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ΦC31整合酶介导猪基因组定点修饰的探讨被引量：4: 2014年; 高效与特异的基因组定点修饰是基因工程动物研究的前沿与难点.链霉菌噬菌体ΦC31整合酶能介导含attB位点的外源基因定点整合于多种真核生物基因组的假attP位点,可维持外源基因的正常结构及高效表达.本文探讨ΦC31整合酶介导外源基因在猪基因组内定点整合的分子基础.构建含attB位点的报告载体pEGFP-N1-attB,与ΦC31整合酶表达载体pCMV-INT共转染猪肾PK15细胞,G418筛选获得单克隆细胞系.实时荧光定量PCR筛选出单拷贝整合的转基因细胞系.TAIL-PCR鉴定出1个猪基因组假attP位点,位于猪1号染色体,watson链,坐标114220087-114220126,命名为pig-attP-1.测序结果显示,pEGFP-N1-attB在attB位点处断开插入到pig-attP-1.用荧光计测定细胞培养基上清EGFP含量发现,该转基因细胞系EGFP的表达水平是本底的50倍(13500 AU vs.280 AU),表明pig-attP-1是利于外源基因高效表达的"友好位点".该研究不仅为实现外源基因在猪基因组内的定点整合提供了新策略,也为创制基因工程猪、建立动物生物反应器等研究注入了新思路.; 毕延震刘西梅华再东张立苹郑新民肖红卫

Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价被引量：10: 2014年; 选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用的打靶载体ΔMSTN含有LoxP位点锚定的选择标记表达框(LoxP-CMV-NeoR-IRES-EGFP-LoxP).经电穿孔将该打靶载体导入猪肾PK15细胞,经G418筛选,获得稳定整合该载体、EGFP表达均一的单克隆细胞系.将Cre重组酶表达载体pTurbo-Cre导入该细胞系,借助流式分选(FACS)、终点PCR、荧光定量PCR、TA克隆与测序等手段,证明Cre-LoxP重组系统可在猪细胞内高效介导内源性选择标记基因的删除反应,EGFP水平的删除效率达到46.1%,DNA水平的删除效率则达到97%.本文的研究结果为消除选择标记的安全隐患提供了可靠的解决方案,为建立猪安全转基因技术提供了重要的科学依据.; 王志蕊刘西梅周荆荣郑新民魏庆信董发明毕延震; 关键词：CRE LOXP 绿色荧光蛋白删除

转IGF-1基因猪的诱导表达被引量：1: 2016年; 为了探索诱导型转胰岛素样生长因子-1转基因猪基本性能,试验采用添加了0.1%四环素的日粮饲喂4.5月龄诱导型转IGF-1转基因猪45d,试前、后空腹称重,试验结束时,屠宰、分割、采样分析。结果表明,与同窝非转基因猪相比,屠宰时血清IGF-1水平高出30.9%;胴体瘦肉率增加8.92%,肌肉的水分、肌间脂肪及灰分没有变化;血液生化指标无异常变化;转基因猪的各个组织器官大小、形状及颜色等无异常。在诱导情况下,肤岛素样生长因子-1转基因猪瘦肉有所提高,而且生长发育正常,说明这种诱导型转基因猪具有作为高瘦肉率品系育种的潜力。; 刘西梅华再东李莉肖红卫张立苹任红艳程妮綦世金毕延震; 关键词：转基因 IGF-1

基因组无痕修饰与动物转基因被引量：2: 2015年; 动物转基因技术可以突破物种与年龄界限,有针对性地创造遗传变异.但是在转基因过程中,非目的序列的残留可能对后续研究造成障碍,甚至形成安全隐患.因此,对动物基因组进行无痕修饰的重要性日益凸显.基因组无痕修饰目前主要有两套策略.一是人工核酸酶的非整合导入,这主要是通过RNA或蛋白质的形式实现,可有效避免核酸酶质粒DNA的残留.二是转基因载体的优化及整合后删除,它是借助Piggybac系统,对末端重复单元之间的序列进行精确切离.本文总结了动物基因组无痕修饰的研究现状,并对其存在问题和应用前景做出评述,以期对我国的动物转基因研究和家畜转基因育种提供有益的参考和借鉴.; 毕延震郑新民华再东; 关键词：动物转基因转基因育种

转EGFP-attB基因PK15细胞核型分析方法的建立: 2013年; 以转EGFP-attB基因PK15细胞（猪肾细胞15）为试验材料,研究不同秋水仙素浓度、低渗时间对染色体标本制备的影响。结果表明,使用秋水仙素浓度为0.04~0.08μg/mL、低渗时间为15~20 min时所制备的染色体标本分裂相分散好,可以做核型分析用,为下一步做染色体荧光原位杂交检测研究转EGFPattB基因在染色体上的整合位点奠定了基础。; 肖红卫刘西梅毕延震华文君李莉张立苹华再东郑新民; 关键词：转基因核型分析

动物基因组编辑及其应用研究进展: 2019年; 基因组编辑技术已成为研究人员进行生物和生物医学研究的强大武器。为了进一步改善和拓展其功能,科学家们在多种生物个体上进行了测试,优化了多种基因编辑工具递送策略,并且已经研发出了多种方案来确保基因组编辑的准确性。本研究回顾了基因组编辑技术的历史里程碑,讨论了出现的相关技术应用,最后,本研究还预测了未来基因组编辑技术的发展方向,为基因组编辑技术的未来发展提供了一个崭新的视角。; 任红艳华再东毕延震郑新民

诱导型IGF-1转基因猪的构建被引量：1: 2015年; 以显微注射的方法,将去掉原核DNA的Pc DNA3.1IGFTREtr TA诱导型IGF-1载体注射到猪受精卵原核中,经胚胎移植、怀孕、产仔、取样、检测等过程,得到幼仔85头,其中的11头为PCR检测阳性,进一步的Southern blot检测有10头阳性,即构建的原代诱导型IGF-1转基因猪有10头。; 刘西梅华再东李莉张立苹肖红卫任红艳毕延震; 关键词：诱导型 IGF-1 转基因猪

17-β-雌二醇对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚的影响被引量：1: 2015年; 为了观察17-β-雌二醇对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚的影响,选用屠体卵巢上的卵母细胞为试验材料,将其分为4组,分别在培养基中添加0、25、50、75μmol/L 17-β-雌二醇,体外成熟培养时间为36~44 h,受精胚培养时间为9 d。结果表明,在培养基中分别添加17-β-雌二醇0、25、50、75μmol/L时猪卵母细胞体外成熟率分别为58.5%、67.1%、80.9%、64.5%,卵裂率分别为51.2%、56.5%、63.5%、59.2%,囊胚形成率分别为16.7%、24.2%、19.5%、24.0%。结果显示在培养基中添加50μmol/L 17-β-雌二醇可提高猪卵母细胞体外成熟率至80.9%,提高体外受精胚的卵裂率至63.5%,但囊胚形成率以添加量为25μmol/L的组最高,说明添加17-β-雌二醇可提高猪卵母细胞成熟率、卵裂率以及囊胚率。; 肖红卫华再东张立苹任红艳刘西梅华文君李莉毕延震郑新民; 关键词：17-Β-雌二醇卵母细胞体外成熟体外受精胚胎培养

三溴乙醇对小鼠麻醉效果的研究被引量：5: 2015年; 为研究三溴乙醇对小鼠的麻醉效果,使用5组不同剂量三溴乙醇（200、350、500、800和1000 mg/kg）分别腹腔注射小鼠,进行小鼠麻醉。结果表明,200 mg/kg三溴乙醇腹腔注射小鼠,麻醉效果很差,小鼠未达到麻醉状态而持续动弹,350-800 mg/kg三溴乙醇腹腔注射小鼠能达到很好的麻醉效果。; 李莉华再东任红艳毕延震刘西梅肖红卫张立苹郑新民; 关键词：三溴乙醇麻醉小鼠

转hFat-1基因猪外源基因整合分析及拷贝数测定被引量：1: 2014年; 对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因的拷贝数,分别是2、1、1、2个拷贝。转hFat-1基因猪能够将外源基因遗传到下代仔猪,但外源基因具有遗传不稳定的趋向。; 华文君华再东郑新民毕延震肖红卫张立苹; 关键词：拷贝数

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