国家自然科学基金(30872079)
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
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- DNA聚合酶β对细胞生物学特性及DNA损伤的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨DNA聚合酶β(polβ)的表达水平对细胞的生物学特性及重铬酸钾诱导的DNA损伤效应的影响。方法以polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-)及polβ高表达型(polβoe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色法绘制3种细胞的生长曲线;群体倍增实验观察3种细胞的倍增时间;HGPRT基因突变实验检测细胞的自发突变频率;同时用单细胞凝胶电泳实验分析3种细胞的自发DNA损伤和重铬酸钾诱导的DNA损伤效应的差异。结果 3种细胞生长曲线和群体倍增时间基本一致,细胞自发突变频率和自发DNA损伤差异也无统计学意义(P>0.05);随着重铬酸钾浓度的增加,3种细胞的拖尾率和尾长均增加,在相同重铬酸钾染毒浓度下polβ缺陷型细胞的DNA损伤明显大于polβ野生型和高表达型细胞,且以polβ高表达型细胞的DNA损伤效应最弱。结论 polβ表达水平对细胞的生长特征无明显影响,也不会造成细胞自发突变的增加;polβ基因缺陷使细胞对重铬酸钾诱导的DNA损伤更敏感,而高表达则对DNA损伤具有一定保护作用。
- 罗擎英吴媚刘蜀坤张遵真
- 关键词：DNA聚合酶Β碱基切除修复DNA损伤与修复
- DNA聚合酶β对苯并[a]芘致DNA损伤修复的影响被引量：1
- 2010年
- 目的揭示聚合酶β(polβ)的表达水平与苯并[a]芘(BaP)诱导的DNA损伤效应的关系。方法采用3种具有相同遗传背景的小鼠胚胎成纤维细胞polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-)和野生型polβ高表达型(polβoe)作为模型细胞。首先用RT-PCR和Western blot鉴定3种细胞中polβ在mRNA和蛋白质水平的表达情况,然后通过MTT试验和单细胞凝胶电泳(彗星试验)观察BaP作用下3种细胞的存活率及DNA损伤和修复效应。结果3种细胞在polβmRNA和蛋白表达水平上存在明显差异,polβ-/-细胞中polβ基因缺失,而polβoe细胞中polβ基因则较野生型polβ+/+细胞高出2倍以上;BaP能诱导3种细胞DNA的损伤以及细胞存活率的降低;与polβ+/+细胞相比,polβ-/-细胞的IC50更低,DNA损伤更严重且更加不易修复;反之,polβoe细胞的IC50更高,DNA损伤效应更弱,DNA修复速率加快。结论polβ在修复外源性致癌物BaP导致的DNA损伤中发挥着重要的作用,polβ基因缺陷使细胞DNA修复能力降低,而polβ基因的高表达则能帮助细胞应对DNA损伤,在一定程度上对细胞的存活起到了保护作用。
- 吴媚赖彦好张遵真
- 关键词：DNA聚合酶Β苯并[A]芘DNA损伤
- DNA聚合酶β对氢醌诱导的小鼠成纤维细胞遗传毒性的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨DNA聚合酶β(polβ)的表达水平在氢醌(HQ)遗传毒性中的作用。方法以polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-)及polβ高表达型(polβoe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色法检测HQ对3种细胞的毒性效应;2’,7’-二氯双氢荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)法检测不同浓度HQ染毒后细胞内活性氧(ROS)的含量;彗星试验分析HQ诱导的3种细胞的DNA损伤及修复效应的差异;体外微核试验检测3种细胞微核率。结果随着HQ浓度的增加,3种细胞的存活率均下降,IC50以polβoe细胞最高,polβ+/+细胞次之,polβ-/-细胞最低,差异有统计学意义(P<0.05);3种细胞内ROS水平随HQ浓度的增加而上升,相同HQ浓度下polβ-/-细胞内ROS水平显著高于polβ+/+细胞(P<0.05);彗星试验显示HQ作用后3种细胞均有不同程度DNA损伤,在相同HQ染毒剂量下polβ-/-细胞损伤较polβ+/+细胞和polβoe细胞严重,而polβoe细胞损伤最为轻微;损伤修复效应显示polβoe细胞修复最快,polβ-/-细胞更不易修复;HQ可诱导3种细胞微核率增加,在相同HQ作用剂量下polβ-/-细胞的微核率最高,polβ+/+细胞次之,polβoe细胞最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HQ可诱导细胞内ROS的产生,从而导致DNA和染色体水平的氧化损伤,表现出其遗传毒效应,polβ可以提高细胞应对氧化损伤的能力,从而对HQ的遗传毒性效应起到一定的保护作用。
- 陈晨赖彦好吴媚张遵真
- 关键词：氢醌DNA聚合酶Β遗传毒性成纤维细胞
- 虾青素对^(60)Coγ射线所致小鼠氧化损伤的保护作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨虾青素对60Coγ射线诱导的小鼠氧化损伤的保护作用。方法 50只昆明种小鼠随机分为5组,即对照组、模型组和虾青素高、中、低剂量组(10.2、2.0和4.0mg/kg)。辐照前,各剂量组每日经口灌胃不同浓度的虾青素,模型组和对照组则给予等体积植物油,连续30天。30天后,除对照组外,其余各组给予8 Gy 60Coγ射线全身一次性照射。照射后第4天处死小鼠,取肝细胞进行彗星实验以观察细胞DNA损伤,制取肝匀浆测定MDA含量、SOD和GSH-Px活性,同时进行外周血粒细胞和骨髓有核细胞计数。结果与对照组相比,模型组MDA含量显著升高(P<0.01),SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,虾青素各组MDA含量显著降低(P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),高剂量组GSH-Px活性显著升高(P<0.01)。模型组DNA损伤指标均显著高于对照组(P<0.01),而虾青素各组DNA损伤显著低于模型组(P<0.01),且随着虾青素剂量的增加,细胞拖尾率和OTM逐渐减少。与对照组相比,模型组粒细胞和骨髓有核细胞计数显著降低(P<0.01),而虾青素各组粒细胞和中、高剂量组骨髓有核细胞显著高于模型组(P<0.01)。结论虾青素对于辐射诱导的氧化损伤具有保护作用。
- 赵巍蒋学君陈晨崔杰杨沫张遵真
- 关键词：虾青素彗星实验抗氧化
- DNA聚合酶β表达水平对苯代谢物氢醌致细胞凋亡及线粒体膜电位的影响
- 2011年
- 目的探讨DNA聚合酶β（DNA polymemsebeta，polβ）对氢醌（HQ）所致细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法以polβ野生型（polβ＋/＋）、polβ缺陷型（polβ-／-）及polβ高表达型（polpoe）小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象，以不同浓度的HQ溶液染毒后，采用流式细胞术分别检测HQ对细胞凋亡和线粒体膜电位（△ψm）的影响，试剂盒法测定细胞内活性氧（ROS）和羟自由基（·OH）含量；化学发光法分析细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活力。结果与对照组相比，各染毒组凋亡细胞率和△ψm降低的细胞比例明显增加，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与polβ＋/＋细胞比较，20．00、40．00、80．00μmol／L染毒组polβ-／-细胞凋亡率明显增高，10．00、20．00、40．00、80．00μmol/L染毒组polβ oe细胞凋亡率明显降低，差异均有统计学意义（P（0．05）。与polβ＋／＋细胞（20．60％±0．57％、37．95％±0．64％、44．50％±1．27％、57．55％±1．06％）比较，10．00、20．00、40．00、80．00μmol／L染毒组polβ-／-细胞△ψm降低的细胞比例（33．60％±1．55％、46．05％±1．77％、52．75％±2．05％、75．20％±0．56％）明显增高，polβ oe细胞△ψm降低的细胞比例（16．05％±1．20％、29．80％±1．21％、35．15％±1．06％、53．80％±0．85％）明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与polβ＋/＋细胞比较，各染毒组polβ-/-细胞产生的荧光强度明显增高，polβ oe细胞的荧光强度明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与pol β ＋/＋细胞相比，20．00、40．00μmol／L染毒组pol β-／-细胞内·0H含量明显增高，polβ oe细胞内·0H含量明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。在相同浓度HQ染毒剂量下，polβ-／-细胞内SOD和GSH-Px消耗最快，polβ oe细胞内的SOD和GSH-Px消耗�
- 陈晨杨沫张遵真吴媚邓雯文
- 关键词：DNA聚合酶Β膜电位过氧化物酶类
- DNA聚合酶β对苯并[a]芘致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究DNA聚合酶β（polβ）表达水平对苯并【a]芘（BaP）致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响，为BaP的致癌分子机制提供实验依据。方法采用3种具有相同遗传背景的小鼠胚胎成纤维细胞[polβ野生型（polβ＋／＋）、polβ缺陷型（polβ-／-）和polβ高表达型（voe）】作为模型，检测BaP对细胞的氧化损伤作用，细胞遗传毒性和基因组遗传不稳定性。结果随着BaP浓度的增加，3种细胞的存活率和克隆形成能力均下降。5．00和20．00μmol／LBaP染毒时，polβ-／-细胞产生的ROS荧光强度均大于polβ＋／＋和polβoe细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在5．00和20．00μmol／L时，polβ-／-细胞SOD活力为（76．56±2．84）和（62．78±4．28）U／mgpro，低于对照组[（84．85±3．59）U／mgpro]和polβ＋／＋细胞【（85．21±3．20）和（76．90±3．38）U／mgpro]，20．00μmol／LBaP染毒组polβoe细胞SOD活力【（82．59±4．64）U／mgpro]低于对照组[（88．58±6．77）U／mgpro]但高于相同浓度染毒的polβ＋／＋细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。1．25、5．00和20．00μmol／LBaP染毒组的polβ-／-细胞的微核形成率明显高于polβ＋/＋细胞，5．00和20．00μmol／LBaP染毒组的polβoe细胞的微核形成率明显低于polβ＋，＋细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。5．00和20．00μmol／LBaP染毒组polβ-／-细胞的HPRT基因突变频率为26．16×10^-6和37．51×10^-6，polβoe细胞为27．68×10^-6和38．63×10^-6，均明显高于polβ＋／＋细胞（19．76×10^-6和24．78×10^6），差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论polβ在保护细胞免受BaP造成的细胞毒性和遗传毒性方面具有积极的作用，其正常表达对于维持细胞基因组遗传稳定性具有重要的意义。
- 杨沫吴媚崔杰陈晨张遵真
- 关键词：DNA聚合酶Β微核试验
- hOGG1核酶介导的肺癌细胞对^60Co γ射线放射敏感性的研究被引量：1
- 2010年
- 目的观察^60Co γ射线对核酶诱导的hOGG1基因低表达的人肺腺癌A549细胞的损伤效应，探讨hOGGl低表达在增加肿瘤细胞放疗敏感性中的作用机制。方法以A549细胞、转染空质粒的A549-P细胞和转染hOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体pcDNA3．1（＋）-RZ的A549-R细胞为研究对象，测定射线照射后3种细胞活性氧含量、细胞存活率、细胞染色体损伤及DNA损伤和修复的差异。结果A549、A549-P和A549-R3种细胞的存活率随^60Co γ射线照射剂量的增加而下降，存在较好的剂量一反应关系（r=-0．984、-0．978、-0．975，P〈0．05）。A549-R细胞的IC50（9．37±0．24）显著低于A549细胞（12．98±0．44），差异有统计学意义（t=-12．48，P〈0．05）。^60Co γ射线照射下细胞活性氧含量、微核形成率及DNA损伤均增加，在相同剂量下，A549-R细胞中活性氧含量和微核形成率均高于A549和A549-P细胞。此外，在相同照射剂量下，hOGG1缺陷的A549-R细胞的DNA损伤较A549和A549-P细胞严重，且损伤后更加不易修复。结论 ^60Co γ射线可以诱导A549、A549-P和A549-R3种试验细胞的活性氧增加，从而导致DNA和染色体损伤，最终使细胞存活率降低，且以hOGG1低表达的A549-R细胞更为明显，提示hOGG1基因的低表达可能增加肿瘤细胞对射线的敏感性。
- 刘芳吴媚张遵真
- 关键词：核酶
- DNA碱基切除修复基因与化疗敏感性的研究
- 2011年
- 抗癌药物作用后,肿瘤细胞的DNA损伤修复是耐药性产生的重要机制。目前,碱基切除修复(BER)已被证实与DNA损伤型化疗药物的敏感性有关。鉴于国内这方面的研究较少,且缺乏系统的文献综述,本文重点介绍BER过程的最新研究进展以及BER中的关键基因与化疗敏感性及耐药性之间的关系。
- 刘蜀坤张遵真
- 关键词：碱基切除修复耐药性药物敏感性DNA氧化损伤
- 香烟烟雾对人支气管上皮细胞的氧化损伤研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨香烟烟雾对人支气管上皮细胞氧化损伤的影响,评价氧化损伤效应在香烟烟雾致肺癌中的作用。方法体外培养人支气管上皮细胞(HBE),以DMSO作为吸收液采集香烟主流烟雾,MTT比色法测量香烟烟雾对HBE细胞的毒性,彗星实验和微核实验分别检测细胞DNA链断裂和细胞染色体损伤,同时使用荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)的含量。结果随着香烟烟雾浓度的增加,HBE细胞存活率逐渐下降;随着染毒时间的延长,香烟烟雾对HBE细胞的半数抑制浓度(IC50)逐渐降低,显示明显的剂量-效应和时间-效应关系。香烟烟雾可以诱导HBE细胞DNA链断裂,表现为细胞拖尾率增加,同时尾长、尾部DNA含量和Olive尾距均随香烟烟雾浓度增加而增大。香烟烟雾亦可诱导HBE细胞染色体损伤,当香烟烟雾浓度≥1支/L时,实验组微核率与对照组比差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,HBE细胞ROS生成量与香烟烟雾浓度呈剂量-效应关系。结论香烟烟雾可以直接诱导人支气管上皮细胞ROS增加,从而造成细胞毒性增加、染色体损伤和DNA链断裂,提示氧化损伤是香烟烟雾致肺癌的重要机制。
- 刘蜀坤王玲陈晨张遵真
- 关键词：人支气管上皮细胞活性氧DNA损伤
- DNA聚合酶β对苯并[a]芘致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响
- 目的研究DNA聚合酶β(Polβ)表达水平对苯并[a]芘(BaP)致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响。方法采用3种具有相同遗传背景的小鼠胚胎成纤维细胞polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-...
- 杨沫吴媚陈晨刘蜀坤张遵真
- 关键词：DNA聚合酶Β苯并[A]芘
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