山东省自然科学基金(Y2007C084)
- 作品数：13 被引量：30H指数：3
- 相关作者：曹永亮赵岩松王晓莉梁冰范姗姗更多>>
- 相关机构：潍坊医学院潍坊医学院附属医院潍坊市人民医院更多>>
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- 视网膜下移植骨髓间充质干细胞对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响被引量：6
- 2008年
- 背景:目前视网膜缺血再灌注损伤仍没有一个理想的治疗方案,组织细胞工程尤其是干细胞工程的兴起为视网膜损伤的治疗提供了新思路。目的:以视网膜电图b波、视网膜形态学、神经节细胞密度及内层视网膜厚度为指标,观察骨髓间充质干细胞视网膜下移植对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响。设计、时间及地点:完全随机对照实验,于2007-01/12在潍坊医学院眼科研究所完成。材料:选择清洁级Wistar成年大鼠48只。方法:采用密度梯度离心法培养骨髓间充质干细胞。将48只大鼠按随机数字表法分为4组,每组12只。缺血再灌注损伤组采用Daniel法制备视网膜缺血再灌注损伤模型;缺血再灌注损伤后24h,骨髓间充质干细胞移植组视网膜下移植Hoechst33324标记的骨髓间充质干细胞2×108L-1;磷酸盐缓冲液组输注等量的磷酸盐缓冲液;正常对照组不做任何处理。主要观察指标:缺血再灌注损伤后6h,24h,3d,7d,14d,28d动态检测各组视网膜电图b波;缺血再灌注损伤后28d荧光显微镜下观察骨髓间充质干细胞移植组视网膜Hoechst33324阳性细胞表达情况;缺血再灌注损伤后28d处死各组大鼠,分别对视网膜进行苏木精-伊红、尼氏染色观察,检测并比较各组神经节细胞密度及视网膜内层厚度的变化。结果:缺血再灌注损伤后各时间点缺血再灌注损伤组大鼠视网膜电图b波逐渐降低,均显著低于正常对照组(P<0.01);缺血再灌注损伤后28d骨髓间充质干细胞移植组视网膜电图b波显著高于缺血再灌注损伤组(P<0.01)。缺血再灌注损伤后28d骨髓间充质干细胞移植组视网膜各层均可见Hoechst阳性细胞,核染成蓝色。缺血再灌注损伤组视网膜神经节细胞密度与内层视网膜厚度显著小于正常对照组与骨髓间充质干细胞移植组(P<0.05～0.01),缺血再灌注损伤组与磷酸盐缓冲液组差异无显著性意义(P>0.05)。结论:视网膜缺血再�
- 赵岩松赵华锋王晓莉曹永亮张芳芹张杰
- 关键词：骨髓细胞视网膜局部缺血再灌注损伤
- 骨髓间充质干细胞对视网膜缺血再灌注损伤中Fas和FasL表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨骨髓问充质干细胞（bonemarrowmesenchymalsteincells，BMSC）移植对大鼠视网膜缺血再灌注损伤（retinalischemiareperfusioninjury，RIRI）凋亡相关因子Fas和FasL表达的影响。方法体外贴壁筛选法培养大鼠BMSC，将39只健康成年SD大鼠随机分成正常组3只、模型组18只、BMSC移植组18只。各组大鼠均选择右眼作为实验眼建立大鼠RIRI模型，正常组不做任何处理。另2组大鼠于RIRI后1h分别给予玻璃体腔注射PBS缓冲液（模型组）、BMSC（BMSC移植组），并于RIRI后2h、6h、12h、24h、48h、72h各随机处死3只SD大鼠，迅速摘取右眼。免疫组织化学法检测大鼠视网膜组织Fas和FasL的阳性细胞数情况。结果正常视网膜组织中Fas极少表达，FasL视网膜全层低表达。RIRI后2h、6h、12h、24h、48h、72h，模型组Fas阳性细胞数分别为（20．5±0．9）个·mm-2、（263．6±15．6）个·mm-2、（583．5±15．8）个·mm-2、（1184．6±45．5）个·mm-2、（684．5±3．5）个·mm-2、（80．6±4．5）个·mm-2，BMSC移植组分别为（19．8±0．8）个·mm-2、（238．5±14．7）个·mm-2、（473．6±13．6）个·mm-2、（964．5±23．7）个·mm-2、（632．6±5．8）个·mm-2、（72．5±6．3）个·mm-2：模型组FasL阳性细胞数分别为（42．2±0．9）个·mm-2、（57．3±0．9）个·mm-2、（365．8±7．5）个·mm-2、（1004．3±17．9）个·mm-2、（793．5±8．6）个·mm-2、（210．6±4．9）个·mm-2，BMSC移植组分别为（40．5±0．8）个·mm-2、（55．6±0．7）个·mm-2、（351．2±6．8）个·mm-2、（992．8±6．0）个·mm-2、（683．4±12．9）个·mm-2、（206．3±4．7）个·mm-2。与模型组比较，BMSC移植组各时间点Fas、FasL的阳性细胞数明显减少。Fas在6～48h各组差异有统计学意义（P〈0．05），FasL在12～48h各组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论RIRI后Fas／FasL表达水平升高，而玻璃体腔内注射BMSC抑制Fas�
- 曲群曹永亮李娜娜韩延燕梁冰
- 关键词：视网膜缺血再灌注损伤骨髓间充质干细胞移植FASFASL
- 视网膜缺血再灌注损伤骨髓间充质干细胞移植途径的探讨被引量：1
- 2009年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗大鼠视网膜缺血再灌注损伤的最佳途径。方法Sprague-Dawley大鼠48只,随机分为正常对照组(CON)、视网膜缺血再灌注损伤(IR)组、视网膜下移植(ST)组与玻璃体腔内移植(VT)组,12只/组。缺血再灌注损伤后6h、24h、72h、7d、14d和28d,动态检测各组ERGb波;缺血再灌注损伤后28d,采用HE与尼氏染色法检测各组RGC密度及内层视网膜厚度的变化。结果IR组缺血再灌注后,ERGb波下降,缺血再灌注后72h,IR组ERGb波降到最低幅值,缺血再灌注后28d,ST组与VT组ERGb波高于IR组(P<0.01);HE染色光镜下观察,IR组视网膜神经节细胞减少,内层视网膜变薄,ST组与VT组节细胞层神经节细胞较多,视网膜内层较厚;IR组视网膜神经节细胞密度较小,内层视网膜厚度较薄,均低于ST组与VT组(P<0.01),ST组视网膜神经节细胞密度与内层视网膜厚度均高于VT组(P<0.05)。结论骨髓MSCs视网膜下移植与玻璃体腔内移植均能显著减轻视网膜缺血再灌注损伤,骨髓MSCs视网膜下移植治疗效果较为显著。
- 赵岩松张芳芹王晓莉曹永亮张杰
- 关键词：骨髓间充质干细胞视网膜缺血再灌注损伤细胞移植
- MSC移植对视网膜缺血再灌注损伤中p53和caspase-2表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemic-reperfusion injury,RIRI)后凋亡相关基因p53、caspase-2表达的影响。方法将52只健康SD大鼠随机分为正常组(4只)、模型组(24只)、MSC移植组(24只)。前房加压法建立大鼠RIRI模型。贴壁筛选法体外培养SD大鼠MSC,模型组于RIRI后1h予以玻璃体内注射PBS缓冲液,MSC移植组注射MSC。各组SD大鼠分别于RIRI后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死,免疫组织化学染色检测各组SD大鼠RIRI后p53及caspase-2的表达情况。结果正常组各时间点未见p53及caspase阳性表达。RIRI后2h、6h、12h、24h、48h及72h模型组p53阳性细胞数量分别为(20.50±1.71)mm-2、(26.98±4.23)mm-2、(31.74±0.58)mm-2、(50.63±0.67)mm-2、(48.02±0.69)mm-2、(38.90±0.95)mm-2,MSC移植组分别为(14.48±0.47)mm-2、(17.23±0.64)mm-2、(21.64±0.58)mm-2、(28.69±1.12)mm-2、(18.73±1.21)mm-2、(17.10±0.98)mm-2;模型组caspase-2阳性细胞数量分别为(9.20±0.54)mm-2、(78.93±0.88)mm-2、(391.10±5.62)mm-2、(687.25±6.24)mm-2、(491.75±2.75)mm-2、(153.75±7.63)mm-2,MSC移植组分别为(4.23±0.36)mm-2、(58.03±5.48)mm-2、(282.25±56.82)mm-2、(588.75±9.07)mm-2、(389.75±8.18)mm-2、(121.75±3.59)mm-2;与各时间点模型组比较,MSC移植组p53及caspase-2的表达均明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 RIRI后行MSC玻璃体内注射,可抑制p53及caspase-2的表达,减少视网膜神经节细胞的凋亡,对RIRI有一定的保护作用。
- 李娜娜曹永亮范姗姗张居民祝文文梁冰
- 关键词：视网膜缺血再灌注损伤间充质干细胞移植P53
- MSC移植对缺血再灌注损伤视网膜神经节细胞Bcl-2/Bax表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)移植对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)视网膜神经节细胞Bcl-2/Bax表达的影响,为MSC移植治疗RIRI提供实验依据。方法 44只SD大鼠分为正常组(4只)、模型组(20只)、MSC移植组(20只)。前房加压法建立大鼠RIRI模型。体外培养大鼠MSC,MSC移植组于再灌注后予以玻璃体腔注射MSC。免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜缺血再灌注2h、6h、12h、24h、48h后Bcl-2/Bax表达情况。结果正常组视网膜神经节细胞未见Bcl-2、Bax表达。再灌注后2h、6h、12h、24h、48h,模型组Bcl-2表达分别为0.280±0.008、0.323±0.010、0.474±0.020、0.451±0.011、0.407±0.011,MSC移植组Bcl-2表达分别为0.340±0.006、0.401±0.009、0.610±0.006、0.581±0.009、0.490±0.005;模型组Bax表达分别为0.322±0.007、0.457±0.010、0.469±0.022、0.591±0.014、0.529±0.010,MSC移植组分别为0.252±0.008、0.366±0.011、0.389±0.009、0.433±0.013、0.391±0.004。MSC移植组与模型组比较Bcl-2表达均明显增强(均为P<0.01),Bax表达均明显减弱(均为P<0.01)。结论 RIRI大鼠行MSC移植术,可使神经节细胞Bcl-2表达增强,Bax表达减弱,Bcl-2/Bax比值升高,减少神经节细胞凋亡。MSC移植对RIRI神经节细胞有明显的保护作用。
- 祝文文曹永亮王晓莉赵岩松范姗姗
- 关键词：视网膜缺血再灌注损伤BCL-2/BAX
- BMSC移植对视网膜缺血-再灌注损伤凋亡相关基因c-fos/c-jun表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)移植对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)凋亡相关基因c-fos/c-jun表达的影响。方法将52只健康成熟SD大鼠随机分为正常组(4只)、模型组(24只)、BMSC组(24只),将后两组按再灌注后时间1 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h分为6个时间点,前房加压建立RIRI模型,干细胞贴壁法培养BMSC,RIRI模型建立1 h后模型组与BMSC组分别行玻璃体腔注射等量PBS缓冲液、BMSC细胞悬液。在再灌注后6个时间点过度麻醉处死大鼠,立即摘取术眼,通过免疫组织化学检测各组视网膜中c-fos/c-jun的阳性表达。结果正常组未见c-fos/c-jun阳性表达,再灌注后1 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,模型组c-fos阳性细胞数分别为(6.2±1.8)mm-2、(59.8±19.7)mm-2、(428.5±45.8)mm-2、(680.5±38.1)mm-2、(230.0±30.1)mm-2、(5.8±1.2)mm-2,BMSC组c-fos阳性细胞数分别为(3.9±1.9)mm-2、(30.5±23.3)mm-2、(230.5±36.3)mm-2、(546.5±40.8)mm-2、(110.5±24.4)mm-2、(3.3±0.8)mm-2;模型组c-fos阳性细胞数分别为(9.2±2.0)mm-2、(255.7±30.1)mm-2、(435.3±40.4)mm-2、(665.2±55.7)mm-2、(91.7±16.5)mm-2、(4.3±1.5)mm-2,BMSC组c-fos阳性细胞数分别为(5.2±1.4)mm-2、(134.6±29.4)mm-2、(251.9±34.5)mm-2、(558.3±25.9)mm-2、(50.5±23.4)mm-2、(2.5±0.9)mm-2。与模型组比较,BMSC组各时间点c-fos、c-jun的阳性细胞数明显减少,其中再灌注后1 h、6 h、12 h、24 h、48 h 2组差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论RIRI后行BMSC玻璃体腔注射可抑制c-fos/c-jun阳性表达,减少神经节细胞层细胞的凋亡,对RIRI有一定的保护作用。
- 韩延燕曹永亮梁冰曲群李娜娜
- 关键词：视网膜缺血-再灌注损伤骨髓间充质干细胞移植C-JUN
- 人脐血单个核细胞移植在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的迁移及分化被引量：2
- 2009年
- 背景:研究发现脐血单个核细胞脑内移植后可以存活,并减轻缺氧缺血性脑损伤程度,显著改善脑损伤大鼠的远期行为学,但作用机制仍未阐明。目的:将人脐血单个核细胞经侧脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内,观察植入细胞在脑内的迁移与分化。设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2007-12/2008-08在潍坊医学院分子影像学研究中心完成。材料:脐血来源于健康、足月妊娠产妇,由潍坊医学院附属医院产科提供。清洁级健康7d龄SD新生大鼠50只,由山东省中医药大学动物中心提供。方法:Ficoll法体外分离培养人脐血单个核细胞,移植前3d行BrdU标记。50只大鼠均采用Rice-Vannucci法复制缺氧缺血性脑损伤模型,造模后24h,在左侧侧脑室(AP:-0.5mm,ML:-2mm,DV:-2mm)注入脐血单个核细胞悬液,2μL/点,共1×105个活细胞。分别于细胞移植后24h,3d,7d,14d,28d取材制备脑组织切片,10只/时间点。主要观察指标:采用免疫荧光双标法检测移植脐血单个核细胞的脑内迁移、神经干细胞的表达、分化情况。结果:50只大鼠均进入结果分析。①移植后24h侧脑室内可见BrdU+细胞;移植后3,7d移植细胞迁移到室管膜下区;移植后14,28d移植细胞迁移到大脑皮质及海马。②移植后24h侧脑室内可见BrdU+nestin+细胞;移植后3d室管膜下区出现BrdU+nestin+细胞;移植后7dBrdU+nestin+细胞数增加;移植后14dBrdU+nestin+细胞数下降。③移植后14d大脑皮质、海马开始出现BrdU+NSE+细胞与BrdU+GFAP+细胞,移植后28d双阳性细胞数进一步增加,BrdU+NSE+细胞及BrdU+GFAP+细胞占BrdU+的比例也增加。结论:脐血单个核细胞侧脑室移植入脑内后可以继续存活,并迁移到大脑皮质与海马部位,分化为成熟的神经元与神经胶质细胞。
- 王晓莉赵岩松李耀武徐敏
- 关键词：脐血单个核细胞分化
- rhEPO对视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜神经细胞凋亡及Fas、FADD表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）所致视网膜神经细胞凋亡的保护作用及机制。方法将52只Wistar大鼠随机分为对照组4只，不行特殊处理；模型组和观察组各24只，均通过前房穿刺加压法制成RIRI模型，并分别于缺血前24h腹腔注射生理盐水和rhEPo，于1～72h应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（TUNEL）法检测视网膜神经细胞凋亡，采用过氧化物酶标记的sP免疫组化方法检测Fas、Fas相关蛋白（FADD）表达。结果对照组未见细胞凋亡及Fas、FADD表达。观察组与模型组视网膜神经细胞凋亡及Fas、FADD表达均出现于再灌注后6h，24h达到高峰，48h开始下降，其中观察组细胞凋亡在12、24、48h明显低于模型组（P〈0．05），Fas、FADD表达在6、12、24h明显低于模型组（P〈0．05）。结论rhEPO可明显减轻RIRI所致大鼠视网膜神经细胞凋亡，可能机制为下调Fas、FADD表达。
- 赵岩松牛膺筠曹永亮袁春燕
- 关键词：重组人促红细胞生成素细胞凋亡
- 缺血后处理对视网膜缺血-再灌注损伤后GRP78,Caspase-12表达的影响
- 2016年
- 目的研究缺血后处理(IP)对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜神经节细胞GRP78,Caspase-12表达及凋亡的影响,为临床缺血后处理治疗缺血再灌注性视网膜疾病提供实验依据。方法健康SD大鼠65只随机分为3组:空白组5只、模型组30只、处理组30只,空白组不做任何处理,前房加压建立RIRI模型。处理组于缺血60min后行3个循环的灌注30s阻断30s,再进行2h,6h,12h,24h,48h灌注。免疫组织化学检测各组GRP78,Caspase-12的阳性表达。结果空白组未见GRP78,Caspase-12表达。模型组GRP78阳性细胞数12h最多;模型组Caspase-12阳性细胞数24h最多。与模型组比较,处理组GRP78表达明显增强(P<0.05),Caspase-12表达明显减少(P<0.05)。结论缺血后处理对视网膜缺血-再灌注损伤可通过增强GRP78及抑制Caspase-12的表达,减少视网膜神经节细胞的凋亡,对RIRI有一定的保护作用。
- 马晓丽曹永亮梁冰韩延燕崔亚梅
- 关键词：视网膜缺血-再灌注损伤缺血后处理GRP78CASPASE-12
- MSC移植对视网膜缺血—再灌注损伤后神经节细胞中HIF-1α及Caspase-3表达的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)移植对视网膜缺血-再灌注损伤低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及Caspase-3表达及神经节细胞凋亡的影响,为MSC移植治疗视网膜缺血-再灌注损伤提供实验依据。方法将65只健康SD大鼠随机分为3组:正常组5只、模型组30只、MSC移植组30只,各组均将左眼作为实验眼制作视网膜缺血-再灌注损伤模型。贴壁筛选法体外培养SD大鼠MSC,模型组于缺血-再灌注1h予以玻璃体内注射PBS缓冲液,MSC移植组于缺血-再灌注后1h予以玻璃体腔注射MSC。各组SD大鼠分别于缺血-再灌注损伤后1h、6h、12h、24h、48h及72h处死,并立即摘除左眼眼球,固定包埋并切片,免疫组织化学法检测各组SD大鼠视网膜缺血-再灌注后HIF-1α及Caspase-3的表达情况。结果正常组未检测到HIF-1α及Caspase-3有表达,在视网膜缺血-再灌注后1h、6h、12h、24h、48h及72h模型组HIF-1α的表达分别为0.620±0.025、1.889±0.099、7.591±0.359、4.756±0.156、2.564±0.164、1.023±0.144;MSC移植组分别为0.222±0.058、0.774±0.162、1.831±0.124、1.567±0.059、0.930±0.010、0.583±0.065。模型组Caspase-3表达分别为0.106±0.093、0.593±0.083、1.760±0.087、3.855±0.142、2.429±0.070、1.329±0.080;MSC移植组分别为0.028±0.004、0.180±0.032、0.887±0.0075、1.857±0.050、1.554±0.079、0.957±0.087。与模型组相比,MSC移植组HIF-1α及Caspase-3的表达明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论视网膜缺血-再灌注损伤后行MSC玻璃体内注射可抑制神经节细胞HIF-1α及Caspase-3的表达,减少神经节细胞的凋亡,对视网膜缺血-再灌注损伤有一定的保护作用。
- 范姗姗曹永亮王晓莉赵岩松李娜娜梁冰
- 关键词：视网膜缺血-再灌注损伤间充质干细胞移植低氧诱导因子-1Α
