国家自然科学基金(81101411)
- 作品数：5 被引量：55H指数：4
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- 肝素通过TLR4减少脂多糖刺激的人内皮细胞IL-8表达被引量：3
- 2012年
- 目的:观察肝素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的人内皮细胞白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)水平的影响,并探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR 4)在其中的可能影响。方法:用LPS(10mg/L)刺激人肺微血管内皮细胞诱导损伤,肝素治疗组提前15 min分别加入100 U/L及103U/L普通肝素,正常对照组加入等量磷酸盐缓冲液。分别在刺激2、6、12 h收集细胞上清,采用酶联免疫吸附法测定上清中IL-8的浓度。在刺激2、6、12 h收集细胞提取RNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中IL-8、CD14及TLR4mRNA水平变化。结果:与正常对照组比较,LPS刺激组IL-8 mRNA水平增高,6 h达到高峰,其蛋白水平于12 h达到高峰。LPS刺激下TLR4 mRNA水平增高,6 h达到高峰,肝素降低其水平,差异有统计学意义(P<0.05)。未检测到CD14 mRNA的表达。结论:LPS刺激下人肺微血管内皮细胞IL-8表达增加。肝素可能通过调节TLR4降低IL-8的水平,从而发挥保护作用。
- 李旭李鑫马晓春
- 关键词：脂多糖类内皮细胞肝素
- 肝素对急性肺损伤大鼠基质金属蛋白酶2和9活性的影响被引量：13
- 2012年
- 目的探讨肝素对急性肺损伤（ALI）大鼠体内基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）蛋白及mRNA表达的影响。方法18只雄性Wistar大鼠，按随机数字表法分成3组，每组6只。经尾静脉注射脂多糖（LPS）6mg／kg复制ALI大鼠模型；肝素组在注射LPS前15min经尾静脉注射普通肝素100U／kg，对照组注射等量生理盐水。分别于制模后1、3、6h取股静脉血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中MMP-2、MMP-9蛋白表达；制模后6h处死动物，取左肺，应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT—PCR）检测肺组织中MMP-2及MMP-9的mRNA表达。结果与对照组比较，ALI组血清MMP-2（μg／L）、MMP-9（μg／L）蛋白表达增高，6h达到高峰（MMP-2：2．86±0．40比1．21±0．24，MMP-9：2．54±0．29比1．15±0．34，均P〈0．01）；应用肝素后在6h时MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低（MMP-2：1．92±0．31比2．86±0．40，MMP-9：1．82±0．26比2．54±0．29，均P〈0．05）。制模后6h，ALI组肺组织MMP-2、MMP-9的mRNA表达明显高于对照组（MMP-2mRNA：1．88±0．09比1．00-±0．10，MMP-9mRNA：3．15±0．47比1．00±0．17，均P〈0．01）；肝素组MMP-2、MMP-9的mRNA表达较ALI组明显降低（MMP-2mRNA：1．26±0．14比1．88±0．09，P〈0．01；MMP-9mRNA：2．06±0．68比3．15±0．47，P〈0．05），但仍高于对照组（均P〈0．05）。结论ALI大鼠体内MMP-2、MMP-9表达增加，肝素能够减少血清及肺组织中MMP-2、MMP-9的表达，从而减轻肺损伤。
- 李旭郑振马晓春
- 关键词：急性肺损伤普通肝素基质金属蛋白酶2基质金属蛋白酶9
- 肝素治疗脓毒症的系统评价被引量：25
- 2014年
- 目的 系统评价肝素治疗脓毒症患者的有效性及安全性.方法 通过计算机检索IM/MEDLINE、Cochrane Library、SCIE、CBM、中国知网CNKI、维普数据库、万方数据库,纳入肝素治疗脓毒症的随机对照临床试验（RCT）.检索时限为2000年1月至2012年6月.按照纳入标准及排除标准筛选文献、提取数据和质量评价,采用RevMan 5.1软件进行荟萃分析（Meta分析）.结果 共纳入17个RCT研究、1 167例脓毒症患者.Meta分析结果显示：与对照组相比,肝素能显著降低脓毒症患者28 d病死率[比值比（OR）=0.59,95％可信区间（95％CI）为0.45～ 0.77,P=0.000 1]；肝素并未导致凝血功能紊乱恶化,相反能够纠正脓毒症所致血小板计数（PLT）的降低[均数差（MD）=13.94,95％CI为10.15～17.72,P＜0.000 01],同时对活化部分凝血活酶时间（APTT）及凝血酶原时间（PT）均无明显影响（APTT：MD=-3.18,95％CI为-6.88 ～ 0.53,P=0.09;PT：MD=-0.68,95％CI为-1.48 ～0.12,P=0.09）；在出血发生率方面两组亦无明显差异.肝素组治疗后急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHEⅡ）评分明显低于对照组（MD=-2.58,95％CI为-3.29 ～-1.87,P＜0.000 01）,多器官功能障碍综合征（MODS）发生率明显低于对照组（OR=0.32,95％CI为0.17 ～0.61,P=0.000 6）.另外,肝素能明显缩短脓毒症患者的重症监护病房（ICU）住院时间（MD=-4.43,95％ CI为-6.79 ～-2.07,P=0.000 2）,而对总住院时间无明显影响.结论 肝素能改善脓毒症患者病情严重程度,降低病死率,且安全性及经济性较高.受纳入研究质量限制,所得结论尚需开展大样本、设计严格的RCT研究验证.
- 刘志永朱红马晓春
- 关键词：肝素脓毒症随机对照临床试验META分析
- 肝素通过Toll样受体4减少脂多糖刺激人内皮细胞粒细胞集落刺激因子的表达被引量：9
- 2015年
- 目的 观察肝素对脂多糖（LPS）刺激人内皮细胞粒细胞集落刺激因子（G—CSF）水平的影响，并探讨Toll样受体4（TLR4）在其过程中的可能作用。方法 体外培养人肺微血管内皮细胞（HPMEC），取传代培养至第3。5代细胞用于实验。实验1：将细胞分为对照组、LPS刺激组（LPS 10μg／mL）、LPS＋0．1U／mL肝素组和LPS＋1U／mL肝素组4组，肝素作用组于LPS刺激前15min加入相应剂量普通肝素，对照组加入与LPS等量的磷酸盐缓冲液（PBS）；于LPS刺激24h后收集细胞上清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素-6（IL-6）、G—CSF水平，以明确肝素对HPMEC的作用。实验2：另取细胞，分别于加入PBS或LPS前4h加入5μg／mL球形红细菌LPS（LPS—RS，一种TLR4拮抗剂）；于LPS刺激24h后收集细胞上清，测定IL-6、G—CSF水平，以明确TLR4在LPS诱导HPMEC损伤中的作用。实验3：另取细胞，分为对照组、LPS刺激组、LPS＋0．1U／mL肝素组和LPS＋1U／mL肝素组，处理方法同实验1；于LPS刺激1h后收集细胞，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）测定TLR4蛋白表达，以明确肝素对TLR4的作用。结果 ①与对照组比较，LPS刺激组IL-6及G—CSF水平明显增高[IL-6（ng／L）：655．9±58．3比75．5±18．2，G-CSF（ng／L）：388．7±36．2比35．3±12．6，均P〈0．05]；与LPS刺激组比较，0．1U／mL和lU／mL肝素预处理均可明显降低IL-6及G—CSF水-平（IL-6（ng／L）：518．2±64．6、489．1±75．6比655．9±58．3，G—CSF（ng／L）：298．8±41．0、273．4±33．2比388．7±36．2，均P〈O．05]，两个肝素组间无明显差异，但以1U／mL肝素作用较明显。②LPS—RS可明显抑制LPS诱导的IL-6、G-CSF水平增高[IL一6（n∥L）：139．1±37．6比655．9±58-3，G—CSF（ng／L）：73．7±19．7比388．7±36．2，均JP〈0．05]；而单独应用LPS—RS对细胞因子无明显影响[IL一6（ng／L
- 李旭刘一娜马晓春
- 关键词：脂多糖内皮细胞普通肝素TOLL样受体粒细胞集落刺激因子
- 肝素通过核转录因子-κB信号通路减少脂多糖刺激人内皮细胞趋化因子的表达被引量：8
- 2016年
- 目的观察肝素对脂多糖（LPS）刺激人内皮细胞分泌趋化因子水平的影响，探讨肝素对核转录因子--κB（NF-κB）信号通路的作用机制。方法体外培养人肺微血管内皮细胞株（HPMEC），取传代培养至第3—5代的细胞用于实验。将细胞分成对照组、LPS刺激组、1kU／L或10kU／L肝素＋LPS组及NF-κB抑制剂甲苯磺酰赖氨酸氯甲酮（TLCK）组（TLCK＋LPS组）。LPS刺激组加LPS10mg／L；不同剂量肝素预处理组于LPS刺激前15rain分别加入1ku／L或10kU／L的普通肝素；TLCK＋LPS组于LPS刺激前30min加用TLCK10μmol／L；对照组加入与LPS等量的磷酸盐缓冲液（PBS）。各组于LPS刺激后1h收集细胞，采用免疫荧光法观察NF-κB核移位情况，以明确肝素对NF-κB的活化作用；LPS刺激后3h和6h收集细胞上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素-8（IL-8）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的水平，以明确肝素对LPS刺激HPMEC产生趋化因子的影响以及对NF-κB信号通路的作用机制。结果①荧光显微镜下显示，对照组NF-κB大部分位于胞质中；LPS刺激组NF-κB由胞质向胞核转移明显增多；1kU／L和10ku／L肝素预处理均可明显抑制LPS诱导的NF-κB活化，以10kU／L肝素效果较好。②与对照组比较，LPS刺激后3h和6h细胞上清液中IL-8及MCP-1水平均明显增高[IL-8（ng／L）：3h为387．1±26．4比23．8±8．1，6h为645．5±69．6比125．7±18．7；MCP-1（ng／L）：3h为3654．9±467．9比721．6±61．3，6h为8178．5±792．6比1324．7±148．7，均P〈0．05]；与LPS刺激组比较，1kU／L和10ku，IJ肝素预处理均可明显降低IL-8及MCP-1水平[IL-8（ng／L）：3h为315．3±24．8、275．8±31．1比387．1±26．4，6h为557．8±43-3、496．9±38．7比645．5±69．6：MCP-1（ng／L）：3h为2924．1±267．9、2668．3±522．6比3654．9±467．9，6h为7121．7±557．2、6563．9±576．4比8178．5±792．6。均P〈O�
- 李旭马延全陈恬璐唐洁马晓春
- 关键词：内皮细胞普通肝素核转录因子-ΚB白细胞介素-8单核细胞趋化蛋白-1
