国家自然科学基金(81372265)
- 作品数：32 被引量：47H指数：4
- 相关作者：王艳林曹春雨杨建林李倩秦宇更多>>
- 相关机构：三峡大学宜昌市疾病预防控制中心武汉工程大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MiRNA与肿瘤相关巨噬细胞被引量：1
- 2015年
- 肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是由血液循环中的单核细胞募集进入肿瘤微环境后分化而成的巨噬细胞,它与肿瘤的形成、发展、侵袭和转移密切相关。miRNA是一种内源性非编码小分子RNA,参与多种肿瘤的发生、发展进程。研究表明,特定miRNA在控制TAM的极化方向和功能表型中发挥重要作用,有可能成为抗肿瘤靶向治疗的潜在分子靶点。本文综述了本领域的研究新进展。
- 魏木兰王艳林
- 关键词：肿瘤相关巨噬细胞MIRNA
- 小鼠黑色素瘤相关抗原MART1的原核表达及抗体制备
- 2015年
- 目的:利用基因重组技术获得鼠黑色素瘤相关抗原MART1,并制备兔抗鼠多克隆抗体。方法:采用RT-PCR方法从小鼠黑素瘤B16-F1细胞株总RNA中扩增MART1的编码c DNA序列,并构建p ET32a-MART1原核表达质粒,将此质粒转化大肠杆菌Rosseta(DE3)菌株后用IPTG诱导表达,获得的MART1融合蛋白依次用Ni-NTA亲和层析和制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化,纯化的MART1融合蛋白用SDS-PAGE和Western印迹鉴定;以纯化的MART1融合蛋白为抗原,皮内接种日本大耳白兔,制备多克隆抗体,采用ELISA、Western印迹和细胞免疫荧光法分别检测兔血清中抗体的效价及抗原的特异性。结果:构建出MART1原核表达质粒,小鼠MART1基因在大肠杆菌Rosseta(DE3)中可诱导性表达并有效纯化;用纯化的MART1蛋白在日本大耳白兔中制备出高效价的多克隆抗体(效价>1∶1 024 000),该抗体可与原核及真核表达的MART1蛋白特异性结合。结论:建立了鼠MART1蛋白原核表达和纯化技术,制备出的高效价和特异性抗MART1多克隆抗体将为黑色素瘤的防治研究提供技术支撑。
- 李倩孙鹏杨建林曹春雨王艳林
- 关键词：原核表达抗体小鼠
- OAZI-1蛋白复合物在小鼠体内诱导特异性抗肿瘤效应的研究
- 2017年
- 目的:在实验动物的水平上分析来源于肿瘤细胞的鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)蛋白复合物能否在小鼠体内诱导特异性抗肿瘤效应。方法:用包被有OAZI-1抗体的免疫磁珠从B16-F1小鼠黑色素瘤细胞中分离OAZI-1蛋白复合物,用此复合物免疫小鼠后,再在小鼠皮下接种B16-F1活细胞,然后观察接种瘤在小鼠体内的成瘤及生长状况。ELISA法用于检测免疫小鼠血清中IFN-γ含量。乳酸脱氢酶释放实验(LDH)检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞对B16-F1细胞的杀伤效应。上述动物实验用原核表达纯化的OAZI-1蛋白和PBS免疫的小鼠作为对照。结果:与对照小鼠相比,接种OAZI-1蛋白复合物的小鼠脾淋巴细胞(效应细胞)对B16-F1黑素瘤细胞(靶细胞)具有更强的杀伤能力。在三种不同的效∶靶比下(10∶1、50∶1、100∶1),该组小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤活性分别为46.2%、59.5%和92.5%,显著性高于接种纯化OAZI-1蛋白组(36.1%、26.8%和45.9%)和接种PBS组(24.6%、24.0%和27.2%)小鼠脾淋巴细胞。此外,接种OAZI-1蛋白复合物的小鼠血清中抗肿瘤细胞因子IFN-γ含量(538.3 pg/ml)也显著性高于接种纯化OAZI-1蛋白组(256.2 pg/ml)和接种PBS组(131.0 pg/ml)小鼠。上述方法免疫的小鼠在皮下再接种B16-F1活细胞后,免疫OAZI-1蛋白复合物组小鼠成瘤率为40%,而PBS组和纯化OAZI-1蛋白组小鼠成瘤率为100%,且接种瘤在OAZI-1蛋白复合物免疫小鼠体内生长更为缓慢。结论:从B16-F1肿瘤细胞中分离的OAZI-1蛋白复合物中可能含有肿瘤抗原,用此复合物接种小鼠能在实验动物体内诱导抗肿瘤免疫杀伤活性。
- 吕亚丰杨建林曹春雨秦宇王发玲王艳林
- 关键词：黑素瘤免疫治疗小鼠
- 循环肿瘤细胞在肿瘤治疗中的研究进展
- 2017年
- 循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)由原发肿瘤和转移肿瘤灶中的癌细胞播散而来,对CTCs的定量和定性检测可用于肿瘤的早期诊断、转移复发监测、药效分析和生存期预后等方面,在肿瘤预防与治疗中具有重要应用价值。CTCs在肿瘤临床中的应用是当今非常活跃的研究领域,探索新的特异性CTCs分子标志,并研发更加灵敏、高效和特异的CTCs分析新技术,也成为目前研究的热点。本文简要综述了CTCs用于肿瘤防治的研究进展。
- 曾子悦李雅琴郑林钰王艳林
- 关键词：循环肿瘤细胞肿瘤
- 幽门螺杆菌相关胃癌与多胺代谢被引量：3
- 2018年
- 幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)选择性地在人的胃黏膜中定植,是引发胃癌的最强危险因素之一。多胺是一类广泛存在于真核细胞中带高密度正电荷的烷基类小分子化合物,参与细胞增殖、分化、凋亡等重要的生理过程,多种疾病的发生发展与多胺代谢紊乱相关。近期研究发现,H.pylori感染能诱导宿主胃黏膜上皮细胞和巨噬细胞中多胺代谢异常。特别是该菌对多胺代谢途径中的关键酶ARG2(arginase 2,精氨酸酶2)、ODC(ornithine decarboxylase,鸟氨酸脱羧酶)和SMO(soermine oxidase,精胺氧化酶)的激活作用,与H. pylori免疫逃逸,慢性炎症维持、DNA损伤和胃癌的发生发展密切相关,提示多胺代谢途径可能成为H. pylori相关胃癌防治的新靶点。
- 李论陈鹏飞朱俊垚王艳林
- 关键词：幽门螺杆菌精氨酸酶鸟氨酸脱羧酶胃癌
- EZH2与肿瘤的研究进展被引量：5
- 2016年
- EZH2作为甲基化转移酶,通过催化组蛋白H3K27三甲基化,介导基因表达沉默。EZH2作为PRC2复合物的核心成分,广泛参与细胞分化、维持干细胞多能性、在肿瘤发生过程中发挥重要作用。EZH2在多种肿瘤细胞中高表达,其表达水平与肿瘤病人的预后具有相关性。作为潜在的抗肿瘤治疗靶点,EZH2的表达调控及其EZH2抑制剂的研发已经得到深入研究。本文综述了近年来有关EZH2与肿瘤防治研究的新进展。
- 曹春雨杨凡王艳林
- 关键词：EZH2肿瘤
- 精胺氧化酶与炎症相关肿瘤被引量：2
- 2015年
- 多胺是一类带正电荷的烷基类小分子化合物,广泛参与胚胎发育、细胞增殖和分化以及细胞凋亡等重要的生理过程。精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)是一种参与多胺降解代谢的多胺氧化酶,在维持细胞内多胺的稳态水平中发挥重要作用。新近研究发现,在多种慢性炎症环境中,精胺氧化酶表达持续上调,由此导致细胞内活性氧含量升高和DNA损伤,且这一过程与多种肿瘤的发生密切相关。本文简要综述精胺氧化酶的基因结构、生化特征及其与炎症相关肿瘤发生关系的研究进展。
- 吕亚丰王艳林
- 关键词：炎症肿瘤
- 多胺类似物四丁基丙二胺对人早幼粒白血病细胞HL-60生长的影响
- 2014年
- 目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(TBP)对人早幼粒白血病细胞HL-60生长的影响及其作用机制。方法:MTT比色法分析TBP对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测TBP对HL-60细胞周期的影响,DNA片段化和线粒体膜电位分析用于检测细胞凋亡,化学发光法检测TBP对多胺降解代谢酶精胺氧化酶(SMO)和乙酰多胺氧化酶(APAO)活性的影响。结果:TBP通过抑制细胞周期和诱导细胞凋亡显著抑制HL-60细胞增殖;随TBP药物浓度增高,HL-60细胞凋亡水平增加,SMO和APAO的活性亦显著增高。结论:新多胺类似物TBP能够通过诱导多胺降解代谢途径关键酶活性和诱导细胞凋亡而抑制HL-60细胞增殖,具有抗白血病治疗的潜在应用前景。
- 王清王凯王艳林杨建林曹春雨
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病多胺类似物细胞凋亡
- 多胺调节因子-1原核表达与多克隆抗体制备
- 2016年
- [目的]原核表达和纯化人多胺调节因子-1(PMF-1)并以此为抗原制备多克隆抗体。[方法]PCR扩增人PMF-1编码序列并构建原核表达质粒。将此质粒转化大肠杆菌后,IPTG诱导PMF-1蛋白表达并在变性条件下用NiNTA树脂纯化。将纯化的PMF-1用作抗原免疫大耳白兔以制备抗PMF-1多克隆抗体。ELISA法检测抗体效价,免疫印迹法和细胞免疫化学法分析抗体特异性。[结果]成功构建PMF-1原核表达质粒,在大肠杆菌中IPTG可诱导该质粒高效表达PMF-1蛋白。以纯化的PMF-1蛋白为抗原免疫大耳白兔后,获得高效价的抗PMF-1抗血清(抗体效价为1∶128 000)。该抗体能与PMF-1蛋白特异性结合,并可用于PMF-1的免疫印迹和细胞免疫化学分析。[结论]成功建立了人PMF-1原核表达和纯化技术,并制备出高特异性的抗PMF-1多克隆抗体,该抗体可用于PMF-1的免疫印迹分析和细胞免疫化学分析。
- 杨仕坤曾子悦朱亚利李论吕亚丰王艳林
- 关键词：原核表达抗体
- DZNep诱导HL-60细胞凋亡和生长抑制
- 2018年
- [目的]研究S-腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂DZNep(3-Deazaneplanocin A)对人早幼粒白血病细胞HL-60增殖的影响。[方法]细胞计数法分析DZNep(10~500 nmol/L)处理对HL-60细胞增殖的影响;以DNA片段化、Annexin-V/PI法和线粒体膜电位法检测DZNep处理对HL-60细胞凋亡的影响。Western Blot检测细胞凋亡相关基因Bax和细胞色素C的表达。[结果]50 nmol/L DZNep对HL-60细胞的24、48、72h增殖抑制率达18%、44.5%、81.7%。Annexin-V/PI法显示DZNep能诱导HL-60细胞发生剂量依赖性的细胞凋亡。进一步研究发现,DZNep(50nmol/L)处理24 h诱导23.8%的HL-60细胞发生线粒体途径介导的细胞凋亡,表现为细胞DNA片段化、线粒体膜电位下降和Bax基因表达上调,同时伴有细胞浆内细胞色素C增加。[结论]DZNep能在较低浓度下抑制HL-60细胞增殖并通过激发线粒体凋亡途径诱导HL-60细胞凋亡,具有抗人早幼粒细胞白血病治疗的潜在应用前景。
- 李倩王清杨建林夏燕王艳林曹春雨
- 关键词：早幼粒细胞白血病细胞凋亡
