山东省自然科学基金(Y2007C044)
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
- 相关作者：李若葆黄琰刘艳艳梁淑娟李洪先更多>>
- 相关机构：潍坊医学院潍坊医学院附属医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 被动吸烟对大鼠肺组织转化生长因子β1表达和p53基因突变的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究被动吸烟对肺组织转化生长因子β1（TGF-β1）和p53表达和p53突变的影响。方法用Wistar大鼠建立被动吸烟动物模型。免疫组织化学SP法检测TGF-β1和p53在肺组织中的表达，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）观察TGF-β1mRNA在肺组织中的表达。PCR-单链构象多态性分析p53基因第5、6、7-8外显子突变情况。结果TGF-β1在正常肺组织中有少量表达，随着被动吸烟月份的增加，TGF-β1表达明显增多，每月间比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。p53阳性表达率均随被动吸烟时间的延长而升高（P〈0．05）。p53基因第5、6、7-8外显子均有突变，随被动吸烟时间延长，突变率增高。结论TGF-β1和p53表达和p53突变均随被动吸烟时间延长而增高，可作为肺癌诊断的参照指标。
- 黄琰李若葆
- 关键词：WISTAR基因转化生长因子Β1反转录聚合酶链反应
- 长期吸烟对肺癌癌旁及周围肺组织结构和P53、VEGF蛋白表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的本研究旨在探讨吸烟对肺癌患者癌组织、癌旁组织以及周边组织P53和VEGF的表达,为吸烟者肺癌的早期诊断提供理论依据。方法选择肺癌患者126病例,其中吸烟组96例,非吸烟组30例,所有病例临床资料完整,吸烟史明确,患者术前均未接受化疗、放疗或其他针对肿瘤的治疗。光镜下观察支气管黏膜上皮、肺癌组织、癌旁组织和周围组织等结构变化情况,免疫组织化学检测吸烟组及非吸烟组肺癌组织、癌旁组织及周边组织P53和VEGF蛋白的表达情况。所得数据采用SAS软件作统计学处理分析,比较各组间差异程度。结果吸烟组肺泡腔不规则扩大,肺泡壁变薄或断裂,呼吸性细支气管呈囊状扩张,细支气管壁明显增厚,严重者支气管黏膜上皮排列紊乱、脱落;细胞表面的分泌物及杯状细胞和腔内黏液栓均较非吸烟组多。P53蛋白表达于细胞核,VEGF表达于细胞质以及新生血管内皮细胞,阳性均呈棕黄色颗粒状。癌组织P53、VEGF阳性表达均高于癌旁组织及周边组织(P<0.05);吸烟组癌旁组织和周边组织P53、VEGF阳性表达均高于非吸烟组(P<0.05)。P53、VEGF在吸烟组和非吸烟组肺癌组织中的表达均呈正相关,提示P53基因突变可能上调VEGF表达,突变型P53基因和VEGF在肺癌血管形成中可能具有协同作用。结论吸烟可引起肺组织损害,并使肺组织P53和VEGF蛋白表达增强,P53和VEGF表达与肺组织损害呈正相关。
- 李若葆黄琰王金平薄其付李洪先
- 关键词：吸烟P53
- pLIVE-IL-1β表达载体的构建及在Hepa1-6细胞的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建应用于体内表达和研究的小鼠IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其在小鼠HE-PA1-6细胞中的表达水平。方法分离BALB/c小鼠外周血淋巴细胞,LPS刺激后提到总RNA,RT-PCR扩增IL-1β基因,与pLIVETM连接构建pLIVE-IL-1β重组表达载体,并通过菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列分析进行鉴定。利用TransITTM将pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR分析IL-1β的表达水平。结果从小鼠腹腔巨噬细胞中RT-PCR扩增得到一822bp的片段,纯化的PCR产物与pLIVETM同时经XhoⅠ和NheⅠ双酶切后连接,菌落PCR鉴定获得多个阳性克隆,经质粒XhoⅠ+NheⅠ限制性酶谱分析,酶解出822bp的条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank登录的小鼠IL-1β基因一致。将该载体转染Hepa1-6细胞,RT-PCR证实,与转染pLIVETM的对照细胞相比,IL-1β的表达水平明显升高。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中稳定高效表达IL-1β。
- 王焕芹梁淑娟刘艳艳李青春肖伟玲李若葆
- 关键词：肝癌IL-1Β促炎性细胞因子
- 肝癌组织特异性P_(afp)IRES2-EGFP表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的构建AFP最小启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体,观察其在小鼠H22肝癌细胞中的特异性表达。方法从H22细胞总DNA和荧光载体pIRES2-EGFP中分别PCR扩增AFP最小启动子区序列和CMV增强子(ECMV),利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得AFP启动子驱动的嵌合调控序列,将其克隆入pIRES2-EGFP载体,进行菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定。通过jetPEI方法转染H22肝癌细胞和YAC1淋巴瘤细胞,荧光显微镜下观察其表达的组织特异性。结果从小鼠H22细胞DNA和pIRES2-EGFP中分别扩增得到229bp和324bp的片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到一537bp的条带,均与预期序列长度一致。SOE产物与pIRES2-EGFP连接,菌落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经Nde I+NheⅠ限制性酶谱分析酶解出537bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的嵌合DNA与GeneBank中小鼠AFP启动子和ECMV序列完全一致。结论本研究成功构建了AFP启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达外源基因。
- 牟东珍梁淑娟刘艳艳王雪净吴慧娜李若葆
- 关键词：肝癌组织特异性表达AFP启动子
- 长期吸烟与肺癌患者NF-κB表达的相关性研究被引量：2
- 2011年
- 目的 探讨长期吸烟与肺癌患者NF-κB表达的相关性,为临床上吸烟者肺癌的早期诊断提供理论依据.方法 选取肺癌患者200例,设计调查分析表,调查吸烟情况并分析其与肺癌发病的相关性;采用免疫组化法检测54例吸烟的肺癌患者和46例非吸烟肺癌患者肺组织中NF-κB表达,并分析其差异性.结果 长期吸烟与肺癌的发病具有相关性;NF-κB无论在吸烟组还是非吸烟组,均有阳性表达,但吸烟组阳性表达率明显高于非吸烟组.结论 长期吸烟对肺癌患者NF-κB的阳性表达具有一定的影响.
- 郑卫星李若葆
- 关键词：吸烟肺癌NF-ΚB
- COPD模型大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达及意义被引量：9
- 2008年
- 目的探讨转化生长因子良（TGF-β1）在长期吸烟所致慢性阻塞性肺疾病（COPD）病理变化中的作用。方法将大鼠随机分为对照组和模型组，分别分为1-6月组，每组6只。建立大鼠吸烟COPD模型。光镜下观察吸烟对大鼠肺组织结构的影响，RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA在肺组织中的表达。结果随吸烟时间延长，肺泡腔不规则扩大，肺泡间隔破裂，有的肺泡融合成肺大泡，以吸烟6月组最为明显，肺组织结构表明COPD模型建立成功。RT-PCR结果表明，TGF-β1mRNA在正常肺组织中呈微弱表达，随吸烟时间的延长，TGF-β1mRNA表达增多，5月组表达最多。结论长期吸烟可引起气道壁炎细胞浸润及肺组织形态学变化，导致COPD发生。TGF-β1，表达随吸烟月份增加逐渐增多，肺组织结构破坏与TGF-β1表达有相关性，表明TGF-β1在COPD的发生和发展过程中起重要作用。
- 李若葆王箐李洪先黄琰王金平薄其付
- 关键词：肺疾病慢性阻塞性转化生长因子Β逆转录聚合酶链式反应
- IL-1β反义RNA表达载体的构建及对肝癌细胞中IL-1β水平的影响
- 2008年
- 目的构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察对肝癌细胞中IL-1β表达的阻断效果。方法提取细胞总RNA,RT-PCR扩增IL-1β1和IL-1β2,将其反向连接到肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,构建PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体,利用jetPEI转染H22肝癌细胞和YAC-1淋巴细胞,荧光显微镜下观察反义RNA载体的表达,RT-PCR方法分析H22细胞中IL-1β表达水平的变化。结果RT-PCR扩增到两条长度分别为264和284bp的片段,与IL-1β1和IL-1β2相符,将其反向与PafpIRES2-EGFP连接,经菌落PCR和DNA序列分析证实,获得了PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体。上述载体转染H22细胞后,荧光显微镜下可见细胞表达出明亮绿色荧光,而YAC-1细胞则未见荧光。RT-PCR分析证实转染反义RNA后H22细胞中IL-1β表达水平明显下降,尤以IL-1β2反义RNA的阻断效果更为显著。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌细胞特异性反义RNA表达载体PafpIRES2-antiIL-1β1,PafpIRES2-antiIL-1β2,两载体能有效地阻断肝癌细胞中IL-1β的表达。
- 梁淑娟吴慧娜肖伟玲牟东珍刘艳艳
- 关键词：IL-1Β反义RNA肝癌
