国家自然科学基金(30070403)
- 作品数：5 被引量：39H指数：5
- 相关作者：胡维新许冰彭兴华申群喜邬国军更多>>
- 相关机构：中南大学中国科学院亚热带农业生态研究所中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 东方田鼠骨髓基因池的构建及抗日本血吸虫抗性相关基因的筛选被引量：10
- 2004年
- 利用表达克隆法,从东方田鼠骨髓细胞中克隆出抗日本血吸虫抗性相关基因.首先提取高质量的mRNA,逆转录成cDNA,将cDNA与哺乳动物细胞瞬时表达载体pcDNA1.1/Amp连接,建立表达cDNA文库;将cDNA文库分成A-H8个基因池,转染HEK293细胞,48h后收集培养上清,获得条件培养基.将条件培养基与日本血吸虫童虫一起培养,观察杀虫效应,取对童虫抑制作用最强的基因池E再分成8个亚基因池E1-8,分别转染HEK293细胞,并将条件培养基与血吸虫童虫一起培养,获得具有明显抑制血吸虫童虫活性的亚基因池E77,按上述方法反复进行筛选,直到获得有抑制作用的单个克隆,该技术的建立为克隆东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关基因以及研究其作用机制奠定基础.
- 秦志强胡维新邬国军许冰申群喜龚强吴驰
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫抗性相关基因
- 东方田鼠组织/器官体外杀日本血吸虫童虫作用被引量：24
- 2002年
- 目的 :筛选东方田鼠特异性杀伤日本血吸虫童虫的组织 器官。方法 :将日本血吸虫童虫与东方田鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏和肌肉的组织 器官匀浆上清液以及不同浓度东方田鼠血清混合培养 ,以昆明小鼠相应的组织 器官匀浆上清及相应浓度的血清做为对照 ,观察其杀童虫效应。结果 :东方田鼠各组织 器官与昆明小鼠各组织 器官匀浆的杀伤童虫效应比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ;东方田鼠血清较昆明小鼠血清的杀伤效应强 (P =0 .0 0 1) ;东方田鼠各组织 器官匀浆之间杀伤效应差异亦无显著性 (P >0 .0 5 ) ;东方田鼠血清较东方田鼠各组织 器官的杀伤效应强 (P <0 .0 5 ) ;东方田鼠新鲜血清与灭活补体血清的杀伤效应无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,其 4 0 %新鲜血清较2 0 %新鲜血清的杀伤效应强 (P <0 .0 0 1)。结论 :东方田鼠血清较组织 器官的杀伤效应强 ;也较昆明小鼠血清的杀伤效应强 ,东方田鼠 4 0 %血清浓度较 2 0
- 申群喜胡维新许冰彭兴华
- 关键词：日本血吸虫病东方田鼠日本血吸虫童虫杀伤效应
- 东方田鼠天然抗日本血吸虫感染相关蛋白质的分离和纯化被引量：8
- 2005年
- 目的从东方田鼠血清中分离纯化与其天然抗日本血吸虫感染特性相关的蛋白质。方法以分子筛色谱及高效液相色谱技术对东方田鼠血清蛋白质进行分离和纯化,以体外日本血吸虫童虫杀伤实验确定具有抗日本血吸虫童虫活性蛋白质,并对活性蛋白质进行N端氨基酸序列测定,通过检索蛋白质数据库以确定活性蛋白质的性质和种类。结果利用分子筛色谱及高效液相色谱技术从东方田鼠血清中获得了三个对日本血吸虫童虫具有明显杀伤活性的蛋白质组份1-1、4-1、6-3,经对4-1的N末端氨基酸序列进行测定,其序列为DAHKSEIAHR,检索蛋白质数据库,该蛋白质为白蛋白样蛋白质,但与人或其它动物的白蛋白进行比较,存在较大程度的氨基酸残基变。结论东方田鼠血清中的白蛋白是东方田鼠天然抗日本血吸虫感染的重要效应分子。
- 邬国军胡维新秦志强罗赛群俞远京王勇彭兴华
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫
- 洞庭湖日本血吸虫疫区东方田鼠生化与分子遗传学标记的初步研究被引量：8
- 2002年
- 目的 建立东方田鼠生化与分子遗传学标记检测法。方法 参考近交系小鼠、大鼠生化遗传标记检测方法 ,对东方田鼠某些同功酶进行活性测定。根据东方田鼠特异DNA序列 ,合成引物 ,扩增东方田鼠基因组DNA ,将PCR产物回收、序列分析并进行生物信息学分析。结果 东方田鼠Trf、Es 3和Ce 2三个生化位点呈现遗传多态性 ,而Id1、Mod 1、Car 2、Gpd 1、Gpi 1、Hbb、Es 1七个生化位点无遗传多态性。用合成的特异引物扩增东方田鼠基因组DNA ,得到了丰富的多态性资料。对其中的 2 0只东方田鼠的扩增产物进行测序并进行多序列比较 ,发现10个等位基因以及 16个单核苷酸多态性 (SNP)位点。结论 初步建立了东方田鼠生化及分子遗传学标记。分子遗传学标记与生化遗传标记相比 ,具有杂合率高、重复性好、易于操作等优点。这些结果为深入研究东方田鼠的遗传背景、生物进化规律积累了基础资料。
- 胡维新杨榕许冰曾海涛刘新发彭兴华
- 关键词：洞庭湖东方田鼠生化遗传标记单核苷酸多态性
- 东方田鼠长江亚种和指名亚种基因组DNA序列比较分析被引量：6
- 2003年
- 根据东方田鼠基因组DNA序列片段 (GenBank登录号 :AF2 77394 ) ,通过PCR方法扩增东方田鼠长江亚种(Microtusfortiscalamorum)和宁夏指名亚种 (Microtusfortisfortis)基因组DNA ,得到一 6 70bp左右的特异扩增片段。将PCR扩增产物克隆到pGEM Teasy载体 ,进行DNA序列分析 ,并用生物信息学方法比较东方田鼠长江亚种与指名亚种之间该序列的差异。结果表明 :在东方田鼠两个亚种中共发现 19个不同的等位基因 ,不同的个体在该序列存在广泛的单个核苷酸多态性 (SNP) ,多态性位点多达 2 5个 ;变换类型包括 :转换 (G→A、A→G、T→C、C→T)、颠换 (G→T、A→T、T→A、C→A)、插入 (CA)和缺失 (TGTTTT)。东方田鼠长江亚种和指名亚种两个种群之间存在明显差别 ,尤其是在 14 6、192、2 2 3、2 2 4、2 35位 ,但两种群间同源性仍高达 98%。同时采用系统发育树 (phylogenetictree)分析方法 ,对两个亚种的亲缘关系进行了分析和比较 ,结果显示 。
- 许冰胡维新杨榕俞远京王勇刘新发彭兴华
- 关键词：东方田鼠SNP生物进化
