国家杰出青年科学基金(39825119) 作品数:31 被引量:86 H指数:6 相关作者: 金宁一 江文正 张应玖 李子健 张立树 更多>> 相关机构: 解放军军需大学 吉林大学 吉林大学第一医院 更多>> 发文基金: 国家杰出青年科学基金 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
HIV-2DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察 被引量:1 2002年 目的 用构建的HIV 2外膜蛋白gp1 0 5和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠 ,评价其免疫效果。方法 将HIV 2型gp1 0 5和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中 ,构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明 ,构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp1 0 5或 /和gag。构建的疫苗免疫小鼠后 ,用流式细胞仪测定CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞亚类数 ,并用HIV 2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV 2抗体水平。结果 构建了 3种HIV 2DNA疫苗pIRES1gag、pIRES1gp1 0 5和pIRES1gag gp1 0 5 ,转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白 ,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV 2特异性抗体 ,其中pIRES1gag gp1 0 5免疫鼠中 ,淋巴细胞增殖最显著 ,而pIRES1gp1 0 5免疫鼠中HIV 2特异性抗体水平最高。结论 构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应 ,其中pIRES1gp1 0 5诱导的体液免疫应答最显著 ,而pIRES1gag gp1 0 5诱导的细胞免疫响应最显著。 张应玖 金宁一 郭焱 江文正 李子健 沈家骢关键词:免疫应答 艾滋病 HIV-2 DNA疫苗 HIV-1重组核酸疫苗质粒诱导小鼠免疫应答的研究 被引量:2 2002年 目的 研究白细胞介素 6(IL 6)对人类免疫缺陷病毒 (HIV)gp1 2 0基因免疫小鼠的调节作用。方法 构建表达中国流行株HIV 1B亚型gp1 2 0基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV 1B亚型gp1 2 0基因与IL 6基因的核酸疫苗质粒pGPIL 6 ,检测其在哺乳动物细胞中的表达并将上述两种质粒注射Balb/c鼠 ,检测小鼠产生的CD4+ 和CD8+ T细胞数情况及诱导CTL反应能力。结果 以间接免疫荧光法 (IFA)检测到gp1 2 0在哺乳动物细胞中得到表达。pGPIL 6免疫鼠 ,小鼠产生的CD4+ 和CD8+ T细胞数及诱导产生CTL反应的能力明显高于单独注射gp1 2 0的小鼠。结论 协同应用IL 6基因可明显加强HIV 1gp1 2 0基因免疫效果 ,为中国流行株HIV 郭焱 金宁一 张应玖 郭志儒 夏志平关键词:人类免疫缺陷病毒 白细胞介素6 艾滋病毒 AIDS疫苗 HIV-1 Gag p^(17-)p^(24)在痘苗病毒中的表达及性质研究 2000年 研究了重组痘苗病毒表达的HIV1核心蛋白(Gag)p17p24蛋白的一些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、DotELISA及Westernblot结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了HIV1Gagp24及p17p24融合蛋白。电镜观察证实,Gagp24及p1724重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV1Gagp24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后,可见由于细胞凋亡而致的染色体DNA断裂“梯子”电泳图。 李体远 金宁一 王宏伟 郭志儒 方厚华 安汝国 殷震关键词:HIV-1 痘苗病毒 核心蛋白 疫苗 在重组痘苗病毒中共表达HIV-1env与hIL-6基因 2000年 本实验以 HIV- 1env与 h IL - 6基因在重组痘苗病毒中的共表达研究为目的 ,将痘苗病毒复制非必需区血凝素(HA )基因作为侧翼 ,把编码人白细胞介素 6 (h IL - 6 )的基因片段克隆到真核表达质粒 p J38env的下游 ,构建成含有 HIV- 1env与 h IL - 6两种外源基因的重组表达质粒 PJ38E- IL 6 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选 ,获得了重组痘苗病毒 v J38E- IL 6。经间接免疫荧光试验、Dot- EL ISA和 Western bolt等检测证明 ,重组病毒能同时表达 env蛋白和 IL - 6蛋白 ,表达产物的分子量分别为 98k Da、2 6 k 王玉红 金宁一 李体远 王宏伟 刘素寰 王弘郡 李萍 安汝国 殷震关键词:重组痘苗病毒 艾滋病 HIV-1_(CN)gp120与IL-6基因共表达质粒的构建及其免疫调节作用 被引量:8 2001年 目的 研究白细胞介素 6对人类免疫缺陷病毒 (HIV)gp1 2 0基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法 构建表达中国流行株HIV 1gp1 2 0基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV 1gp1 2 0基因与IL 6基因的核酸疫苗质粒pGPIL 6 ,并检测其在哺乳动物细胞中的表达。将上述两种质粒经胫前肌注射BALB/c鼠 ,检测gp1 2 0抗体的产生情况及ConA和LPS诱导的T细胞增殖能力。结果 以间接免疫荧光法 (IFA)检测到gp1 2 0在哺乳动物细胞中得到表达。pGPIL 6与pGP均可刺激小鼠产生抗gp1 2 0抗体 ,协同注射gp1 2 0和IL 6基因的小鼠产生的抗体滴度明显高于单独注射gp1 2 0的小鼠。pGPIL 6免疫鼠对ConA和LPS诱导的T细胞增殖能力明显高于单独注射gp1 2 0的小鼠。结论 协同应用IL 6基因可明显加强HIV 1gp1 2 0基因的免疫反应 ,为中国流行株HIV 1核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。 郭焱 金宁一 张应玖 夏志平 王宏伟 郭志儒 殷震关键词:人类免疫缺陷病毒 HIV-1 env基因在重组鸡痘病毒中的表达 被引量:8 1999年 在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HIV 1gp12 0基因 ,通过与野生型鸡痘病毒的同源重组 ,X gal显色挑斑 ,获得 2株重组病毒vUTA - 2f- 16LE和vUTA - 2f- 16LG。经Dot-ELISA、免疫荧光试验、SDS -PAGE和Westernblot检测表明 ,2株重组病毒均能表达gp16 0和gp12 0 ,相对分子质量分别为 16 0 0 0 0和 12 0 0 0 0。经小鼠免疫试验其血清中抗gp12 0抗体A值和脾脏CD4+ /CD8+ T淋巴细胞比值均高于对照组 (P <0 .0 1) ,说明由重组病毒表达的Env蛋白和Gp12 0蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。 金宁一 方厚华 郭志儒 罗坤 古长庆 殷震 邵一鸣 王虹关键词:HIV-1 ENV基因 基因表达 FPV Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定 被引量:4 2003年 目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV 江文正 金宁一 韩文瑜关键词:嵌合基因 核酸疫苗 HIV-1 gag-gp120嵌合基因重组杆状病毒载体的构建 被引量:1 2001年 目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基因重组正确 ,电镜显示重组杆状病毒大量扩增。结论 :含有B亚型 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体构建成功 ,为进一步研究Gag- gp12 0嵌合蛋白的表达及其生物学活性奠定了基础。 张东威 金宁一 王宏伟 张应玖 王莉馨 罗坤 李萍 于洪臣 殷震关键词:嵌合基因 基因重组 杆状病毒 表达HIV-1结构蛋白靶细胞的制备及鉴定 被引量:8 2003年 江文正 金宁一关键词:HIV-1 结构蛋白 靶细胞 共表达中国株HIV-1gp120与hIL-6的重组鸡痘病毒研究 被引量:2 2003年 目的 构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利用脂质体法将重组质粒和鸡痘病毒2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞。经BUdR加压筛选 3次后 ,重组病毒分别用PCR、间接免疫荧光试验和Westernblot进行鉴定 ,并进行小鼠免疫研究。结果 重组病毒基因组中可扩增出 1.4kb大小片段 ,重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质 ,表达产物的Westernblot分析表明重组病毒可表达gp12 0和hIL 6蛋白。重组病毒可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答。结论 成功构建了共表达中国株HIV 1gp12 0与hIL 6的重组鸡痘病毒 ,为研制HIV 1基因工程活载体疫苗提供有益的资料。 江文正 金宁一 李子健 张立树 王宏 金洪涛关键词:重组鸡痘病毒