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江苏省医学重点人才培养基金([2011]15)
作品数:
1
被引量:4
H指数:1
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张林
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汤伟伟
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张林
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2013
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miR-135a对卵巢上皮性癌细胞中HOXA10基因表达及细胞增殖和凋亡的影响
被引量:4
2013年
目的研究微小RNA-135a(miR-135a)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系SKOV3细胞中HOXAIO基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法(1)应用生物信息学技术预测与miR-135a高度相关的靶基因(即HOXAIO基因)。(2)将miR-135a成熟体模拟物(mimics)、miR-135a成熟体抑制物(inhibitor)及阴性对照分别转染SKOV3细胞,采用逆转录(RT)-PCR技术和蛋白印迹法检测转染不同时间(分别为24、48和72h)后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA和蛋白的表达水平。(3)报告基因实验验证miR-135a对HOXAIO基因表达的调节作用,采用含miR-135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞,以转染微小RNA(mirRNA)慢病毒质粒者为对照。(4)采用四甲基偶氮唑蓝(MTI')比色法检测转染不同时间(分别为24、48和72h)后SKOV3细胞的增殖能力[以吸光度(A)值表示],蛋白印迹法检测转染48h后SKOV3细胞中凋亡相关蛋白[包括bel-2、bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3((3aspase-3)]的表达。结果(1)生物信息学技术预测,得出与miR-135a高度相关的靶基因为HOXAIO基因。(2)RT—PCR技术检测显示,随着转染时问的延长(分别为24、48和72h),mill-135amimics转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平(分别为0.94±0.04、0.78±0.03、0.70±0.03)逐渐降低(P〈0.05);miR-135ainhibitor转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平(分别为1.14±0.05、1.16±0.03、2.60±0.08)逐渐升高(P〈0.05);且两者转染48及72h后,分别与阴性对照(为1.00)比较,差异均有统计学意义(P〈0.01)。蛋白印迹法检测显示,转染不同时间后SKOV3细胞中HOXAIO蛋白的表达水平与HOXAIOmRNA的变化一致。(3)报告基因实验显示,含miR一135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞后,与对照比较,其荧光素酶活性下降了67.8%(P〈0.01)。(4)M
汤伟伟
万贵平
万一聪
张林
程文俊
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微RNAS
卵巢肿瘤
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