国家自然科学基金(30972188)
- 作品数：19 被引量：79H指数：5
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- 相关机构：吉林化工学院大连大学吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 重组人γ-干扰素纯化工艺的建立被引量：1
- 2012年
- 采用超声破碎的方法提取hIFN-γ包涵体,经盐酸胍溶解、稀释复性、浓缩后通过SPSepharose F.F层析纯化,简化了纯化步骤,缩短周期,提高了蛋白回收率。SDS-PAGE检测表明,hIFN-γ纯度达97%,比活性为3.5×107IU/mg,总回收率达40%。说明整个工艺适合于大规模生产的要求,具有实际应用价值,为hIFN-γ批量生产奠定了良好的基础。
- 许崇利欧阳红生许崇波张艳平
- 关键词：重组人Γ-干扰素包涵体复性纯化
- A型产气荚膜梭菌α毒素His-68基因的定点突变与结构分析被引量：3
- 2010年
- 利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素(CPA)第68位组氨酸(CAT)定点突变成甘氨酸(GGT),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-H68G)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPA-H68G含有CPA-His68Gly突变基因,且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-H68G)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的31.65%。应用EXPASY服务器上的SOPMA法对CPA和CPA-His68Gly突变体分子进行二级结构的预测,同时模拟了其三级结构。结果显示,CPA和CPA-His68Gly突变体的二级结构主要是由α螺旋和无规则卷曲组成的,三级结构非常相似。
- 许崇波樛跃许崇利高凤山窦永喜才学鹏
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素基因定点突变
- 乳糖诱导剂对重组C型产气荚膜梭菌α毒素基因表达的影响被引量：2
- 2011年
- 采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含α毒素基因的重组质粒,用SDS-PAGE检测不同条件下α毒素基因的表达情况。经酶切鉴定证实重组质粒pXETA02含有α毒素基因且基因序列和阅读框架正确。结果表明,以乳糖诱导α毒素基因表达的优化条件为:培养基pH 7.0,培养温度37℃,菌体生长密度D600达到1.0时分批添加0.5g/L乳糖,诱导5h,此时目的蛋白表达量为23%,实现了α毒素基因的高效表达。从而为C型产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌苗的生产工艺研究提供了可靠的试验数据。
- 许崇利欧阳红生许崇波张艳平
- 关键词：C型产气荚膜梭菌Α毒素基因
- A型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXMCPA02表达条件的优化被引量：1
- 2009年
- 采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含α毒素突变基因的重组质粒,同时用SDS-PAGE检测不同条件下α毒素突变基因的表达情况。经酶切鉴定证实重组质粒pXMCPA02含有α毒素突变基因且基因序列和阅读框架正确。同时以IPTG为诱导剂诱导α毒素突变基因表达并对其表达条件进行优化。优化表达的结果是:培养基pH7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.8 mmol/L,菌体生长密度OD600达到0.8时加入IPTG,诱导时间5 h,此时重组菌株pXMCPA02蛋白表达量为35%。从而实现了α毒素突变基因的高效表达,为A型产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌苗的生产工艺研究提供了可靠的试验数据。
- 许崇利许崇波惠远峰张立东
- 关键词：A型产气荚膜梭菌Α毒素基因突变
- 魏氏梭菌外毒素的研究进展被引量：7
- 2016年
- 魏氏梭菌广泛分布于食物、人畜肠道、土壤等自然环境,分为A,B,C,D和E型并产生多种毒素.对魏氏梭菌外毒素的结构、作用机制、遗传学特性和动物疾病中的作用进行阐述,以期对魏氏梭菌产生的各种外毒素深入研究提供有价值参考.
- 许崇利
- 关键词：魏氏梭菌外毒素
- 产气荚膜梭菌α毒素基因的定点突变与表达被引量：5
- 2010年
- 选择可能影响α毒素生物活性的氨基酸相关碱基位点进行定点突变,构建α毒素基因的突变体并在大肠杆菌中表达。利用PCR定点突变技术,进行第68位组氨酸→亮氨酸的定点突变,构建含α毒素突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)。结果表明,α毒素突变基因第287位核苷酸由A→T,经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pXMCPA02含有α毒素突变基因,且基因序列和阅读框架正确;重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的33.82%。因此,已成功构建了α毒素基因突变体,并实现了在重组大肠杆菌中的表达。
- 许崇利许崇波
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素基因定点突变
- 重组人γ-干扰素表达菌株的构建被引量：3
- 2011年
- 从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出hIFN-γ基因。构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET32a(+)-hIFN-γ)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pET32a(+)-hIFN-γ含有hIFN-γ基因,且基因序列和阅读框架正确。经W estern blot鉴定证实为hIFN-γ,并实现了在大肠杆菌中的高效表达。表达产物占菌体总蛋白的52%。同时对其抗病毒活性进行了测定,从而为hIFN-γ的生物活性和生产工艺研究提供了可靠的试验数据。
- 许崇利胡静涛许崇波
- 关键词：大肠杆菌反转录聚合酶链反应纯化
- 重组人γ-干扰素摇瓶生产工艺优化被引量：1
- 2011年
- 通过研究不同类型培养基和培养温度、起始pH值等发酵条件对rhIFN-γ产量的影响,初步确认了摇瓶水平发酵各因素的最优条件,优化的发酵条件为发酵起始pH值7.0、培养温度37℃、IPTG诱导浓度1.0 mmol/L、菌体生长密度OD600达到1.0时加入IPTG、诱导时间为3 h。此时rhIFN-γ产量达到最高水平,从而为rhIFN-γ批量生产奠定了良好的基础。
- 许崇利胡静涛许崇波
- 关键词：重组人Γ-干扰素摇瓶发酵
- 人γ干扰素的高效表达被引量：1
- 2010年
- 采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含hIFN-γ基因的重组质粒,SDS-PAGE检测不同条件下hIFN-γ基因的表达情况,用Western blot和亲和层析对表达产物进行鉴定和纯化,并对表达条件进行优化。经酶切鉴定和核苷酸序列测定证实重组质粒pET32a(+)-hIFN-γ含有hIFN-γ基因且阅读框架正确,以IPTG诱导hIFN-γ基因表达的优化条件是:培养基pH7.0,培养温度37℃,IPTG浓度0.8 mmol/L,菌体生长密度OD600达到0.8时加入IPTG,诱导时间5h,此时hIFN-γ蛋白表达量为52%。从而实现了hIFN-γ基因的高效表达并优化了其表达工艺。从而为hIFN-γ的生物活性和生产工艺研究提供了可靠的试验数据。
- 许崇利谢莹许崇波于洪雪
- 关键词：大肠杆菌基因表达
- 重组人γ-干扰素基因工程菌发酵工艺优化被引量：1
- 2011年
- 研究不同类型培养基、诱导时间、菌体密度和不同补料对rhIFN-γ表达的影响,并运用高密度发酵工艺对rhIFN-γ的产量进行优化,目的蛋白表达量从4 000 mg/L提高到20 000 mg/L以上,发酵产量提高了5倍,大大提高了效率。同时为验证工艺的稳定性,将优化的发酵条件进行连续三批重复发酵实验。结果表明该优化条件具有重复性,表达稳定,维持在40%左右,从而为rhIFN-γ大规模生产奠定了良好的基础。
- 许崇利欧阳红生许崇波张艳平
- 关键词：重组人Γ-干扰素发酵
