辽宁省博士科研启动基金(20081078)
- 作品数：5 被引量：23H指数：3
- 相关作者：高凤山冯磊赵德王京华宋硕更多>>
- 相关机构：大连大学辽宁省畜牧科学研究院内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：辽宁省博士科研启动基金国家自然科学基金辽宁省教育厅科学计划资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 荷包猪SLA-2原核表达系的建立及表达研究被引量：7
- 2011年
- 目的:建立荷包猪SLA-2原核表达系并研究SLA-2在pET-32中的表达。方法:设计SLA-2胞外区的表达引物,亚克隆荷包猪SLA-2的胞外区,并转化入原核表达系统pET-32进行表达,SDS-PAGE分析其表达产物的特性。结果:PCR结果显示,SLA-2胞外区亚克隆大小为840bp,酶切鉴定证实成功插入pET-32表达载体,构建重组质粒pET-32a(+)/SLA-2。SDS-PAGE显示,SLA-2基因导入宿主菌后成功表达,蛋白大小为51.4ku,与预期结果相符,蛋白相对表达含量达到了45%。结论:结果表明荷包猪SLA-2在pET-32系统中成功表达,蛋白表达量符合要求,可用于下一步的结构和功能检测。
- 陈茜茜王京华张香春宋硕李鹏高凤山
- 关键词：荷包猪SLA-2
- 荷包猪一类缺失型SLA-3等位基因的克隆及生物信息学分析被引量：4
- 2012年
- 为研究荷包猪SLA-3基因特征,设计引物克隆了荷包猪SLA-3,经生物信息学软件分析其基因特征。结果显示,所克隆的荷包猪SLA-3基因(暂命名为SLA-3-HB02)碱基序列长度为1 417 bp,其中2-1 054为ORF区,共编码350个氨基酸,在其编码的氨基酸334-344处存在缺失。SLA-3-HB02与其他SLA-3、SLA-2及SLA-1等位基因群的氨基酸同源率分别为87.8%-98.6%、82.8%-87.8%和83.7%-90.0%。分子进化关系分析,SLA-3-HB02与美国的Hanford遗传距离较近;各功能区分析,SLA-3-HB02保留了HLA-A2等的部分功能基因位点,并与HLA-B15和H-2K1有一定的交叉识别位点。同源模建揭示SLA-3-HB02分子与HLA-A2及H-2K1 3D结构相似。
- 乔翠许崇波张兴会张文军郭丹张胜高凤山
- 关键词：荷包猪缺失型等位基因生物信息学
- 一商品猪SLA-Ⅰ分子复合体的体外构建被引量：2
- 2009年
- 【目的】研究中国北方杂交商品猪SLA-Ⅰ类分子结构特点,并为进一步的多肽结合等功能研究奠定基础,需要在体外构建正确折叠的SLA-I类分子复合体。【方法】以长白-达兰商品猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m。然后采用剪接重叠延伸PCR(splicingoverlapextentionPCR,SOEPCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接,形成SLA-2-Linker-β2m全长,并插入原核表达质粒pMAL-p2X,转化E.coliTB1,IPTG诱导表达。表达得到的融合蛋白分别经过Western-blot、纯化及FactorXa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(circulardichroismspectrum,CD)测定蛋白的二级结构。【结果】SDS-PAGE和Western-blot均证实融合蛋白MBP-SLA-Ⅰ大小为84.1kD。SLA-I单体蛋白大小为41.6kD。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、90.6%、88.5%和96.9%。【结论】结果表明重构的SLA-I复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究。
- 高凤山李新生李云岗郝惠芳方勤美夏春
- 关键词：复合体圆二色谱
- 荷包猪SLA-DRB基因cDNA的克隆及分子进化特征分析被引量：2
- 2015年
- 旨在研究荷包猪SLA-DRB基因的分子特征,设计引物用RT-PCR扩增3头荷包猪DRB基因c DNA,并克隆至p MD18-T Vector,阳性克隆测序并做序列分析,分别进行同源性、分子进化及主要氨基酸变异位点分析。结果表明,成功从3头荷包猪中扩增得到SLA-DRB基因,分别命名为SLA-DRB-HB01-03,经序列测定后,证实c DNA全长为836 bp,其中1-801为ORF区,共编码266个氨基酸。同源性分析显示,SLA-DRB-HB与其他SLA-DRB等位基因的同源性介于90.3%-99.8%之间。分子进化分析表明,荷包猪SLA-DRB-HB独立分支,与其他等位基因相比较,进化更加原始。氨基酸变异位点和多态性分析结果显示,SLA-DRBHB本身存在一定的多态性。
- 姜平额尔敦木图高凤山
- 关键词：荷包猪SLA-DRB分子进化多态性
- 猪主要组织相容性复合体研究进展被引量：12
- 2012年
- 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)分子首先作为主要组织相容性抗原被发现,进而以此命名。随着其抗原结合分子及T细胞信使生物学功能本质的揭示,关于MHC结构与功能的研究就进入了一个崭新时代,并在这一领域中取得了许多可喜的成果。论述了近年来猪MHC(SLA)结构与功能方面的研究进展,包括SLA的分类及多态性、SLA分子结构特点、SLA分子功能及SLA分子相关领域的最新研究进展。
- 冯磊赵德高凤山
- 关键词：主要组织相容性复合体
