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PADRE-TGFβ1融合蛋白的原核表达及鉴定: 2011年; 构建PADRE-TGFβ1原核表达质粒,并对其进行诱导表达和反应原性分析。对PADRE、联接序列(Linker)及TGFβ1的基因序列进行密码子优化,采用全基因合成的方法人工合成全长PADRE-Linker-TGFβ1序列,合成产物克隆至pET-28a(+)质粒。将构建好的质粒转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在约19.87 ku处出现与预期目的蛋白一致的新蛋白条带,Western blot鉴定结果显示,该蛋白能够与TGFβ1抗体发生特异性结合。表明成功构建了pET28-PADRE-TGFβ1原核表达质粒,表达的融合蛋白质具有TGFβ1的反应原性,为TGFβ1自体疫苗的制备及应用奠定了基础。; 许道军余兴龙刘雪燕薛立群; 关键词：融合蛋白原核表达

猪圆环病毒感染及动物模型研究进展被引量：6: 2011年; 1974年德国学者Tischer从多株连续传代的猪肾细胞(PK-15)中发现了猪圆环病毒(PCV),其致病性及其疾病直到1991年才由Clark报道,称为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)。随后,许多学者对PCV-2感染以及PMWS的动物模型建立进行了广泛研究,证实了免疫激发及PCV-2与其他病原混合感染对PMWS的临床症状与病理变化具有促进作用,阐述了PCV-2感染猪所表现的不同临床症状类型。通过限菌仔猪与小鼠试验性感染PCV-2,在病原致病性、病毒体内分布与病理损伤等研究取得了新的进展,现对此作以综述,为从事PCV-2研究者提供参考。; 邓治邦邓洁汝潘荞余兴龙; 关键词：猪圆环病毒病毒感染病理损伤动物模型

利用圆环病毒2结构蛋白建立检测其抗体的间接ELISA方法被引量：5: 2013年; 为建立检测PCV2抗体的间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将猪圆环病毒2(porcine circovirus type 2,PCV2)结构蛋白Cap(不含核内化信号肽)的基因克隆到原核表达载体pET 28a(+)中,并在大肠杆菌中表达,获得可溶性的重组蛋白(Cap⊿41),用Cap⊿41作为诊断抗原,确立了间接ELISA的最佳反应条件,并对来自4个猪场的394份血清进行检测。结果表明,与免疫荧光检测相比,建立的间接ELISA的检测敏感性和特异性分别为93.14%和95.72%,且建立的间接ELISA的批内与批间差异较小。此外,对394份血清的检测结果体现的4个猪场的PCV2抗体消长规律与临床结果相符,表明建立的间接ELISA方法可靠,可以用于PCV2抗体的检测。; 葛猛屈泰龙罗维李杰周洪锐余兴龙; 关键词：结构蛋白抗体检测酶联免疫吸附试验

长沙9个犬细小病毒毒株的分离与鉴定被引量：5: 2012年; 从感染犬细小病毒(CPV)的长沙病犬粪便中分离CPV,采用同步接毒方式,将病毒悬液接种到猫肾细胞(F81),经PCR鉴定,从10份阳性样品中分离到9株CPV,血凝试验显示9株CPV均能凝集猪红细胞,血凝价均超过了27。为进一步分析CPV长沙毒株的VP2分子生物学特征及抗原变异规律,对9个CPV毒株的VP2基因进行克隆、测序及序列分析,结果表明:CPV长沙毒株与全国及世界各地CPV毒株相比,其VP2基因序列同源性超过97%,其VP2基因推导的氨基酸序列同源性超过94%;其VP2基因推导的氨基酸序列有独特的变异,且有独特变异的毒株在基因进化树上处于同一个分支。; 肖博仁罗维刘崇灵李润成余兴龙; 关键词：犬细小病毒

猪圆环病毒2型感染小鼠脾脏内CD4^+CD25^+调节性T细胞的动态变化被引量：1: 2010年; 为分析猪圆环病毒2型(PCV2)感染小鼠后脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)占CD4+T细胞比例的动态变化,探讨Tregs与PCV2感染的关系,本研究选择清洁级昆明小鼠60只,随机分成实验组和对照组,实验组腹腔接种PCV2,分别在接种后第0 d、5 d、10 d、20 d、30 d和60 d取脾脏制备单细胞悬液,用FITC-CD4和PE-CD25单克隆抗体标记Tregs,采用流式细胞仪检测Tregs占总CD4+T细胞百分比的动态变化。结果表明感染组小鼠脾细胞中Tregs百分比从第5 d开始逐步上升,第20 d达峰值后逐渐下降,感染组Tregs百分比第10 d、20 d、30 d时显著高于对照组(p<0.05),但第60 d两组间差异不显著(p>0.05)。试验结果证明PCV2感染昆明小鼠后,可在小鼠脾脏内诱导明显的Tregs增殖,这些增殖的细胞可能在PCV2感染中发挥免疫抑制作用。; 许道军余兴龙邓治邦袁安文王乃东薛立群; 关键词：PCV2 CD4+CD25+调节性T细胞小鼠

小鼠感染猪圆环病毒2型的超微结构病变观察被引量：2: 2012年; 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)对小鼠超微结构的病理损伤及其病毒在细胞内的复制,20只6周龄的昆明小鼠随机平均分成2组(即A组和B组),A组小鼠经腹腔注射PCV2细胞培养物0.1mL/只(含病毒1 000TCID50),B组以同样的方式和剂量注射无菌细胞培养液作为对照。于PCV2感染后14d,处死所有小鼠,取其组织做电镜观察和PCV2PCR检测。结果显示,在电镜下,所有PCV2感染鼠的超微结构病变基本一致,主要表现为淋巴器官、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑、肠等脏器实质细胞凋亡或坏死,细胞内线粒体水肿、内质网扩张,间质毛细血管淤血、炎症细胞浸润,并在脾脏、胸腺、淋巴结的淋巴细、巨噬细胞,以及肝细胞,肾足细胞,脑神经细胞的胞浆或胞核内发现病毒包涵体。同时通过PCR检测,所有PCV2感染鼠的组织均可检出PCV2DNA。B组(对照组)小鼠除在淋巴结可见极少数淋巴细胞凋亡外,其他组织均无任何超微结构病变;同时,所有组织也未检出PCV2DNA。由此说明PCV2可在昆明小鼠多脏器实质细胞内复制,并诱导细胞凋亡。; 邓治邦余兴龙王乃东袁安文罗维薛立群; 关键词：超微结构损伤昆明小鼠

不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果: 2013年; 目的研究不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果。方法将重组LTB-VP1和BSA蛋白分别用氢氧化铝吸附后,制备成不同浓度的亚单位疫苗,以100、50、20、10、5和1μg/只的剂量免疫昆明小鼠,共免疫3次。于初次免疫后第14、28、42、56天断尾采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平和特异性IgG1/IgG2a比率,并采用尿素变性法检测小鼠血清中抗体相对亲合力指数(abidity index,AI)。结果 LTB-VP1和BSA抗原激发的抗体水平随免疫次数的增加而不断升高,与抗原剂量呈非线性关系,不同抗原的合适使用剂量也不相同。LTB-VP1抗原以20μg/只剂量产生的抗体水平和抗体的AI值最高;IgG1/IgG2a平均值为1.04,各剂量组Th1/Th2型免疫反应处在一种平衡状态。BSA抗原在5和100μg/只剂量时激发的抗体水平相近,抗体的AI值差异有统计学意义(P<0.05);IgG1/IgG2a平均值为2.4,各剂量组以Th2型免疫反应为主。结论抗体水平不随抗原剂量的增加而增加,低剂量抗原即可产生较好的免疫效果,为兽用疫苗的临床使用提供了数据参考。; 喻凯田世成屈泰龙余兴龙; 关键词：亚单位疫苗抗原抗体水平免疫球蛋白G

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