国家自然科学基金(30672240)
- 作品数：12 被引量：89H指数：6
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- 高压氧治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响被引量：6
- 2009年
- 目的探讨高压氧（HBO）治疗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠后，内源性神经干细胞增殖的动态变化。方法将7日龄Sprague—Dawley新生大鼠随机分为正常对照组（对照组）、缺氧缺血脑损伤组（模型组）与HBO治疗组（HBO组）。采用经典的Rice-Vannucci法制作缺氧缺血性脑损伤模型，HBO组在脑损伤后3h内进行HBO治疗，治疗压力为2个绝对大气压，稳压60min，每日1次，连续7d。分别于HBO治疗后第3小时、第21小时、第3天、第7天和第14天，采用5-溴-2-脱氧脲苷（BrdU）／巢蛋白免疫荧光双重标记法动态检测缺血侧侧脑室室管膜下区与海马齿状回内源性神经干细胞增殖的动态变化；采用Western blot法检测缺血侧大脑半球巢蛋白的动态变化。结果HBO组室管膜下区与海马齿状回BrdU^＋／巢蛋白标记的神经干阳性细胞数分别于HBO治疗后第3小时及第21小时显著增加，第7天达最高水平，并显著高于模型组和对照组（P〈0．01），第14天BrdU^＋／巢蛋白阳性细胞数开始下降，仍高于模型组和对照组（P〈0．01）；巢蛋白的Western blot分析发现，缺血侧大脑半球巢蛋白于HBO治疗后第21小时开始增加，第7天达峰值后下降。结论缺氧缺血性脑损伤后3h内给予HBO治疗，可以促进缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞的增殖。
- 王晓莉赵岩松杨于嘉谢岷
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤高压氧神经干细胞
- 高压氧影响离体神经干细胞分化的量效及时效关系被引量：3
- 2010年
- 目的探讨不同压力和不同稳压时间下高压氧(HBO)对离体神经干细胞(NSCs)分化的影响,旨在找出HBO治疗的最佳压力与稳压时间。方法取出生3日内新生Sprague-Dawley大鼠的脑皮质组织,在含B27、bFGF和EGF的DMEM/F12培养基中悬浮培养NSCs。将传至2～3代的NSCs随机分为不做处理的对照组(CON)和HBO处理组。HBO处理组根据所用压力和稳压时间分为6组:NSCs分别给予1个绝对大气压(ATA)、2 ATA、3 ATA的HBO处理,每种压力再分别给予30和60 min两种稳压时间。HBO后继续培养24 h,7组细胞在同一时间行免疫荧光染色,荧光显微镜下观察NSCs分化为NSE阳性细胞的百分率。结果 NSCs分化为NSE阳性细胞的分化率从低到高依次为CON组(3.72±0.88%),1ATA-30 min组(3.85±0.44%),1ATA-60 min组(5.45±0.52%),3ATA-30 min组(6.08±0.57%),2ATA-30 min组(6.72±0.76%),3ATA-60 min组(7.89±0.62%),2ATA-60min(9.17±0.50%);除1ATA-30 min组外,其余各HBO组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同一压力下60min组与30min组之间的差异及2ATA-60 min组与其他各组之间的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 2 ATA压力下稳压时间为60 min的HBO促进NSCs向神经元分化的作用最强。
- 谌崇峰杨于嘉王庆红姚跃李萌
- 关键词：高压氧分化神经干细胞
- 高压氧治疗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的不良反应被引量：5
- 2009年
- 目的探讨高压氧治疗对HIBD新生大鼠视网膜血管和肺组织的不良反应。方法将出生7日的SD新生大鼠162只随机分为6组:正常对照组(n=22),HIBD组(n=20),高体积分数氧组(高氧组,n=32),高压空气组(n=16),高压氧组(n=36),高氧加高压氧组(n=36)。高压空气组和高压氧组于HIBD模型制作后2h分别给予高压空气和高压氧(2个大气压)处理1h,1次/d,连续7d。高氧组于HIBD制作后给予900～950mL/L氧,连续7d。高氧加高压氧组于HIBD模型制作后进行高氧处理,同时予高压氧治疗,1次/d,连续7d。21日龄处死动物,TUNEL法检测各组海马CA1区神经细胞凋亡;HE染色观察其眼球和肺组织病变;墨汁染色视网膜铺片观察其血管增生情况;免疫组织化学观察其血管内皮生长因子(VEGF)表达;ELISA法检测其脑组织8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平。结果1.HIBD组、高压空气组、高氧组和高氧加高压氧组脑组织海马CA1区凋亡细胞数较正常对照组明显增多(Pa<0.01),高压氧组无明显增加。2.高氧组和高氧加高压氧组视网膜新生血管细胞核计数较正常对照组明显增多(Pa<0.01),高压氧组增加不明显。3.视网膜铺片显示高氧组和高氧加高压氧组视网膜血管明显增生,但HIBD组、高压空气组、高压氧组无明显血管增生现象。4.高氧组和高氧加高压氧组视网膜VEGF较正常对照组明显表达(Pa<0.01)。5.肺组织HE染色观察到HIBD组、高压空气组和高压氧组结构均与正常对照组相似;高氧组和高氧加高压氧组肺泡样结构明显遭破坏,后者程度稍轻。6.脑组织8-iso-PGF2α水平在HIBD组、高压空气组和高压氧组均较正常对照组增加(Pa<0.01);高氧组和高氧加高压氧组均较高压氧组显著增高(Pa<0.01)。结论高压氧治疗对HIBD新生大鼠脑损伤有保护作用;高氧有刺激新生大鼠视网膜血管增生和肺组织损伤作用,而高压氧则无眼和肺的不良反应;高氧可加重HIBD后脑组织脂质�
- 祁伯祥王庆红杨于嘉李萌姚跃谌崇峰
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤高压氧高体积分数氧
- 靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表达质粒的构建与筛选被引量：3
- 2010年
- 目的构建靶向β-连环蛋白（β-catenin）基因的shRNA的真核表达质粒，并筛选出沉默β-catenin基因效果最明显的shRNA表达质粒。方法设计3对针对β-catenin基因不同位点的shRNA片段，构建携带此shRNA片段的真核表达质粒（shRNA1—3）并行测序分析，电穿孔转染神经干细胞（neural stem cells NSCs），测定转染率，并分别采用RT—PCR及Western印迹检测β-catenin mRNA和蛋白表达情况，免疫组化方法检测shRNA对神经干细胞分化的影响。结果构建靶向β-catenin基因的shRNA真核表达重组质粒shRNA1，2，3。经筛选，NSCs转染shRNA3后，B—catenin RNA水平和蛋白水平均明显低于阴性对照组和空白对照组（0．08±0．00 vs 0．75±0．01，0．74±0．02；0．12±0．10，vs 0．56±0．02，0．65±0．01，P均〈0．01；与空白组和阴性对照组相比，shRNA3组NSCs分化为GFAP阳性细胞的百分率明显增加，分化为NSE阳性细胞的百分率明显减少（P〈0．05）。结论β—catenin RNA3对神经干细胞的β—catenin表达具有明显抑制作用，可影响细胞的分化。为研究wnt／β-catenin信号途径在NSCs生长分化中的作用奠定基础。
- 张晓英杨于嘉谌崇峰姚跃王庆红
- 关键词：Β-连环蛋白短发夹状RNA电穿孔
- 人骨髓间充质干细胞对异体B淋巴细胞的免疫调节作用被引量：7
- 2007年
- 目的研究人骨髓间充质干细胞(MSC)体外对 B 淋巴细胞的免疫调节作用。方法从人骨髓中分离培养 MSC,通过观察细胞形态和流式细胞术检测细胞表面标志进行鉴定。用加速器辐射去除 MSC 增殖分化能力。检测加入骨髓 MSC 前后 B 淋巴细胞增殖能力变化,并对其进行凋亡分析;比较 Transwell 非接触培养与直接接触培养中,MSC 对活化 B 淋巴细胞增殖的作用;观察骨髓 MSC作用前后,活化 B 淋巴细胞分泌免疫球蛋白 IgG、IgA 和 IgM 的能力,以及 B 淋巴细胞表面免疫分子的表达。结果①MSC 不能刺激 B 淋巴细胞增殖;MSC 抑制 LPS 活化的 B 淋巴细胞增殖,其抑制作用与浓度呈依赖性。②MSC 不能诱导 B 淋巴细胞凋亡;Transwell 非直接接触培养组中 MSC 抑制 B 淋巴细胞增殖的作用较直接接触培养组的作用弱,提示 MSC 抑制 B 淋巴细胞增殖的作用包括物理性接触抑制和非接触抑制。③骨髓 MSC 抑制活化的 B 淋巴细胞分泌免疫球蛋白 IgG、IgM 和 IgA;MSC 作用下,B 淋巴细胞表面 HLA-DR、CD40、CD80和 CD86的表达无显著改变。结论骨髓 MSC 在体外可抑制 B淋巴细胞增殖和分泌功能,具有一定的免疫调节能力。
- 刘沉涛杨于嘉谢岷王晓莉余小河王霞王庆红
- 关键词：间充质干细胞B淋巴细胞免疫调节
- 高压氧促进缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的时间窗研究被引量：10
- 2007年
- 目的:探讨高压氧(HBO)治疗是否可以促进缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞(NSC)的增殖及HBO治疗HIBD的时间窗。方法:采用Rice法制成HIBD模型,分别于HIBD后第3、6、12、24和72h开始给予HBO治疗,1次/d,连续7 d。HIBD后10 d,BrdU/Nestin免疫荧光双标法检测不同时间窗HBO治疗对内源性NSC的影响,Western blot法检测Nestin蛋白的表达;HIBD后28 d尼氏染色法检测海马CA1区锥体细胞密度。结果:HIBD后3、6、12和24 h给予HBO治疗,侧脑室室管膜下(SVZ)区BrdU+Nestin+细胞显著增加(P<0.05),损伤侧大脑Nestin蛋白表达显著高于HIBD组(P<0.05);尼氏染色结果显示HIBD后3、6、和12h给予HBO治疗,海马CA1区神经元丢失较HIBD组显著减少(P<0.05)。结论:HBO治疗可以促进HIBD新生大鼠内源性NSC的增殖,治疗时间窗拓宽至HIBD后24 h可促进NSC增殖,HIBD后72 h进行HBO治疗则疗效不显著。
- 王晓莉杨于嘉余小河谢岷王霞刘沉涛
- 关键词：高压氧缺氧缺血脑损伤时间窗内源性神经干细胞新生大鼠
- 不同疗程高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响被引量：15
- 2009年
- 目的探讨不同疗程高压氧(HBO)对缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生大鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法7日龄SD大鼠随机分为正常对照组(CON组)、HIBD组、HBO组,其中HBO组又分为HBO1疗程组[HBO-1,在HIBD2 h开始HBO治疗,HBO压力为0.1 MPa(2 ATA),稳压60 min,1次/d,7次为1疗程],2疗程组(HBO-2,予2个疗程HBO)和3疗程组(HBO-3,予3个疗程HBO)。疗程结束后(鼠龄35 d)取脑组织标本,采用5-溴-2-脱氧嘧啶核苷(BrdU)/神经巢蛋白(Nestin)免疫荧光双标法检测缺血侧侧脑室室管膜下区(SVZ区)和海马齿状回区(DG区)的内源性NSCs的变化。Western blot法检测缺血侧大脑半球Nes-tin蛋白变化。BrdU/神经元特异性烯醇化酶(NSE)和BrdU/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标法检测大脑皮层神经元和星形胶质细胞数量;TUNEL法检测皮层神经细胞凋亡;并进行T迷宫试验、放射臂迷宫测试、足错误等行为学测试。结果1.HBO治疗后SVZ区BrdU+/Nestin+细胞随疗程增加而逐渐增加,以HBO-3组的阳性细胞数最多;2.各组大鼠的海马DG区均仅有极少量的BrdU+/Nestin+细胞表达,且随着HBO疗程的增加,BrdU+/Nestin+细胞表达无增加;3.大脑皮层BrdU+/NSE+细胞表达随HBO疗程增加逐渐增多,其中以HBO-3组的阳性细胞数最多;4.HIBD组可见较多GFAP+细胞,高于CON组和HBO组;且各组均仅有个别BrdU+/GFAP+细胞表达;5.Western blot显示HBO-3组Nestin蛋白表达高于其余各组;6.T迷宫、放射臂迷宫和足错误测试结果均表明随着HBO疗程的增加,疗效愈加显著。结论增加HBO疗程可促进HIBD新生大鼠SVZ区内源性NSCs皮层神经元细胞的增殖和分化。
- 王庆红杨于嘉谌崇峰李萌姚跃
- 关键词：高压氧疗程神经干细胞
- 增加高压氧疗程对治疗时间窗延迟的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用被引量：14
- 2009年
- 目的探讨多疗程的高压氧(HBO)治疗对96h时间窗的缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的保护作用。方法7日龄Sprague-Dawley大鼠88只,随机分为正常对照组(CON)、HIBD组和HBO组。HBO组根据HBO治疗时间窗的不同分为2H,48H和96H组,即分别于HIBD后2,48和96h给予HBO;各亚组又根据不同疗程分成1疗程组(HBO-1)、2疗程(HBO-2)和3疗程组(HBO-3)。HBO组(压力为2ATA)每天给予HBO1次,连续7d为一疗程,休息3d后进入下一疗程。各组待96H组的3疗程亚组完成全部疗程后,即鼠龄38d(HIBD后31d)时一同处死。采用TUNEL染色检测大脑皮层和海马CA1区神经细胞凋亡;并采用NSE免疫组化方法检测各组皮层神经元数量。结果①HIBD组凋亡细胞数量明显高于CON组,同时NSE阳性细胞明显少于CON组(P<0.01)。②随着治疗时间窗的延迟,单疗程HBO对凋亡的抑制作用及对神经元的保护作用逐渐减弱。③在48H和96HHBO组,HBO对神经细胞凋亡的抑制作用及对神经细胞的保护作用随着疗程的增加而逐渐增强;但2HHBO组经过一疗程HBO治疗后,凋亡细胞数量已经减少至CON组水平,而且NSE阳性细胞数量增加也接近CON组,随着疗程增加不再有明显变化。结论①HIBD后2h给予一疗程的HBO治疗即可明显抑制神经细胞的凋亡及保护神经元;②增加疗程可增强治疗窗延迟的HBO对神经细胞凋亡的抑制与对神经元的保护作用。
- 王庆红杨于嘉谌崇峰姚跃李萌
- 关键词：高压氧缺氧缺血性脑损伤疗程新生大鼠
- 高压氧治疗促进HIBD新生大鼠内源性神经干细胞的迁移与分化被引量：17
- 2009年
- 目的该研究探讨了高压氧(HBO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞(NSCs)的迁移与分化的影响。方法7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为对照组,模型组及HBO组。采用Rice-Vannucci方法制成HIBD模型。造模后3 h内行HBO治疗。分别于HBO治疗后7 d、14 d、28 d,采用BrdU/DCX,BrdU/β-tubulin,BrdU/GFAP和BrdU/O4免疫荧光双标法,用共聚焦显微镜动态检测侧脑室室管膜下区(sub-ventricular zone,SVZ)与大脑皮层内源性NSCs的迁移与分化。结果治疗后7 d,HBO组损伤侧SVZ区BrdU+DCX+细胞数(84±21个/mm2)增加,多于对照组(39±14个/mm2)与模型组(68±17个/mm2)(P<0.05);治疗后14 d,SVZ区BrdU+DCX+细胞数减少,而皮层区BrdU+DCX+细胞数增加,HBO组明显多于对照组(P<0.01);治疗后28 d,各组大脑皮层BrdU+DCX+细胞数减少,大脑皮层出现BrdU+β-tubulin+,BrdU+GFAP+,BrdU+O4+细胞。HBO组BrdU+β-tubulin+与BrdU+O4+细胞数显著高于对照组与模型组(P<0.05)。结论高压氧可促进HIBD新生大鼠内源性NSCs迁移到大脑皮层并分化为成熟的神经细胞。
- 王晓莉杨于嘉谢岷王庆红余小河
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤高压氧神经干细胞新生大鼠
- 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织上清液诱导骨髓基质细胞神经分化被引量：2
- 2007年
- 目的:观察缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠不同时间点脑组织上清液对骨髓基质细胞(BMSCs)向神经细胞分化的影响。方法:7日龄新生SD大鼠结扎左颈总动脉制作HIBD模型(n=15),另设15只正常同日龄新生大鼠。两组分别在HIBD后24h(8日龄)、72h(10日龄)及7d(14日龄)时处死(n=5)。分别制备左、右脑组织上清液。将培养3～5代的SD大鼠BMSCs接种于预先置有盖玻片24孔板中,正常培养至细胞达到60%～70%融合后,分别加入上述时间点的脑组织上清液,另正常换液未加上清液组为未干预组。培养3d后行神经元特异性烯醇酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞前体细胞标记O4的免疫荧光检测,计算阳性率。结果:未干预各组细胞仅有少量NSE,GFAP及O4的表达,正常大鼠各时间点左、右脑上清液共培养各组细胞NSE,GFAP及O4阳性率较未干预组增加(均P<0.01),但左、右两侧比较差异无统计学意义(P>0.05)。HIBD后24h组、72h组左脑(损伤侧)上清液共培养组细胞NSE,O4的阳性率明显增加,分别与同时间点右侧及正常组同一时间点的左、右侧比较,差异有统计学意义(分别P<0.05,P<0.01),HIBD后7d左、右脑上清液共培养组细胞NSE,GFAP及O4的阳性率相近,分别与正常组同一时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)。HIBD后24h组左脑上清液共培养组细胞NSE,O4的阳性率较HIBD后72h组及7d组左脑上清液共培养组细胞NSE,O4的阳性率高,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:正常鼠、HIBD鼠脑上清液均能诱导BMSCs发生神经分化,以HIBD后24h损伤侧脑上清液对BMSCs的神经分化率最高。
- 谢岷杨于嘉刘沉涛王庆红王霞余小河
- 关键词：上清液骨髓基质细胞缺氧缺血
