河南省卫生厅医学科技攻关计划项目(200703064)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 相关作者：李印朱宝菊乔玉环陈琛马军更多>>
- 相关机构：郑州大学第一附属医院河南省肿瘤医院郑州大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：河南省卫生厅医学科技攻关计划项目河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 含hTERT基因核心启动子和canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其对卵巢上皮性癌的抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的构建含hTERT基因核心启动子和canstatin基因的重组腺病毒载体AdhTERT-Can，探讨其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）的抑制作用。方法应用分子克隆技术构建重组腺病毒载体AdhTERT-Can，并采用酶切、电泳、测序方法进行鉴定。体外实验：卵巢癌细胞株H08910PM细胞经脂质体介导转染AdhTERT-Can后，荧光显微镜观察H08910PM细胞的转染情况，RT-PCR技术检测H08910PM细胞中canstatinmRNA的表达。体内实验：建立卵巢癌裸鼠异体移植瘤动物模型，随机分为3组，AdhTERT-Can组（尾静脉注射含canstatin基因的重组腺病毒载体AdhTERT-Can上清液）、Ad-Can组（尾静脉注射Ad-Can上清液）和空白对照组（尾静脉注射磷酸盐缓冲液），比较各组裸鼠治疗后的肿瘤体积。结果成功构建重组腺病毒载体AdhTERT-Can，并经相关鉴定证实。体外实验显示，AdhTERT-Can质粒转染H08910PM细胞后，在荧光显微镜下观察可见约60％卵巢癌细胞发出绿色荧光；RT—PCR技术检测显示，H08910PM细胞中有canstatinmRNA的表达。体内实验显示，自治疗后8d开始，各组肿瘤生长出现明显差异，AdhTERT-Can组肿瘤体积明显小于Ad-Can、空白对照组（P〈0．01），且随着治疗时间的延长差异越来越明显；而Ad-Can组与空白对照组比较，差异则无统计学意义（P〉0．05）。治疗30d后，各组均可见肿瘤破溃和囊性变，但以AdhTERT-Can组最为明显，Ad-Can组次之；病理检查可见，各组肿瘤细胞均可见液化和坏死，尤其以AdhTERT-Can组最为明显。结论本研究成功构建了重组腺病毒载体AdhTERT-Can，且其转染卵巢癌细胞的能力较强；AdhTERT-Can质粒通过尾静脉注射能明显抑制裸鼠体内卵巢癌的生长，显示了肿瘤基因治疗的靶向性。
- 朱宝菊乔玉环李印
- 关键词：末端转移酶肽碎片血管生成抑制剂腺病毒科
- 腺病毒介导Canstatin基因治疗卵巢癌的实验研究
- 2009年
- 应用分子克隆技术,构建重组腺病毒质粒Adtrack-canstatin(Ad-can),并建立人卵巢上皮性癌移植瘤动物模型.动物模型建立后,将荷瘤裸鼠随机分为3组,Ad-Can、Ad-GFP和PBS对照组,每组6只.治疗采用肿瘤内局部多点注射4.0×1010PFU/ml病毒上清液或PBS液0.1 ml,共2次,注射间隔72小时.8天后肿瘤体积出现明显差异,Ad-can组明显小于对照组,P<0.01,而Ad-GFP和PBS对照组间无明显差异,P>0.05.另外,Ad-can组CD105明显减少,微血管密度降低,P<0.05.结果提示:Canstatin基因能明显抑制人卵巢上皮性癌的生长,其机制可能是通过抑制肿瘤新生血管形成起作用的.
- 朱宝菊陈琛马军于泳李印
- 关键词：CANSTATIN腺病毒基因治疗卵巢肿瘤CD105
- 人canstatin腺病毒载体的构建及在卵巢癌细胞的表达被引量：2
- 2008年
- 目的:构建并鉴定人canstatin基因腺病毒表达载体Ad-can及研究在卵巢癌的表达。方法:(1)提取人卵巢癌组织总RNA,设计带有特殊酶切位点的引物,用RT-PCR方法扩增canstatin片段,克隆入载体pMD-18T,并转化至大肠杆菌DH5α,大量扩增目的基因(pMD-can);(2)双酶切pMD-can和pAdtrack质粒,酶切产物在T4DNA连接酶作用下连接,获得pAdtrack-canstatin(pAdtr-can)穿梭载体;(3)PmeⅠ酶切pAdtr-can,使其线性化,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy共同转化大肠杆菌BJ5183,使其同源重组,获得pADeasy-canstatin(pAd-can)载体;(4)内切酶PacⅠ再次将重组子线性化,脂质体转染细胞株HEK293,借助GFP表达观察包装病毒Ad-can。重组腺病毒载体感染HEK293细胞扩增病毒,经4次扩增、纯化后,用空斑形成实验法测病毒滴度;(5)用包装的病毒转染卵巢癌细胞HO8910PM,借助GFP的荧光表达观察卵巢癌细胞转染情况;(6)RT-PCR检测转染后卵巢癌细胞中目的基因的表达。结果:各中间载体经酶切鉴定,DNA测序证实正确。转染的HEK293细胞2～3天产生病毒,7～10天出现病毒斑。最终包装的病毒中携带有目的基因canstatin,并能够在包装细胞中表达。用空斑形成实验法测定病毒滴度约为1.6×1011pfu/ml。将包装的病毒转染卵巢癌细胞,荧光显微镜下可观察到大部分卵巢癌细胞发出绿色荧光,经RT-PCR检测可发现canstatin基因扩增片段。结论:大肠杆菌内同源重组法能有效和较方便的构建canstatin基因腺病毒载体Ad-can。重组子Ad-can能转染卵巢癌细胞,并在卵巢癌细胞中表达,为进一步研究canstatin基因治疗卵巢肿瘤提供了良好的转导载体。
- 朱宝菊乔玉环陈琛李印
- 关键词：CANSTATIN基因治疗腺病毒卵巢肿瘤
