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酒精对雄鼠精液质量及植入前胚胎全基因组DNA甲基化的影响被引量：3: 2013年; 采用HE染色法、精子活力与形态学分析技术以及免疫荧光技术分别检测酒精对小鼠肝组织、精子的活力及形态、精子和植入前各时期胚胎的DNA甲基化的影响。HE染色结果表明,与对照组(生理盐水处理45 d)相比,实验组I(20%酒精灌胃30 d,生理盐水处理15 d)及实验组II(20%酒精灌胃45 d)小鼠肝脏出现不同程度的损害;精子活力与形态学分析发现,与对照组相比,实验组I和II精子活力明显降低,但实验组I精子活力高于实验组II,且对照组的精子正常形态精子率高于实验组I和II;免疫荧光结果显示,实验组精子DNA甲基化水平低于对照组,并且实验组I高于实验组II;植入前胚胎的2-细胞、4-细胞期,对照组DNA甲基化水平明显高于实验组,且实验组I高于实验组II,8-细胞期以后,对照组与实验组I无显著性差异,而实验组II却在8-细胞和桑椹胚期低于对照组,到囊胚期,对照组与实验组均无明显差异。酒精对雄鼠精子的破坏作用可能是导致植入前胚胎表观遗传异常的直接原因,且停止酒精摄入后可在一定程度上缓解其带来的一些不利影响。; 黄继昌王彩红刘勇吴风瑞李文雍王荣; 关键词：酒精胚胎发育精液质量灌胃

獭兔体外成熟卵母细胞孤雌激活及体细胞核移植被引量：1: 2016年; [目的]建立利用獭兔体外成熟卵母细胞进行孤雌激活及体细胞核移植的技术体系,促进獭兔现代育种技术的发展。[方法]以獭兔屠宰场废弃卵巢为试验材料,利用体外成熟、孤雌激活、体细胞核移植等方法,研究了獭兔体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力。[结果]1）直径大于1 mm卵泡内的卵母细胞孤雌激活后的发育能力显著强于0.7~1.0 mm卵泡内的卵母细胞。2）卵母细胞体外培养（IVC）15~21 h后孤雌激活,卵裂率显著高于IVC 12 h组。3）2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）与5μg·m L-1亚胺环己酮（CHX）联合处理1 h,孤雌激活效果最好。4）IVC 14 h后,78%的卵母细胞极体与核偏移角度小于10°;IVC 18 h后,34.6%的极体偏离核的角度大于45°。5）体外成熟的獭兔卵母细胞可以较好支持体细胞核移植的重构胚,核质作用期间采用MG132处理,降低了重构胚的囊胚率。[结论]从大于1 mm卵泡内回收卵母细胞并IVC 18 h后,采用2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-DMAP与5μg·m L-1CHX联合处理1 h,是獭兔孤雌激活和体细胞核移植的最佳方案。; 刘勇吴晓庆王子玉宋浩洋张领乔凌燕李文雍谭景和; 关键词：孤雌激活体细胞核移植体外成熟獭兔

THE STUDY OF H3K27 ACETYLATION IN PORCINE IMMATURE OOCYTES WITH DIFFERENT CHROMATIN CONFIGURATION: Introduction Somatic cell cloning technology provides the possibility of creating genetically modified traits ...; Zhang LingWu XiaoqingXin JingKong FengXie JuanQiao LingyanLiu Yong

怀孕前后酒精摄入对雌鼠植入前胚胎DNA甲基化模式建立的影响被引量：1: 2013年; 女性怀孕前后饮酒会对胎儿的发育及神经系统造成不利影响,称为"胎儿酒精综合征"(fetal alcohol spectrum disorders,FASD)。小鼠通常作为研究该病的动物模型。该实验采用体外培养技术及体内冲胚法研究雌鼠怀孕前后酒精摄入对各期植入前胚胎全基因组DNA甲基化模式建立的影响。小鼠植入前胚胎体外培养实验发现,体外实验组I(怀孕前酒精处理组),除8-cell外,其他各期胚胎的DNA甲基化水平明显低于体外对照组;体外实验组II(正常胚胎在含乙醇的培养基中培养),各期植入前胚胎DNA甲基化水平均明显低于体外对照组。体内实验发现,体内实验组I(怀孕前酒精处理组)与体内的实验组II(怀孕后酒精处理组),各期植入前胚胎DNA甲基化水平明显低于体内对照组。体内、外实验结果表明:受精前后酒精对各期植入前胚胎DNA甲基化模式的正确建立造成紊乱,该结果可为进一步揭示FSAD发病机制提供一定的实验基础。; 黄继昌王彩红刘勇吴风瑞丁彪李文雍王荣; 关键词：酒精 DNA甲基化灌胃

未成熟卵母细胞的形态与成熟能力、染色质构型和H3K27三甲基化水平的相关性研究被引量：3: 2014年; 该文研究未成熟卵母细胞的形态指标与成熟能力、染色质构型和表观遗传模式的相关性,为家畜繁育和人医辅助生殖选卵标准提供参考。以经不同激素处理(N组、P组、H组)的小鼠未成熟卵母细胞作为实验材料,利用滴中孔技术进行体外跟踪培养检测不同形态未成熟卵母细胞的成熟能力,Hoechst33342标记DNA AT双键研究染色质构型,H3K27三甲基化抗体检测全基因组H3K27三甲基化水平差异。结果表明,H组小鼠卵母细胞中,细胞质直径较小的更适合在滴中孔系统内培养成熟[(71.63±1.02)μm,A形态vs(68.33±0.97)μm,B形态,P<0.05],核仁直径和透明带厚度与卵母细胞成熟能力无关。A形态卵母细胞NSN型(non-surround nucleolus)比例高于SN型(surround nucleolus)(78.57%vs 21.43%),B形态卵母细胞SN构型比例高于NSN构型(65.12%vs34.88%)。N、P、H三组小鼠卵母细胞H3K27三甲基化水平差异不显著,但N组小鼠中,A形态未成熟卵母细胞H3K27三甲基化水平显著低于B形态组(P<0.05)。P组和H组小鼠中,A形态卵母细胞与B形态卵母细胞H3K27三甲基化水平差异不显著。如果不考虑激素处理分组,则A形态卵母细胞H3K27三甲基化水平显著低于B形态卵母细胞H3K27三甲基化水平(P<0.05)。综上可知,卵母细胞形态可以反映其成熟能力、染色质构型和H3K27三甲基化水平,激素处理影响H3K27三甲基化水平。; 刘勇张领贾二腾花学洋李漫漫张贺丁彪吴风瑞王慧利李文雍; 关键词：体外培养

EFFECT OF HEAT STRESS ON PORCINE OOCYTE MATURATION AND EXPRESSION OF HEAT SHOCK PROTEIN: Introduction/Objective Heat shock bring serious stress to pig.It makes the pig metabolism disorders,endocrine ...; 刘勇Wu XiaoqingZhang LingQiao Lingyan李文雍

H3K27乙酰化模式在孤雌胚与正常胚中的差异及其对胚胎发育的影响被引量：4: 2013年; 目的考察小鼠孤雌胚胎H3K27乙酰化模式与体内胚胎的差异,探究表观遗传模式对孤雌胚发育的影响。方法利用SrCl2激活卵母细胞,获得植入前各时期孤雌胚胎,并统计胚胎发育率;小鼠注射孕马血清激素(Pregnant Mare Serum Gonadotrophin,PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin,hCG)超排后合笼,在不同发育时间采用体内冲胚的方法获得体内各时期胚胎;将获得的各期各类胚胎用H3K27乙酰化抗体与特异性位点结合,与连接有FITC荧光基团的二抗共同孵育,利用激光共聚焦显微镜检测荧光强度,获得小鼠植入前各时期孤雌胚和体内胚组蛋白H3K27乙酰化模式。结果用SrCl2激活成熟卵母细胞得到的孤雌胚的激活率和囊胚率分别为96.39%和69.54%,处于正常发育水平;孤雌胚H3K27乙酰化荧光强度从原核期相对较高的水平逐渐降低,2-细胞、4-细胞和8-细胞时期荧光强度都处于较低水平,到桑葚胚时期又突然升高,总体变化趋势和体内组先降低后升高的整体趋势一样,且原核期至8-细胞时期的荧光值孤雌胚高于体内胚,桑囊胚时期则相反;两组的H3K27乙酰化荧光强度值在原核期和桑葚胚时期差异不显著(P>0.05),在2-细胞、4-细胞、8-细胞和囊胚期差异显著(P<0.01)。结论本研究表明小鼠孤雌胚H3K27乙酰化模式与体内胚的模式存在差异,可能是影响孤雌胚发育能力的重要原因之一。进一步的深入研究将对纠正小鼠孤雌胚乙酰化模式和提高孤雌胚发育能力具有重要意义。; 王彩红刘勇黄继昌吴风瑞丁彪张远王荣李文雍; 关键词：小鼠卵母细胞孤雌胚胚胎发育

小鼠组蛋白H3K4甲基化酶Smyd3启动子荧光素酶报告载体的构建与活性分析: 2013年; 为研究小鼠(Mus musculus)组蛋白H3K4甲基化酶基因Smyd3转录调控的分子机制,本研究首先通过PCR的方法克隆了5条不同长度的Smyd3启动子5'端缺失片段,与pMD19-T载体连接后,双酶切克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,构建Smyd3启动子-pGL3-Basic报告基因重组质粒,瞬时转染HEK293细胞48 h后采用双报告基因检测试剂盒检测Smyd3启动子各缺失片段的相对荧光活性。结果表明,本研究成功构建Smyd3启动子5'端缺失片段-pGL3-Basic荧光报告基因重组质粒,所构建的启动子重组子转染组与阳性对照组相比表现出荧光活性,并且pGL3-Smyd3-4的荧光活性最强,是其他的2至4倍左右,pGL3-Smyd3-5的荧光活性最弱。本研究初步确定Smyd3基因的启动子核心区域可能位于-533～-42 bp之间,在-2 026～-533 bp之间可能存在启动子负调控序列。; 雷学华吴风瑞吴风瑞刘勇丁彪王荣; 关键词：活性分析小鼠

Effects of alcohol on H3K9 acetylation in mouse preimplantation embryos: 2015年; It is well known that excessive long-term alcohol consumption is harmful, especially in pregnant women. In the present study, the Kunming white mouse was used as an animal model and indirect immunofluorescence was performed to analyze the toxic effects of alcohol on early pre-implantation embryos. H3K9 acetylation immunofluorescence could not be detected in MII oocytes. H3K9 acetylation levels in the treatment group were higher than in the control group during the morula stage, and contrary to results during the blastocyst stage. Other stages showed no obvious differences for in vivo embryos. For in vitro embryos, almost no difference was found between the two experimental groups across all stages, and both groups showed increasing H3K9 acetylation levels（except at the 2-cell stage）. This study shows that H3K9 acetylation levels in early pre-implantation embryos are notably impacted by excessive alcohol ingestion by females. These data are the first step in understanding the epigenetic mechanism of alcohol toxicity in early preimplantation mouse embryos.; Fang DINGLi CHENYong LIUFeng-Rui WUBiao DINGWen-Yong LIRong WANG

COMPARISON OF ESTRUS IDENTIFICATION METHOD IN LIVESTOCK: Introduction/Objective In all the livestock,cattle is the main source of milk and dairy products in China.Bree...; 辛晶Wu XiaoqingZhang LingKong FengXie JuanQiao Lingyan刘勇

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国家自然科学基金(31201789)

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