国家自然科学基金(30140008)
- 作品数：6 被引量：21H指数：2
- 相关作者：蔡建辉张峰谢绍建李荣琴刘三光更多>>
- 相关机构：河北医科大学第二医院香港中文大学华北石油管理局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用载体介导的RNAi技术抑制胰腺癌细胞K-RAS^(Asn12)的表达被引量：2
- 2006年
- 为了研究载体介导的RNAi(RNA interference)技术特异地抑制K-RASAsn12(K-RAS第12位密码子突变形式为GAT)在胰腺癌细胞中的表达,合成两条编码针对K-RASAsn12突变特异性短发夹 RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的单链DNA,并将其克隆到pSilenCircle载体中,构建含目的基因片段的重组质粒pSC-K-RASAsn12。同法构建含GFP基因片断的重组质粒pSC-GFP做为对照。用其分别瞬时转染人胰腺癌AsPC-1细胞和BxPC-3细胞后,经半定量RT-PCR和Western blot检测K- RAS的表达水平。结果表明构建的针对K-RASAsn12的编码突变特异性shRNA的质粒表达载体可特异的抑制胰腺癌细胞的K-RASAsn12表达,但对野生型的K-RAS(K-RASWT)表达无影响。
- 孟繁杰付泽娴张峰李保东谢绍建蔡建辉
- 基因枪转导K-ras突变反义基因对人胰腺癌细胞生长曲线的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨基因枪转导K-ras突变反义基因对胰腺癌细胞生长的影响。方法利用基因枪技术,将反义基因转导入宿主细胞,通过活细胞计数试剂盒Cell Counting Kit-8和Thermo Multiskan Ascant酶标仪观察K-ras突变特异性反义基因转导后对AsPC-1、MiaPaCa-2和BxPC-3三种人胰腺癌细胞的生长曲线变化情况。结果转导K-ras突变特异性反义基因后,突变型AsPC-1和MiaPaCa-2胰腺癌细胞的生长曲线明显向右下移动。结论转导K-ras突变特异性反义基因后,具有突变型K-ras基因的胰腺癌细胞系的生长都受到明显抑制。
- 李晓冬马毓梅蔡建辉张峰
- 关键词：胰腺癌基因枪基因治疗反义基因
- 突变体富集聚合酶链反应检测胰腺癌K-ras基因突变的研究被引量：6
- 2005年
- 张峰刘三光刘晔李冬斌李荣琴谢绍建蔡建辉
- 关键词：胰腺癌K-RAS基因突变
- 基因枪转导突变特异性K-rassiRNA对胰腺癌细胞生长的抑制作用被引量：15
- 2006年
- 目的探讨基因枪转导突变特异性K-ras si RNA对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法根据胰腺癌细胞系突变特征,设计突变特异性K-ras si RNA;应用基因枪将si RNA转导入胰腺癌细胞系,提取总RNA和胞浆蛋白;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Westernblot)方法,检测基因枪转导突变特异性K-ras si RNA对突变型K-ras基因表达的干扰作用;行细胞爬片K-ras p21蛋白免疫组织化学染色,探讨si RNA对K-ras p21蛋白表达的抑制作用;采用CCK-8(cell counting kit-8)活细胞计数法,绘制转基因前后细胞生长曲线,观察si RNA的抑瘤效果。结果RT-PCR结果显示,K-ras突变特异性si RNA,能有效抑制K-ras基因表达(P<0.05);Westernblot和免疫组织化学结果表明,K-ras p21蛋白的表达明显降低(P<0.05);细胞生长曲线显示,转导si RNA组较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论基因枪可以有效地对小片段双链si RNA进行细胞内转导;突变特异性K-ras si RNA,可显著下调胰腺癌细胞系突变型K-ras mRNA及K-ras p21蛋白表达,并能有效抑制肿瘤细胞的增殖。
- 张峰刘晔刘三光谢绍建李冬斌李荣琴蔡建辉
- 关键词：基因枪SIRNA胰腺癌细胞生长
- 针对K—ras^Asn12的短发夹RNA表达载体对胰腺癌细胞生长的抑制作用被引量：2
- 2008年
- 我们利用RNAi技术达到了特异抑制胰腺癌突变K-ras^Asn12的目的，现报道如下。一、材料和方法
1．材料：AsPC-1和BxPC-3细胞株购自中科院上海细胞库。pSilenCircle试剂盒购自Allele公司。质粒抽提纯化盒购自Promrga公司。PCR引物及插入序列由上海生工生物工程公司合成。CellCounting Kit-8购自日本同仁公司。An-nexin V-FITC apoptosis detectionkit购自晶美公司。
- 孟繁杰曹斌蔡建辉
- 关键词：胰腺癌细胞生长短发夹RNAPC-3细胞株RNAI技术ASPC-1
- 基因枪转导K-RAS反义基因对胰腺癌细胞(K-RAS P21)蛋白表达的影响
- 2007年
- 目的观察基因枪转导K-RAS突变特异性反义基因对胰腺癌细胞K-RAS P21蛋白的影响。方法利用基因枪技术,将反义基因转导入宿主细胞,通过免疫细胞化学和Western blot方法,观察K-RAS突变特异性反义基因转导后AsPC-1、MiaPaCa-2和BxPC-3三种人胰腺癌细胞系K-RAS P21蛋白的变化。结果转导K-RAS突变特异性反义基因后,AsPC-1和MiaPaCa-2胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达明显降低;BxPC-3胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达无明显变化。结论突变特异性K-RAS反义基因经基因枪有效转导后,可用于胰腺癌的治疗。
- 李晓冬张峰马毓梅蔡建辉
- 关键词：胰腺癌基因枪反义基因
