和24 h肺损伤评分（分）明显低于致伤组（6 h：6.1±0.9比8.2±0.9,24 h：4.6±0.9比10.4±0.8,均P＜0.01）.结论 MSCs移植能明显减轻烟雾吸入性损伤兔肺组织损伤,改善肺损伤评分.; 朱峰郭光华黄松陈任生陈雯詹剑华; 关键词：骨髓间充质干细胞烟雾吸入性损伤肺损伤

骨髓间充质干细胞对烟雾吸入性损伤早期血管内皮细胞生长因子的影响被引量：6: 2010年; 目的探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,MSCs）对烟雾吸入性损伤早期肺组织和血浆中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor,VEGF）以及血管外肺水的影响.方法烟雾吸入性损伤模型达成后,64只兔随机（随机数字法）分成2组：致伤组（S组,n=32）和治疗组（M组,n=32）.S组伤后立即经耳缘静脉注入10 mL PBS液;M组伤后立即经耳缘静脉注入含兔第三代1×107个MSCs的PBS液10 mL.两组分别于伤前、伤后2 h,4 h和6h抽血后取兔肺组织,ELISA方法检测血浆和肺组织VEGF含量.伤后6 h另取肺组织作肺水质量分数测定.结果致伤后肺组织VEGF在S组逐渐降低（P＜0.05）,而M组虽然也呈降低趋势（P＜0.05）,但与S组对应时间点相比却显著上升（P＜0.05）;血浆VEGF在S组逐渐升高（P＜0.05）,M组虽然也呈升高趋势（P＜0.05）,但与S组对应时间点相比却明显下降（P＜0.05）.实验6 h,M组肺水质量分数明显低于S组（P＜0.05）.结论 MSCs移植能升高早期烟雾吸入性损伤肺组织VEGF水平,降低外周血VEGF水平,减少血管外肺水,对烟雾吸入性损伤可能具有一定的保护作用.; 朱峰郭光华陈雯王年云; 关键词：骨髓间充质干细胞烟雾吸入性损伤血管内皮细胞生长因子血管外肺水

兔骨髓间充质干细胞体外BrdU标记最佳时间和标记浓度的筛选被引量：8: 2010年; 背景：骨髓间充质干细胞是目前极具潜力的细胞和基因治疗的宿主细胞。体外标记是追踪其存活、＂归巢＂、生长、分化等一系列过程的前提。目的：探索5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记兔骨髓间充质干细胞的最佳时间和最佳浓度。方法：兔骨髓间充质干细胞取自纯种健康新西兰大耳白兔,通过形态学及流式细胞术鉴定分离培养的细胞为骨髓间充质干细胞。观察不同5-溴脱氧尿嘧啶核苷浓度标记及不同5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记时间对兔骨髓间充质干细胞的标记阳性率。结果与结论：流式细胞术检测培养的细胞为较纯的骨髓间充质干细胞,生长曲线呈S形。5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的阳性细胞率随标记时间延长以及标记物浓度增加而逐渐增高,40μmol/L及72h标记阳性率达85%~95%。结果提示,应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记骨髓间充质干细胞是安全可靠的,体外标记最佳时间和最佳浓度分别为72h和40μmol/L。; 朱峰郭光华詹剑华谢安; 关键词：骨髓间充质干细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷流式细胞术

兔烟雾吸入性损伤模型的改进和建立被引量：11: 2009年; 目的改进并建立一种兔烟雾吸入性损伤模型。方法参照以往兔烟雾吸入性损伤模型制作方法,采用自制烟雾吸入性损伤致伤仪致伤,改进模型制作方法:以干燥的松木屑及煤油为发烟材料,在密闭环境使兔自行吸入烟雾10 min,间隔2 min再次致伤10 min。伤后观察兔临床表现、各时点血气及伤后24 h肺组织切片观察。结果(1)伤后兔呼吸频率明显加快,呼吸困难明显,肺部可及干啰音,24 h后呼吸症状改善。(2)血气分析示PaO2由伤前(90.20±18.44)mmHg分别降至伤后10 min(63.48±12.90)mmHg、伤后2 h(56.96±10.23)mmHg及伤后4 h(65.76±12.55)mmHg,与伤前比较差异有显著性(P<0.05),至伤后24 h基本恢复正常;PaCO2由伤前(32.10±5.48)mmHg分别升至伤后10 min(41.72±6.33)mmHg、伤后2 h(43.12±5.42)mmHg及伤后4 h(39.11±6.91)mmHg,与伤前比较差异有显著性(P<0.05)。至伤后24 h基本恢复正常。(3)肺组织切片:伤肺有血管内充血、肺泡水肿和出血、间质水肿及炎性细胞浸润等肺损伤改变。致伤过程无动物死亡。结论该兔烟雾吸入性损伤模型是一种简便、实用、稳定、经济、可重复的烟雾吸入性损伤模型,适于烟雾吸入性损伤的研究。; 朱峰郭光华王年云彭燕; 关键词：烟雾吸入性损伤

兔骨髓间充质干细胞的分离、体外培养、鉴定和体外标记被引量：4: 2010年; 目的:探讨分离、体外培养、鉴定及体外标记兔骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stemcells,MSCs)的方法,为进一步的实验研究打下基础。方法:选择健康幼龄新西兰大耳白兔,于双侧髂后上嵴及胫骨上端内侧部行骨髓穿刺提取骨髓。采用全骨髓培养法(直接贴壁法)分离培养MSCs,对第2、3、4、5、6代MSCs应用MTT法测定生长曲线,分析MSCs的生长规律。对MSCs进行形态学观察,通过流式细胞术对CD34、CD44、CD45、CD105这4种MSCs表面抗原进行鉴定,证明所培养的细胞为MSCs。采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyuridine,BrdU)体外标记兔MSCs,检测其标记阳性率。结果:全骨髓培养法培养的原代MSCs接种4天后可以被观察到,形态均匀成梭形,生长增殖迅速,符合MSCs生长的特性,7～8d MSCs融合接近80%,传代培养生长良好。MSCs生长曲线呈S型,由生长曲线分析可知,MSCs在培养第4～8d为高速生长期,MSCs在第3～5代生长最为旺盛。经流式细胞术鉴定,CD34(-)、CD45(-)、CD44(+)、CD105(+),证明所培养的细胞为较纯的MSCs。BrdU体外标记兔MSCs的阳性率达到85%～90%。结论:应用本实验方法,可以分离、纯化培养兔骨髓间充质干细胞且操作简便,效率高,经济实用。所培养的MSCs体外生长稳定、增殖速度快、贴壁率高、可连续传代,可用于MSCs功能及应用的进一步研究。应用BrdU体外标记兔MSCs是安全可靠的。; 朱峰胡贞贞郭光华王红梅; 关键词：骨髓间充质干细胞流式细胞术 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

骨髓间充质干细胞移植对吸入性损伤家兔炎症反应和肺损伤的影响被引量：15: 2010年; 目的初步了解骨髓间充质干细胞（MSC）移植对烟雾吸入性损伤兔外周血主要炎症因子和肺水质量分数以及肺组织损伤的影响. 方法取16只成年新西兰大耳白兔制成烟雾吸入性损伤模型后,按随机数字表法分成单纯致伤组和MSC移植组（各8只）.单纯致伤组伤后立即经耳缘静脉注入10 mL PBS;MSC移植组伤后立即经耳缘静脉注入10 mL PBS,内含兔第3代MSC（分离自健康幼龄新西兰大耳白兔）1×107个.另取8只成年新西兰大耳白兔作为正常对照组,不致伤,仅经耳缘静脉注入10 mL PBS.单纯致伤组和MSC移植组分别于致伤后2、4、6 h采血,以ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量;伤后24 h,取兔肺行大体观察和组织病理学观察（左下肺）,取右肺中叶组织计算肺水质量分数.正常对照组同法抽血并取肺组织进行检测.对实验数据行t检验.结果（1）两致伤组家兔各时相点血清TNF-α含量均明显高于正常对照组（t=2.43～9.57,P＜0.05或P＜0.01）.单纯致伤组各时相点血清IL-1β和IL-6含量明显高于正常对照组（t=8.49～19.80,P值均小于0.01）;MSC移植组各时相点IL-1β含量与正常对照组接近（t=0.11～0.92,P值均大于0.05）,IL-6含量伤后2 h与正常对照组接近（t=2.12,P＞0.05）,4、6 h显著升高（t值均为2.83,P值均小于0.05）.MSC移植组家兔各时相点血清TNF-α、IL-1β、IL-6明显低于单纯致伤组（t=2.35～12.45,P＜0.05或P＜0.01）.（2）MSC移植组伤后2、4、6 h血清IL-10含量分别为（13.0±3.6）、（11.6±8.5）、（15.2±4.4）pg/mL,与单纯致伤组各对应时相点的含量[分别为（5.5±3.4）、（5.0±1.7）、（7.9±3.5）pg/mL]相比均显著升高（t值分别为4.28、2.15、3.67,P值均小于0.01）.两致伤组亦明显高于正常对照组（t=2.46～8.14,P＜0.05或P＜0.01）.（3）大体观察及组织病理学观察见,MSC移植组肺组织损伤程度较单纯致伤组明显改善.（4）伤后24 h; 朱峰郭光华陈雯彭燕邢娟娟王年云; 关键词：骨髓间充质干细胞肺损伤

肺外成体干细胞移植治疗急性肺损伤研究进展被引量：7: 2009年; 肺外成体干细胞移植治疗急性肺损伤具有巨大的应用前景。移植入体内的肺外成体干细胞首先在损伤肺组织细胞释放的一系列信号因子的引导下归巢到肺损伤和炎症部位,分化为肺组织细胞(肺上皮细胞、血管内皮细胞等)并发挥相应功能。干细胞移植后不仅具有分化能力,还具有抗炎效应和免疫调节功能,成为目前新的研究热点。; 朱峰胡贞贞郭光华; 关键词：成体干细胞干细胞移植急性肺损伤生物学作用

兔骨髓间充质干细胞体外BrdU标记的实验研究: 2010年; 目的探讨体外5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU）标记兔骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,MSCs）的方法,探索BrdU体外标记兔MSCs的最佳时间和最佳浓度。方法通过形态学及流式细胞术鉴定全骨髓培养法分离培养的细胞为MSCs。MSCs经不同BrdU浓度标记及不同BrdU标记时间,免疫细胞化学法鉴定并评估。结果全骨髓培养法培养的MSCs经流式细胞术检测,证明所培养的细胞为较纯的MSCs。BrdU标记的阳性细胞率随标记时间延长以及标记物BrdU的浓度增加而逐渐增高,40μmol/L及72 h标记阳性率达85%~95%。结论应用BrdU体外标记MSCs是安全可靠的,兔MSCs体外BrdU标记最佳时间和最佳浓度分别为72 h和40μmol/L。; 朱峰郭光华詹剑华谢安; 关键词：骨髓间充质干细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

骨髓间充质干细胞在烟雾吸入性损伤家兔体内向功能细胞分化的观察被引量：17: 2011年; 目的观察静脉移植的骨髓间充质干细胞（MSC）在烟雾吸入性损伤家兔体内＂归巢＂和分化情况.方法将32只新西兰大耳白兔按照随机数字表法分为正常对照组、吸入性损伤组、正常对照＋MSC处理组和MSC治疗组,每组8只.正常对照组家兔不致伤,经耳缘静脉注入10 mLPBS;正常对照＋MSC处理组家兔不致伤,经耳缘静脉注入内含1×107个溴脱氧尿苷（BrdU）标记的第3代兔MSC的PBS 10 mL.其余2组家兔造成重度烟雾吸入性损伤后,吸入性损伤组同正常对照组处理,MSC治疗组同正常对照＋MSC处理组处理.4组家兔分别于注射后7或28 d,取肺组织、气管组织行免疫组织化学染色观察MSC在受损组织中＂归巢＂情况;核标记物BrdU分别与肺或气管内特异性膜标记物水通道蛋白5（AQP-5）、碱性磷酸酶（AKP）、CD34以及角蛋白组合,行免疫组织化学双染色,观察MSC向功能细胞分化情况;HE染色观察肺及气管损伤情况.结果（1）免疫组织化学染色显示,MSC治疗组可见MSC于注射后7 d在肺组织和气管组织中＂归巢＂;正常对照＋MSC处理组未见此现象.（2）免疫组织化学双染色显示,MSC治疗组于注射后28 d肺组织中可见AQP-5和AKP以及CD34表达阳性的MSC,气管组织中未见角蛋白表达阳性的MSC,正常对照＋MSC处理组未见上述阳性表达细胞.（3）HE染色显示,MSC治疗组肺损伤和气管损伤较吸入性损伤组明显减轻,Fb增殖显著减少.结论静脉移植的MSC能＂归巢＂至烟雾吸入性肺损伤炎症反应明显的肺组织和气管组织区域,并分化为肺泡Ⅰ型上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺血管内皮细胞,可能参与了烟雾吸入性损伤的组织修复过程.; 朱峰郭光华陈任生余克涵黄松王年云邢娟娟; 关键词：间质干细胞细胞分化肺泡上皮细胞肺血管内皮细胞

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江西省教育厅青年科学基金(GJJ09432)

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