教育部重点实验室基金(KLIB-KF200502)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：江南大学福州大学郑州大学更多>>
- 发文基金：教育部重点实验室基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：理学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 氮离子束诱变提高黄嘌呤氧化酶产生菌产酶能力被引量：1
- 2007年
- 通过氮离子束诱变节杆菌(Arthrobacter sp.g-1984)筛选到黄嘌呤氧化酶高产菌株X7,产酶活力为24.49 U/g,是出发株产酶活力(8.81 U/g)的2.78倍,经发酵条件优化后,产酶活力达到36.67 U/g,是出发菌株产酶活力的4.16倍,产酶高峰缩短了21 h。对细菌黄嘌呤氧化酶酶学性质进行了初步研究,其最适反应条件为:37℃、pH 6.5、Fe^(2+)对酶活力有较强的抑制作用,EDTA对酶活力有明显的激活作用。
- 夏小花李忠琴秦广雍王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶节杆菌酶学性质
- 高效液相色谱法测定手性生物转化中肾上腺素与肾上腺酮被引量：2
- 2007年
- 应用离子对反相离子对高效液相色谱法测定了手性生物转化中肾上腺素和肾上腺酮的含量,将活化的菌株接种至液体培养基中,培养24 h后加入肾上腺酮(910 mg.L-1),在pH 5.5振荡培养并定时取样,取发酵液离心10 min(转速10 000 r.min-1),取上层清液经0.2μm滤膜过滤后供HPLC测定。用色谱柱(ODS C18)作固定相,流动相由甲醇及25 mmol.L-1乙酸-乙酸钠缓冲液按15比85体积比混合后组成。此缓冲液中含4 mmol.L-1庚烷磺酸钠,流速为1 mL.min-1,测定时采用紫外检测,波长为233 nm。肾上腺素及肾上腺酮分别在质量浓度为28～1 800 mg.L-1及36～1 350 mg.L-1范围内与相应的峰面积之间呈线性关系,信噪比S/N为3时,两者的检出限分别为1.4,2.8 mg.L-1,回收率试验所得结果在99.3%～100.3%之间。
- 李忠琴郭黛苹杨凯王武许小平
- 关键词：高效液相色谱法肾上腺素
- 黄嘌呤氧化酶产生菌的产酶条件优化被引量：1
- 2007年
- 通过恒化富集培养分离得到一株黄嘌呤氧化酶(XOD)产量较高的节杆菌Arthrobacter sp.。采用响应面分析法优化培养基组成,XOD比活力较初始水平提高了1.9倍。利用正交试验研究摇瓶发酵条件,结果发现,当培养温度为32℃、培养基初始pH为8.0、转速为230r/min时,产酶水平又提高50%,XOD比活力达0.083u·(mg蛋白)-1。在此基础上,绘制菌株产酶曲线,确定最佳产酶时间为45h。
- 李忠琴许小平夏小花王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶节杆菌
- 节杆菌黄嘌呤氧化酶提取优化的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的从节杆菌Arthrobacter sp．XL2胞内中初步提取黄嘌呤氧化酶（XOD）。方法探讨了不同破壁方法和硫酸铵盐析提取粗酶的条件。采用响应面分析法优化了超声波法抽提XOD的条件。结果菌体用超声波破壁，在频率25KHz，细胞浓度80mg／mL下每次辐射2s，间隔2s，总辐射时间18min，输出功率400W，破碎产酶量达到（4．69±0．11）U／mL。用40％～60％饱和度硫酸铵阶段盐析提取粗酶效果最好。将盐析粗酶用Sephadex G-25脱盐后，比酶活达到6．95U／mg，纯度提高了3．43倍，然后进行XOD粗酶部分酶学性质研究。XOD的稳定pH和温度范围分别为：pH7．0～9．0和低于50℃。XOD的最适反应温度和pH分别为：40℃及pH8．0。Zn^2＋，Cd^2＋，Cu^＋，Pb^2＋，Hg^2＋强烈抑制酶的活性。结论此粗酶提取工艺可以有效地将XOD从细胞内释放出来，提高了粗酶抽提得率。为后续的进一步纯化研究奠定了基础。
- 李忠琴许小平邬敏辰王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶超声波稳定性
- 反相高效液相色谱法测定Arthrobacter sp.黄嘌呤氧化酶活性被引量：4
- 2007年
- 报道了采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定节杆菌(Arthrobacter sp.)黄嘌呤氧化酶活性的有效方法。将酶初提液与含有黄嘌呤的反应体系在37℃下反应20 min,反应终止后通过HPLC测定产物尿酸生成量的变化来分析酶的活性。通过流动相组成、pH和柱温等分离条件的优化,确定了最佳的色谱检测条件以NH4H2PO4(50 mmol/L,pH 7.5)溶液为流动相,流速1 mL/min,柱温25℃,检测波长290 nm。为深入研究微生物细胞内黄嘌呤氧化酶提供了高效检测手段。
- 李忠琴许小平王武
- 关键词：反相高效液相色谱法黄嘌呤氧化酶
