国家杰出青年科学基金(39825123)
- 作品数：10 被引量：42H指数：4
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- 腺病毒介导的人p27kip1基因高表达对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用被引量：8
- 2000年
- 潘晓明章卫平吴宗贵曹雪涛
- 关键词：P27KIPL基因表达血管平滑肌细胞
- 人p27kip1重组腺病毒载体的构建及其介导的p27kip1表达被引量：5
- 2000年
- 目的 研究外源性p2 7kip1基因对细胞周期及细胞增殖的影响。方法 构建CMV启动子转录调控的含人p2 7kip1cDNA的E1区替代的腺病毒载体pAxlcw .CIhp2 7kip1,与经EcoT2 2 1酶切的Ad5腺病毒DNA -末端肽复合物共转染 2 93细胞 ,制备p2 7kip1重组腺病毒 ,在体外转染HeLa细胞 ,Westernblot、FACS及MTT检测分析外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达 ,以及对细胞周期及细胞增殖的影响。结果 获得含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 ,滴度为 1.7× 10 9pfu/ml。体外转染HeLa细胞2 4h后 ,p2 7kip1蛋白在p2 7kip1转染后的HeLa细胞中高表达 ;FACS检测表明 ,p2 7kip1和LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 ,经 10 %血清刺激后处于G1期的细胞分别为 89.93%和 5 9.84% ;MTT法检测表明 ,人p2 7kip1重组腺病毒转染后的HeLa细胞经 2 0 %血清刺激后 ,48及 72h的A值均低于LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 (P <0 .0 1)。结论 本研究中所制备的p2 7kip1重组腺病毒能有效介导外源性p2 7kip1基因在体外转染HeLa细胞并高表达p2 7kip1,抑制细胞由G1期向S期过渡 ,从而抑制细胞增殖 ,为进一步研究p2 7kip1基因治疗奠定了基础。
- 潘晓明章卫平吴宗贵曹雪涛
- 关键词：P27KIP1基因基因治疗腺病毒载体
- 吡喹酮联合IL-18基因治疗血吸虫感染小鼠对免疫功能的影响被引量：16
- 2001年
- 目的 探讨白细胞介素 18(IL 18)对吡喹酮治疗后的血吸虫感染小鼠免疫功能的影响及其对虫卵肉芽肿的作用。方法 采用ELISA方法和图像分析技术 ,分析吡喹酮治疗后血吸虫感染小鼠血清IL 18、γ 干扰素 (IFN γ)、IL 4、转化生长因子 β1(TGF β1)的水平以及虫卵肉芽肿面积和羟脯氨酸水平 ,在感染后 6周 ,将小鼠IL 18重组腺病毒转染的肝细胞经脾移植到吡喹酮治疗后的感染小鼠 ,探讨IL 18对小鼠免疫功能的影响及对虫卵肉芽肿的作用。结果 吡喹酮治疗后小鼠血清IL 18、IFN γ水平明显下降 ,IL 4、TGF β1水平虽有所降低 ,但仍维持在较高水平 ;同时可见 ,虫卵肉芽肿面积和肝脏羟脯氨酸含量无明显降低 ,与同期感染组比较差异均无显著性。IL 18基因修饰的肝细胞经脾移植后能稳定表达IL 18,显著升高IFN γ水平 ,明显降低IL 4、TGF β1水平 ,减轻虫卵肉芽肿和肝纤维化程度。结论 IL
- 张立煌姚航平曹雪涛何龙冷建杭李敏伟
- 关键词：日本血吸虫病吡喹酮虫卵肉芽肿白细胞介素18基因治疗
- 重组人白细胞介素17的原核表达、纯化及鉴定被引量：2
- 1999年
- 目的:优化重组人白细胞介素17的原核表达条件,选择不同的路线进行分离纯化.方法:利用SDS-PAGE方法分析比较重组人白细胞介素17在不同培养基、不同诱导时间的表达量,选择最适条件,大量扩增后,分离出包涵体,分别采用盐酸胍溶解法和SDS溶解法两条纯化路线进行进一步的分离和纯化,并对所纯化产物进行常规分析鉴定.结果:采用上述两种不同的溶解包涵体方法,通过后续复性及纯化,均可得到高纯度具有生物学活性的重组IL-17.采用SDS溶解法具有较高的得率,采用盐酸胍溶解法纯化得率较低,得产物的生物学活性较高.结论:通过表达及纯化,得到了大量高纯度具有活性的rhIL-17,为进一步研究IL-17的体内外生物学效应打下了基础.
- 王永红陈国友曹雪涛胡晋红原永芳苏晴
- 关键词：原核表达纯化IL-17
- rhIL-17对小鼠造血前体细胞和人脐血CD34^+干细胞分化发育的影响被引量：1
- 1999年
- 目的:探讨重组人白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)对小鼠骨髓造血前体细胞和人脐血来源的CD34^+干细胞生长发育的影响.方法:采用常规方法采集小鼠造血前体细胞;采用Mini-MACS分离技术,从正常人脐血分离人CD34^+干细胞.体外加入IL-17和/或GM-CSF、IL-4培养分离的前体细胞,应用流式细胞仪检测其表型,采用ELISA法检测了其分泌的IL-12水平,通过[~3H]-TdR掺入法测定其刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力.结果:IL-17促进了小鼠骨髓来源的未成熟DC表达Ia,B7-2等免疫分子,促使其分泌较高水平的IL-12,该细胞也能刺激同种异体T细胞有效增殖,表现出了成熟DC的特征.IL-17单独培养9d促使人脐血CD34^+干细胞扩增了2倍,部分细胞高表达CD1a及B7-2,低表达HLA-DR,未检测到CD83的表达.该细胞能促使同种异体T细胞增殖,但作用较弱;而rhIL-17与GM-CSF联合培养后扩增了14倍,培养细胞中CD1a、B7-2阳性细胞的比例明显升高,且此细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力较强.结论:IL-17体外可促进小鼠骨髓造血前体细胞来源的DC成熟;与GM-CSF联合培养既能促进CD34^+干细胞增殖,又能使之获得DC特征,初步提示IL-17与GM-CSF联合作用可促进CD34^+干细胞向DC分化.
- 王永红张明徽陈国友于益芝胡晋红曹雪涛
- 关键词：白细胞介素17造血前体细胞CD34^+分化
- 重组腺病毒介导的人p27kip1基因高表达对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞迁移的影响被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨重组腺病毒介导的p2 7kip1基因及其蛋白产物高表达对血管平滑肌细胞 (VSMCs)迁移的抑制作用。方法 将含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 (Adhp2 7kip1)及含 β 半乳糖苷酶基因的重组腺病毒 (AdLacZ)在体外转染原代大鼠主动脉VSMCs,用Westernblot及Boyden趋化小室检测外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达及对VSM Cs迁移的影响。结果 转染后 2 4h ,Adhp2 7kip1转染的VSMCs内p2 7kip1蛋白高表达 ,而AdLacZ转染的VSMCs内仅显示极低水平的内源性p2 7kip1蛋白表达 ;Boyden趋化小室检测显示未转染的VSMCs、AdLacZ及Adhp2 7kip1转染的VSMCs血清诱导后的迁移细胞数分别为 139± 2 6、10 6± 16及 6 8± 14。结论 外源性p2
- 吴宗贵潘晓明章卫平曹雪涛
- 关键词：体外培养血管平滑肌重组腺病毒
- 低剂量环磷酰胺增强MHCⅠ类限制性肿瘤抗原多肽冲击致敏的树突状细胞的抗肿瘤转移效果被引量：1
- 1999年
- 目的:研究低剂量环磷酸胺(Cy)联合MHC Ⅰ类限制性肿瘤抗原多肽Mutl致敏、白细胞介素2(IL-2)基因修饰的树突状细胞(DCs)对转移性肺癌小鼠的治疗作用及其免疫学机理.方法:制备小鼠骨髓来源的DCs,用转移性Lewis肺癌特异性多肽Mutl预激经IL-2基因修饰的DCs联合低剂量Cy治疗转移性肺癌小鼠.通过FACS分析其脾细胞内T淋巴细胞比例的变化,~51Cr释放法检测CTL和NK细胞杀伤活性.结果:肿瘤抗原多肽致敏、IL-2基因修饰的DCs与小剂量Cy联合后,能比单用DCs更有效地治疗转移性肺癌,小鼠脾细胞中CD8^+T细胞和NK1.1^+细胞明显比例升高,联合治疗组诱导出的CTL杀伤活性最高.结论:以肿瘤抗原多肽冲击致敏的IL-2基因修饰的DCs联合小剂量Cy能更有效地促进荷瘤宿主免疫应答,具有显著地体内抑制肺癌转移的效果.
- 孙黎飞曹雪涛张明徽章卫平黄欣田野苹于益芝
- 关键词：树突状细胞环磷酰胺基因疗法
- 腺病毒介导的人p27kip1基因转染对球囊损伤后兔颈动脉新生内膜增生的抑制作用被引量：3
- 2002年
- 目的 研究腺病毒介导的p27kip1基因及其蛋白产物高表达对球囊损伤后兔颈动脉新生内膜增生的抑制作用。方法 建立兔颈动脉球囊损伤模型,将LacZ重组腺病毒（AdLacZ）和人p27kipl重组腺病毒（Adhp27kipl）在体内分别转染损伤动脉节段,以Western blot、x-gal染色、HE染色、兔疫组化及计算机图像处理方法观察转染动脉节段中外源性p27kipl蛋白表达及其对新生内膜增生的影响。结果 与AdLacZ转染组及未转染组比较,Adhp27kip1转染的动脉节段内p27kip1蛋白呈高表达,表达高峰在7～14 d,持续4周以上;转染4周后未转染组、AdLacZ转染组及Adhp27kip1转染组的新生内膜面积分别为1.106mm2、0.988mm2及0.278mm2;管腔狭窄率分别为87.07％、65.40％及32.14％。结论 外源性p27kip1基因及其蛋白产物在损伤动脉节段内高表达可显著抑制新生内膜增生及管腔狭窄。
- 潘晓明吴宗贵章卫平金海曹雪涛
- 关键词：P27KIPL血管损伤
- 银屑病患者单核细胞诱生的郎汉斯细胞特征分析被引量：4
- 2000年
- 目的 从郎汉斯细胞 (LC)的分化发育过程探讨其在银屑病患者体内异常的原因。方法 将外周血单核细胞经GM CSF +IL 4+TGF β1联合培养 5d ,分别通过流式细胞仪、混合淋巴细胞反应分析其表型及其抗原提呈功能 ,并通过ELISA法检测其分泌功能。结果 银屑病患者单核细胞经GM CSF +IL 4+TGF β1联合培养后能分化发育为具有LC相对特征性抗原标志CDla的细胞 ,其比例、表型特征、胞内合成及分泌IL 1 2的能力、刺激T淋巴细胞的活性等与健康对照组相比差异无显著性。结论 银屑病患者LC的异常并非发生于其前体细胞 。
- 唐玲郑茂荣顾军方跃明范青源王玉娥于益芝曹雪涛
- 关键词：银屑病发病机制分化发育
- 一种核不均一核糖核蛋白M4缺失突变体的克隆
- 2000年
- 利用减法杂交技术筛选人树突状细胞（ＤＣ）经抗原刺激后特异表达的基因，成 功地获得了十多个特异表达基因，其中包括一种核不均一核糖核蛋白（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｎＲＮＰ）Ｍ４第１５９～１９７位氨基酸缺失的新基因．对部分肿瘤细 胞系及原代培养细胞进行ＲＴ－ＰＣＲ检测发现，它的表达与ｈｎＲＮＰ Ｍ４基因是一致的，同 时证实了该基因表达于经ＫＬＨ刺激后的ＤＣ而非正常的ＤＣ．组织分布分析显示，该基 因高表达于脾脏、外用血淋巴细胞、肺和肝脏．另外，通过多种细胞因子刺激的骨髓基 质细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ， ＢＭＳＣ）也表达这两种分子，但ＴＮＦ－α处理后 ｍＲＮＡ的表达消失．这一发现增加了对ＤＣ在抗原提呈过程中基因表达变化的认识，为 ｈｎＲＮＰ家族增添了新成员．
- 黄欣赵忠良袁正隆张明徽朱学军陈国友曹雪涛
- 关键词：基因克隆免疫学
