国家自然科学基金(30170008)
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
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- 相关领域：生物学理学更多>>
- 糖苷合成酶——一类新型的寡糖高效合成工具被引量：11
- 2006年
- 寡糖是哺乳动物细胞表面糖蛋白和糖脂以及微生物来源的生理活性物质的要素之一,其应用于医药的巨大潜能至今还没有得到充分体现,主要原因是合成足够于临床使用的寡糖非常困难.传统的化学法和酶法在大规模合成寡糖方面都有一定局限性.近年来,分子生物学技术大大推动了糖苷酶合成寡糖的研究,将糖苷酶催化中心亲核体氨基酸定点突变为非亲核体氨基酸,导致酶的原有水解活性丧失,只催化糖苷键合成反应,寡糖产量最高可达99%,人工产生了一类新酶——糖苷合成酶(glycosynthases),随后又产生了硫代糖苷酶(thioglycoligases)和硫代糖苷合成酶(thioglycosynthases).糖苷合成酶的高通量筛选可用双质粒系统和酵母三杂交系统进行,其活性的进一步改进可通过亲核体氨基酸位点不同氨基酸取代、其他位点氨基酸突变、反应条件优化等方法进行,其区域选择性的改变或增强可通过改变糖基受体分子达到.糖苷合成酶作为一种新型高效的生物催化剂,对寡糖的工业化合成有着重要意义,它的出现对糖生物学的发展必将起到巨大的推动作用.
- 卢丽丽肖敏赵晗王鹏钱新民
- 关键词：糖苷酶高通量筛选
- 具有转糖基活性的糖苷酶的分子进化被引量：3
- 2007年
- 糖苷酶是糖类合成的重要催化剂,但其催化的反应为可逆反应,产物产量不高。近年来,通过糖苷酶催化位点氨基酸突变、其他位点氨基酸突变、随机突变、C端缺失突变和DNA混编(DNA shuffling)等方法对糖苷酶进行分子进化,使得糖苷酶合成糖类的产量大幅度提高,同时也优化了糖苷酶催化糖类合成时的其他性质,如区域选择性和温度耐受性等。
- 卢丽丽肖敏赵晗
- 关键词：糖苷酶分子进化
- 短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶基因aga1在大肠杆菌中的高效表达被引量：7
- 2005年
- 短双歧杆菌 (Bifidobacteriumbreve 2 0 3)α_D_半乳糖苷酶基因 (aga1)被克隆到大肠杆菌温度诱导表达质粒pBV2 2 0中 ,构建重组质粒pBVaga1,转入大肠杆菌进行温度诱导表达 ,得到的重组酶Aga1在大肠杆菌DH5α、DH10B和BL2 1中的比活分别为 2 8 0 8、19 4 4和 13 85U mg ,均高于短双歧杆菌α_D_半乳糖苷酶的比活 1 76U mg。重组质粒pBVaga1在E .coliBL2 1中稳定性较好。重组酶Aga1蛋白亚基分子量约 6 7kD ,最适反应温度为 4 5℃ ,酶在 4 0℃以下稳定 ,6 0℃仅剩余约 5 %的酶活性 ,70℃时酶全部失活 ;最适反应pH为 4 0～ 4 4 ,酶在pH 3 6～ 6 0范围内稳定 ;酶对p_硝基苯酚_α_半乳糖苷的Km =1 4 3mmol L ,Vmax=35 71μmol (L·min) ,对蜜二糖的Km =2 6 1mmol L ,Vmax=6 3 6 9μmol (L·min) ;酶在蜜二糖、棉子糖水解体系中不显示转糖基活性。结果说明Aga1与已经报道的一种短双歧杆菌的α_D_半乳糖苷酶不同 ,是新发现的一种短双歧杆菌的α_D_半乳糖苷酶。
- 陆宇赵晗王勤鹏刘巍峰肖敏陈忠民钱新民
- 关键词：双歧杆菌Α-D-半乳糖苷酶
- 氟代糖在糖苷酶研究中的应用被引量：3
- 2006年
- 近年来，氟代糖应用于糖苷酶反应研究，显示出越来越重要的作用。氟代糖可以作为糖苷酶及其突变酶的水解底物研究酶学性质；氟代糖抑制剂可以标记糖苷酶催化中心，鉴定亲核体氨基酸。尤为重要的是，氟代糖可作为糖苷酶的糖基供体来合成糖类。糖苷酶突变后，可生成糖苷合成酶和硫代糖苷合成酶，可以用与正常底物构型相反的氟代糖作为糖基供体高效合成糖类，收率一般为60％-90％，有的可达100％。糖苷酶及其突变酶以氟代糖为底物高效合成糖类的研究，必将促进生物学、糖生物学和纳米生物材料的发展。
- 卢丽丽肖敏赵晗王鹏钱新民
- 1-氟代糖在化学-酶法合成糖类中的应用被引量：4
- 2006年
- 化学-酶法合成糖类具有立体选择性和区域选择性,逐渐成为糖类合成的主流.1-氟代糖作为糖基供体应用于化学-酶法合成反应,显示出越来越重要的作用,综述了1-氟代糖在糖基转移酶和糖苷酶催化的糖类合成中的应用.
- 卢丽丽肖敏赵晗王鹏钱新民
- 关键词：糖类糖基转移酶糖苷酶
