国家自然科学基金(30972445)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
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- 亚硫酸钠对HL-7702细胞极低密度脂蛋白组装分泌和内质网应激的影响
- 2016年
- 目的:研究亚硫酸钠(Na_2SO_3)是否通过抑制极低密度脂蛋白(VLDL)组装分泌和诱导内质网应激引起肝细胞脂肪变性。方法:分别经不同浓度(0.1、0.5、2.5、10 mmol/L)Na_2SO_3染毒人正常HL-7702肝细胞24和48 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和Western blot测定细胞外VLDL水平;采用荧光定量PCR法(qPCR)检测VLDL组装相关因子微粒体载脂蛋白B100(apoB100)、甘油三酯转移蛋白(MTP)、二脂酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)、甘油三酯水解酶(TGH)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测内质网应激相关重链结合蛋白(BiP)和钙连蛋白(Calnexin)的表达水平。结果:ELISA和Western blot结果显示染毒24 h后,与阴性对照组相比,各Na_2SO_3处理组VLDL含量均明显增加,差异均有统计学意义(P均<0.05);而作用48 h后,各Na_2SO_3处理组VLDL含量与阴性对照组相比均无明显变化(P均>0.05)。qPCR检测结果显示,与阴性对照组相比,染毒24 h,10mmol/L Na_2SO_3组肝细胞内apoB100mRNA表达升高(P<0.05);2.5和10 mmol/L Na_2SO_3可使肝细胞内TGH mRNA表达升高(P<0.05);染毒48 h,0.5和2.5 mmol/L Na_2SO_3引起肝细胞内TGH mRNA表达量明显升高(P<0.05)。Western blot结果显示染毒24 h和48h后,不同浓度Na_2SO_3对细胞内BiP蛋白表达水平均无明显影响,但可以明显增加Calnexin蛋白表达(P<0.05)。结论:Na_2SO_3不能抑制VLDL组装分泌,但可能对肝细胞糖蛋白的正确折叠有一定干扰作用。
- 张艳白剑英雷佩玉王幼萍赵春燕梁瑞峰
- 关键词：亚硫酸钠内质网应激肝细胞
- 食品添加剂亚硫酸钠对肝细胞蛋白合成功能的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨食品添加剂亚硫酸钠对肝脏蛋白合成功能的可能影响。方法以不同浓度的亚硫酸钠(Na2SO3)作用于正常人二倍体肝细胞株HL-7702(简称L-02)细胞,终浓度分别为0.039、0.156、0.625和2.5 mmol/L,并设阴性对照组和阳性对照组(体积分数为0.3%的乙醇)。采用生化分析法检测不同接触时间后各染毒组肝细胞培养上清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总蛋白和白蛋白含量。结果①Na2SO3染毒24 h,随着染毒浓度的增加,各组肝细胞培养上清中AST活性逐渐升高,0.625和2.5 mmol/L组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。而在染毒48和72 h后,各染毒组与对照组比较,无统计学差异;当作用24和48 h后,随Na2 SO3浓度增加,各组肝细胞培养上清中ALT活性逐渐升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);染毒72 h后,各染毒组与对照组之间的ALT活性无差异。②Na2SO3染毒24、48和72 h后,各染毒组肝细胞培养上清中白蛋白和总蛋白的含量与阴性对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论亚硫酸钠染毒不同时间后可能对肝细胞膜结构造成一定影响使培养上清中转氨酶活性明显增加,但对肝细胞的蛋白合成功能无明显影响。
- 白剑英王明衡梁瑞峰站立涛李燕张志红
- 关键词：亚硫酸钠HL-7702ASTALT白蛋白总蛋白
- 亚硫酸钠和甲醛联合染毒对人正常二倍体肝细胞活力及p53蛋白表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究亚硫酸钠与甲醛联合染毒对人正常二倍体肝细胞株(HL-7702细胞)的毒性作用及对肝细胞内抑癌基因p53蛋白表达的影响。方法分别加入终浓度为0(阴性对照),0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠,0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L甲醛以及0.1 mmol/L甲醛+0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠进行染毒24 h,采用MTT试验检测肝细胞的活性。分别加入终浓度为0(阴性对照)、0.039、0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠,0.02、0.1、0.5、2.5、12.5mmol/L甲醛,10 mmol/L甲醛+0.039、0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠以及0.1 mmol/L甲醛+0.039、0.156、0.625、2.5mmol/L亚硫酸钠进行染毒24 h,采用蛋白杂交法(Western blot)检测肝细胞内p53蛋白的表达水平。结果与阴性对照组比较,2.5 mmol/L亚硫酸钠及0.1～12.5 mmol/L甲醛单独染毒肝细胞的活性均明显降低(P<0.05),且肝细胞活性均随着染毒浓度的升高而下降;0.1 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞的活性均高于0.1 mmol/L甲醛单独染毒组(P<0.05),且0.1 mmol/L甲醛+2.5 mmol/L亚硫酸钠联合染毒组肝细胞活性也明显高于2.5 mmol/L亚硫酸钠单独染毒组(P<0.05)。各浓度亚硫酸钠单独染毒对肝细胞内p53表达水平无明显影响,而0.5～12.5 mmol/L甲醛单独染毒可引起肝细胞内p53表达水平明显下降(P<0.05);10 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞内p53蛋白表达水平均低于阴性对照组和10 mmol/L甲醛单独染毒组及相同剂量亚硫酸钠单独染毒组(P<0.05);而0.1 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞内p53蛋白的表达水平与阴性对照组比较,均无明显变化。结论亚硫酸钠和甲醛联合染毒对肝细胞活性的抑制作用有所减弱。较高浓度(10 mmol/L)甲醛可抑制肝细胞内p53蛋白的表达水平,亚硫酸钠可加强这种抑制作用。
- 雷佩玉王晓君白剑英王静邢锦梁瑞峰王婕
- 关键词：亚硫酸钠甲醛P53蛋白
- 邻苯二甲酸单乙基己基酯对HepG2细胞胆固醇代谢影响
- 2021年
- 目的探讨邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对肝细胞胆固醇代谢的影响,为了解MEHP的肝脏毒性作用机制提供依据。方法分别以不同浓度MEHP、1 mmol/L油酸(OA)及完全培养基(阴性对照组)处理HepG2细胞24和48 h;用CHOD-PAP-POD法测定HepG2细胞内和培养上清中总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量;采用免疫细胞化学法检测细胞核内固醇调节元件结合蛋白2(nSREBP-2)表达量;采用Western blot检测胆固醇代谢相关蛋白羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)和胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)表达水平。结果MEHP染毒24 h,与阴性对照组比较,100μmol/L MEHP组细胞内FC含量[(0.508±0.069)mmol/g]明显高于对照组(P<0.05);与阴性对照组比较,各MEHP剂量组HepG2细胞中表征nSREBP-2蛋白表达水平的绿色荧光强度明显增加,阳性对照组HepG2细胞核内绿色荧光强度也明显增加。MEHP染毒48 h,细胞内FC含量恢复至正常水平(P>0.05);免疫细胞化学结果显示,与阴性对照组比较,各MEHP剂量组HepG2细胞中nSREBP-2、HMGCR蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论MEHP对肝细胞胆固醇代谢具有一定的干扰作用,该作用是可逆的。
- 谭清姜雪霞贺真李耀福杨守林李丹白剑英
- 关键词：HEPG2细胞胆固醇代谢
- 亚硫酸钠引起肝细胞内活性氧增高对p53蛋白表达的影响
- 2012年
- 目的：探讨亚硫酸钠引起肝细胞内活性氧水平变化与p53蛋白表达之间的关系。方法：将人正常二倍体肝细胞株HL-7702培养于含10％小牛血清的DMEM培养基中，待生长至适宜密度时用不同浓度亚硫酸钠染毒4h。采用Fluo-3AM钙离子荧光指示剂法测定肝细胞内Ca^2＋。水平变化，二氯荧光黄双乙酸酯荧光标记法测定肝细胞内活性氧水平，蛋白杂交法和免疫细胞化学法检测肝细胞内p53蛋白表达情况，RT-PCR法检测肝细胞内p53基因mRNA表达水平的变化。结果：一定浓度的亚硫酸钠可引起肝细胞内Ca^2＋水平增加，并伴随着活性氧水平增加和肝细胞内p53蛋白表达水平明显增加，但p53基因mRNA表达水平无明显变化。结论：亚硫酸钠可通过增加肝细胞内Ca^2＋水平引起肝细胞内活性氧水平和p53蛋白水平增加，这种影响可能发生在蛋白质翻译或翻译后水平。
- 雷佩玉刘鑫赵春燕仪慧兰王幼萍梁瑞峰白剑英
- 关键词：亚硫酸钠钙离子浓度活性氧P53
- 亚硫酸钠对HepG2细胞毒性的实验研究被引量：9
- 2012年
- 目的观察食品添加剂亚硫酸钠对人肝肿瘤细胞(HepG2)的细胞毒性作用和脂肪变作用。方法向HepG2细胞悬液中分别加入终浓度为0(阴性对照)～10 mmol/L亚硫酸钠溶液染毒24、48和72 h,并设空白对照(无细胞)组和阳性对照组(含1%Tritonx-100的DMEM),每组6个复孔。采用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定法检测肝细胞膜的通透性变化,采用CCK-8法检测肝细胞的活性改变,采用油红O染色法观察肝细胞内脂肪沉积情况。结果与阴性对照组相比,仅10 mmol/L亚硫酸钠染毒24 h后HepG2细胞培养上清中LDH活力的释放率增加(P<0.05);而各剂量亚硫酸钠染毒48和72 h后HepG2细胞培养上清中LDH活力的释放率无显著变化。与阴性对照组相比,各剂量亚硫酸钠染毒24、48、72 h后(除0.039 mmol/L染毒72 h外)HepG2细胞的存活率均显著下降(P<0.05),且细胞存活率随着亚硫酸钠染毒剂量的升高而降低。染毒24、48 h后,部分亚硫酸钠染毒组HepG2细胞内出现了极少量的脂滴,而阴性对照组却未发现;染毒72 h后,10 mmol/L亚硫酸钠染毒组出现明显脂滴。结论一定剂量的亚硫酸钠染毒可增加HepG2细胞膜的通透性,对肝细胞活性有明显的抑制作用,并且可引起肝细胞内甘油三酯的蓄积。
- 赵春燕原福胜白剑英雷佩玉任玉龙
- 关键词：亚硫酸钠乳酸脱氢酶甘油三酯
- 亚硫酸钠对人正常二倍体肝细胞内二酰甘油酰基转移酶1和载脂蛋白E mRNA和蛋白表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的通过研究亚硫酸钠对人正常二倍体肝(HL-7702)细胞内二酰甘油酰基转移酶1(DGAT1)和载脂蛋白E(apoE)mRNA和蛋白表达的影响,探讨亚硫酸钠诱发肝细胞脂肪积累效应及作用途径。方法将处于对数生长期的HL-7702细胞株分别暴露于终浓度为0(阴性对照)、10、2.5、0.5、0.1 mmol/L的亚硫酸钠溶液,并设立阳性对照(1.0 mmol/L油酸)组。分别于染毒24、48 h时,采用油红O染色法观察肝细胞内脂滴沉积,采用免疫沉淀和Western Blot法检测细胞内apoE和DGAT1蛋白的表达水平,采用qRT-PCR法检测肝细胞内apoE和DGAT1 mRNA的表达水平。结果与阴性对照组比较,仅10 mmol/L亚硫酸钠染毒24 h时HL-7702肝细胞内DGAT1 mRNA表达水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,染毒24h、48 h时,10 mmol/L亚硫酸钠染毒组HL-7702肝细胞内DGAT1蛋白表达水平以及各浓度亚硫酸钠染毒组HL-7702肝细胞内apoE蛋白表达水平均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性对照组可见明显的脂滴沉积,但亚硫酸钠染毒组均未见明显脂滴。结论一定剂量的亚硫酸钠可引起肝细胞内DGAT1、apoE蛋白表达增高,导致肝细胞内甘油三酯分泌增加,从而引起肝细胞的脂肪蓄积。
- 王幼萍白剑英雷佩玉闫丹丹梁瑞峰赵五红
- 关键词：亚硫酸钠载脂蛋白E免疫沉淀
- 亚硫酸钠对章氏肝细胞TG含量和VLDL分泌的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察食品添加剂亚硫酸钠(Na2SO3)对章氏肝(Chang's liver)细胞甘油三酯(TG)含量和极低密度脂蛋白(VLDL)分泌的影响,进一步探讨其致肝损伤作用的机制。方法经不同浓度的Na2SO3染毒24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性;油红O染色法观察肝细胞脂肪变性;甘油三酯GPO-POD酶法测定试剂盒检测染毒24 h后细胞内甘油三酯(TG)含量;Western Blotting检测细胞外培养上清中VLDL的分泌。结果 (1)Na2SO3染毒组能够降低细胞存活率,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)油红O染色结果显示,染毒24 h后,10、2.5和0.5 mmol/LNa2SO3处理组细胞内均未出现红色脂滴,即未见细胞出现脂肪变性;(3)染毒24 h后,10 mmol/L Na2SO3处理组细胞内TG含量明显增加,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);(4)染毒24 h后,Na2SO3各处理组胞外培养上清中VLDL水平与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Na2SO3染毒24 h虽不能诱导肝细胞出现脂肪变性,但高浓度可引起肝细胞中TG含量增加。
- 雷佩玉白剑英赵春燕王幼萍梁瑞峰
- 关键词：亚硫酸钠
