天津市自然科学基金(10JCZDJC18500)
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
- 相关作者：张庆瑜康春生申发娟王涛张安玲更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院天津市神经病学研究所泰山医学院附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PIK3CA在胃癌病变中表达的研究
- 2013年
- 目的研究磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)表达与胃癌发病及不同病理级别胃肿瘤的关系,探讨其在胃癌发病中的作用机制。方法应用组织芯片技术结合免疫组化方法检测PIK3CA、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)、细胞增殖相关核抗原(ki-67)在胃腺癌、癌旁组织、正常胃黏膜中的表达情况,分析其与肿瘤发生的关系;进一步分析PIK3CA、pAkt、ki-67在不同胃癌病理级别组织中的表达情况,及其与肿瘤病理分级、分化的关系。结果 PIK3CA、pAkt、ki-67在胃癌组织中的表达显著增高(P<0.05),且在低分化胃腺癌中的表达最高(P<0.05),PIK3CA、pAkt和ki-67在不同病理级别胃癌及癌旁组织和正常胃黏膜组织中的表达两两之间呈正相关(P<0.05)。结论 PIK3CA可能作为磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的始动因子,促使Akt磷酸化,进而激活PI3K/Akt信号传导途径,促进胃癌增殖、侵袭与转移。
- 马菲菲张庆瑜王涛康春生徐蓉蔡凤英宋小妹
- 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶KI-67抗原组织芯片
- 甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响被引量：5
- 2015年
- 目的体外研究基因mi R-200b发生甲基化的不同程度及其表达量的差异对胃癌细胞MGC-803增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化的影响。方法以正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803为研究对象,提取细胞总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR检测2种细胞系中mi R-200b的表达量;亚硫酸氢钠修饰PCR(BSP)法检测mi R-200b启动子区甲基化水平。用不同浓度5-氮杂胞苷(5′-Aza-Cd R)药物处理MGC-803细胞72 h后,同法检测mi R-200b的表达量及启动子区甲基化水平变化。根据上述实验结果选择合适的药物作用浓度和时间即(10μmol/L,72 h)作为处理组。通过Transwell侵袭实验观测细胞侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡的分布情况;Western-blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin、ZEB1、Slug、基质金属蛋白酶(MMP)9等的表达水平。结果 mi R-200b在GES-1中表达量较MGC-803高(P=0.022)。启动子区甲基化水平则与之相反(P=0.034)。药物不同浓度作用后的MGC-803细胞系mi R-200b表达量有随浓度升高而升高的趋势,作用浓度为10μmol/L时mi R-200b启动子区甲基化水平较对照组低(P=0.043)。与对照组相比,处理组细胞晚期凋亡数增多;G0/G1期细胞数显著增多,S期显著减少;穿过Transwell小室细胞数显著减少;Western-blot实验表明E-cad-herin表达量升高,N-cadherin、ZEB1、Slug、MMP9表达量降低。结论 mi R-200b启动子区甲基化程度的不同可以影响其表达量,而mi R-200b表达量的异常又与胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭能力密切相关。
- 郭蓉宁向红姜葵张庆瑜
- 关键词：腺癌DNA甲基化
- 应用亚硫酸氢盐修饰后PCR联合TA克隆测序对E-cadherin启动子区甲基化水平的检测被引量：1
- 2014年
- E-cadherin是一种细胞粘附因子,通过增强细胞之间的粘附而起到抑制肿瘤转移的作用.Ecadherin基因启动子区的高甲基化是导致其在众多肿瘤细胞中表达下调甚至缺失的主要原因之一.本实验首先抽提SGC-7901细胞(胃腺癌细胞)、A549细胞(肺腺癌细胞)、MCF-7细胞(乳腺癌细胞)等3个肿瘤细胞株的全基因组DNA,然后对抽提的DNA进行亚硫酸氢盐修饰和纯化回收,根据修饰后的DNA序列设计引物并对其进行PCR扩增.然后将PCR扩增产物与pUC-T TA载体连接并转化入感受态大肠杆菌DH5α中进行培养,对筛选出的含有阳性重组子的菌落进行测序.测序结果显示,3个肿瘤细胞株的E-cadherin基因启动子区的CpG岛都呈现了高度的甲基化,亚硫酸氢盐的修饰效率达到了99.2%.综上研究表明,亚硫酸氢盐修饰后PCR(BSP)联合TA克隆测序可以对肿瘤细胞某基因启动子区CpG岛的甲基化水平进行精确量化,研究所使用的3个肿瘤细胞株均可作为研究肿瘤细胞E-cadherin基因甲基化的细胞模型.
- 贾文亮张庆瑜李素丽周芳张安玲
- 关键词：甲基化E-CADHERIN
- 紫杉醇联合miR-200b对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响被引量：3
- 2013年
- 目的体外观察紫杉醇联合应用miR-200b模拟物(miR-200b mimics)对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法分别单独应用miR-200b转染细胞(200b组)及50nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞(紫杉醇组),并联合应用上述两者(联合组),同时设转染无义序列组和对照组。通过流式细胞技术检测细胞的凋亡水平和周期分布情况,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观测细胞的侵袭迁移能力,Western-blot检测E2F3蛋白的表达水平。结果与单药组相比,联合组早期凋亡率显著升高;克隆形成率显著降低,穿过Transwell小室的细胞数目显著减少;划痕48h后的细胞迁移能力明显降低;E2F3蛋白在200b组及联合组中表达水平降低(均P<0.001)。联合组阻滞于G2/M期细胞的比例高于200b组、无义序列组及对照组,但和紫杉醇组比较差异无统计学意义。结论 miR-200b可能通过降低E2F3表达增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用。
- 杜平丛宁宁申发娟康春生张庆瑜
- 关键词：胃肿瘤腺癌细胞增殖紫杉醇
- 上调miR-200a、miR-141表达对胃腺癌细胞生长的体外研究被引量：7
- 2013年
- 目的探究上调microRNA(miR)-200a和miR-141表达对胃腺癌细胞系SGC-7901细胞侵袭迁移的影响。方法脂质体介导miR-200a(miR-200a组)、miR-141(miR-141组)、miR-200a+miR-141(miR-200a+miR-141组)拟似物转染SGC-7901细胞,同时设未转染组(对照组)、无义序列转染组。应用qRT-PCR检测转染后各组miR的表达,Transwell小室法和划痕实验检测转染后细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测转染后E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,并进行比较分析。结果与对照组和无义序列转染组相比,miR-200a、miR-141和miR-200a+miR-141组miR表达较高,细胞穿膜细胞数较少(均P<0.05),划痕法显示SGC-7901细胞阻滞效果更明显,E-cadherin表达增加,N-cadherin、MMP-9表达减少,且以上变化在miR-200a+miR-141组更显著。结论上调miR-200a、miR-141表达可有效抑制SGC-7901细胞的侵袭迁移。
- 申发娟苏娟张庆瑜康春生周磊王涛
- 关键词：微RNAS腺癌肿瘤侵润钙黏着糖蛋白类基质金属蛋白酶9
- ZEB2基因3′UTR区转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1增殖、侵袭、迁移的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨E盒结合锌指蛋白(ZEB)2基因3′非翻译区(3′UTR)转染人胃黏膜上皮细胞GES-1后对其增殖、侵袭、迁移的影响。方法将人工合成的ZEB2 3′UTR质粒及miR-200b micmics采用脂质体Lipofectamine2000转染GES-1细胞。分别设对照组、突变组和ZEB2 3′UTR组,qRT-PCR检测转染后miR-200a/b/c及ZEB1/ZEB2mRNA的表达。再设对照组、ZEB2 3′UTR组、ZEB2 3′UTR+无义序列组和ZEB2 3′UTR+miR-200b micmics组。West-ern blot检测转染后ZEB1/ZEB2、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力;MTT法检测细胞增殖活性。结果与对照组及突变组相比,转染ZEB2 3′UTR组miR-200a/b/c的表达均下调,以miR-200b最为明显,ZEB1/ZEB2 mRNA及蛋白水平表达上调,其细胞迁移、侵袭、增殖活性均增强(P<0.05)。ZEB2 3′UTR+miR-200b micmics组较ZEB2 3′UTR组迁移、侵袭、增殖活性降低。结论ZEB2 3′UTR可能通过调控miR-200a/b/c的表达进而影响其对靶基因的转录后调控,增加细胞的侵袭、迁移能力,导致GES-1细胞的恶性转化倾向。
- 李素丽周芳张庆瑜贾文亮张安玲韩磊康春生
- 关键词：转染胃黏膜上皮细胞
