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猪瘟病毒(CSFV)NS2蛋白抑制MG132诱导的细胞凋亡作用: 为研究猪瘟病毒(CSFV)NS2蛋白对宿主细胞凋亡的影响,本研分别将CSFV NS2基因和E2基因与GFP在猪血管内皮细胞中进行融合表达,以MG132为细胞凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并采用流式细胞仪和Hoechst3334...; 唐青海张彦明郭抗抗何雷范丽仝刚代晨; 关键词：猪瘟病毒 MG132 凋亡; 文献传递

整合素干扰载体的构建及细胞转染试验: 2012年; 应用RNA干扰方法,设计合成了整合素的2个不同干扰位点的shRNA及空白对照载体,转化E.coli DH5α菌株,扩大培养后提取质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞。RT-PCR方法检测显示,干扰载体在mRNA水平上的干扰效果明显。该干扰载体的构建及转染,为进一步研究整合素对猪细胞增殖特性及猪瘟病毒在细胞中的增殖作用奠定了基础。; 李维维张彦明王刚程敏陈婷; 关键词：整合素细胞转染

猪瘟病毒NS2 3′端基因的克隆与原核表达被引量：2: 2011年; 从真核表达载体pEGFP-NS2中克隆得到猪瘟病毒(CSFV)NS2 3′端的基因片段,将其克隆到pET-32a载体上,构建出重组表达载体,经IPTG诱导表达。结果表明,克隆了大小为363 bp NS2 3′端的基因,重组载体pET-NS2-C363在大肠埃希菌中以包涵体形式表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定大小为33.84 ku,与预期结果一致。结果为进一步研究NS2蛋白与猪脐静脉血管内皮细胞中蛋白之间的相互作用提供材料及为制备单克隆抗体奠定基础。; 杨幼聪张彦明康恺向华汤智慧张三东; 关键词：猪瘟病毒 NS2基因原核表达

猪细胞周期蛋白A基因的克隆及其功能研究: 2010年; 本研究旨在克隆猪细胞周期蛋白A基因(CyclinA),并在猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)中表达,以验证其功能。以人的CyclinA基因为信息探针,经电子克隆得到猪CyclinA基因,通过RT-PCR和DNA测序验证电子克隆结果并对其作生物信息学分析,用RT-PCR、Westernblot研究它在SUVEC中的表达情况。应用激光共聚焦显微镜分析它在细胞中的亚细胞定位,并通过流式细胞仪分析细胞周期以及用MTS法测定细胞的增殖能力。结果如下:核酸测序证明RT-PCR产物同电子克隆结果相符。该cDNA包含1299bp的完整开放阅读框(ORF),共编码432个氨基酸,经NCBIBLAST分析,该基因定位于猪的8号染色体上。Westernblot结果显示CyclinA基因编码蛋白的相对分子质量大小约为40ku,亚细胞定位研究表明该蛋白定位于细胞核中。经流式细胞仪分析表明稳定表达该基因的细胞,其G1期的细胞数量比对照组细胞增加了15%～20%,而S期的细胞数量比对照组细胞减少了约18%;MTS法检测显示细胞株SUVEC-CycAGFP的增殖活性明显高于对照组细胞。作者成功克隆到新基因猪源细胞周期蛋白A,并验证了其生物学功能,为今后开展病毒感染对猪细胞周期蛋白A影响的研究奠定了基础。; 范丽唐青海张彦明刘伟仝刚; 关键词：克隆真核表达细胞周期 MTS

猪瘟病毒NS2蛋白的亚细胞定位及其对细胞增殖和周期的调节作用: 为了探明猪瘟病毒(CSFV)NS2蛋白的亚细胞定位特征及其对宿主细胞增殖与周期的影响,本研究采用RT-PCR方法扩增CSFV NS2基因,采用激光共聚焦技术研究了CSFV NS2蛋白的亚细胞定位特征;采用MTS方法和流式...; 唐青海张彦明范丽仝刚何雷代晨; 关键词：猪瘟病毒亚细胞定位增殖周期; 文献传递

猪瘟病毒间接免疫荧光检测方法的建立被引量：2: 2013年; 为了建立猪瘟病毒(CSFV)检测的间接免疫荧光(IFA)法,试验以猪瘟阳性血清为一抗、荧光素FITC标记的羊抗猪IgG为二抗,将CSFV接种于猪血管内皮细胞(EC)后,并对反应条件进行优化。结果表明:IFA法最佳工作条件为猪瘟阳性血清1∶200倍稀释,荧光素FITC标记的羊抗猪IgG荧光抗体1∶50倍稀释;用建立的IFA法检测CSFV感染的EC为阳性,而用猪圆环病毒(PCV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的EC检测结果为阴性。说明建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA法具有敏感性、特异性、简便快速等优点,可用于CSFV在EC上的感染和定位研究。; 宁蓬勃任敏梁武龙何雷郭抗抗张彦明

稳定表达猪干扰素调节因子7的ST细胞株的建立: 2013年; 干扰素调节因子(IRF)在抗病毒感染中具有重要作用,为构建稳定表达猪IRF7(pIRF7)的猪睾丸细胞系(ST),本研究从猪淋巴细胞中扩增获得pIRF7基因,将其插入pEGFP-C3载体中构建重组表达质粒pEGFP-pIRF7。并转染于ST细胞中,通过G418加压筛选及细胞纯化获得G418抗性ST细胞株(STA1)。RT-PCR和western blot检测结果表明,STA1细胞株能够稳定表达重组pIRF7;而且以聚肌胞刺激STA1细胞可以观察到表达的pIRF7在细胞内具有核转位能力,该项研究为进一步研究猪瘟病毒对pIRF7的作用奠定基础。; 陈恒徐磊宁蓬勃郭抗抗何雷林鸷吕亚辉林青张彦明; 关键词：稳定细胞系核转位

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