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人骨髓间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究被引量：30: 2003年; 目的　分离纯化人骨髓间质干细胞 (MSC) ,研究其基本生物学特性。方法　用比密 1 .0 73Ficoll淋巴细胞分离液分离成人骨髓MSC ,体外扩增 ,观察细胞生长特性 ,流式细胞仪检测骨髓MSC表面抗原表达及细胞周期 ,染色体技术分析骨髓MSC遗传特性。结果　成人骨髓MSC培养 3d后有散在呈针尖状的贴壁细胞 ,7～ 1 0d后形成集落或融合呈纤维状 ;体外扩增原代可获得 (4～ 6 )× 1 0 5个细胞 ,1 0代可获得 (1～ 5 )× 1 0 1 0 个细胞 ,5～ 6代以后的细胞增殖能力下降 ;流式细胞仪检测结果显示 :CD1 3、CD2 9、CD4 4、CD71表达阳性 ,CD3、CDl4、CD33、CD34、CD38、CD4 5、HLA DR不表达 ;染色体核型正常 ;细胞周期分析显示 ,G0 /G1 期 :79.4 8% ,G2 /M期 :6 .1 0 % ,S期 :1 4 .4 2 %。结论　人骨髓MSC体外具有较好的增殖更新能力 ,3～; 许文荣张锡然钱晖朱伟孙晓春胡嘉波顾可梁; 关键词：人骨髓间质干细胞纯化生物学特性

再生障碍性贫血患者骨髓间质干细胞培养及临床意义被引量：4: 2003年; 目的:建立骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外培养方法,观察再生障碍性贫血患者(简称再障)MSCs生长状况及临床意义。方法:采集对照组及再障患者骨髓,分离单个核细胞2×105/ml接种于培养皿中,体外培养MSCs,7天后计数MSCs集落数,待MSCs形成融合层后,观察其对造血的支持作用。结果:MSC细胞形态呈长梭形或多边形,体外培养7天后对照组MSCs集落数为(66.96±17.7)/(2×105)单个核细胞,再障患者MSCs集落数为(23±21)/(2×105)单个核细胞,两者有显著性差异(P<0.01)。再障患者骨髓MSCs融合层对健康人骨髓GM-CFU集落生长的刺激作用较健康人骨髓MSC融合层作用明显减弱(P<0.01)。结论:骨髓间质干细胞体外培养可为再障的诊断、疗效观察及发病机制探讨提供一定实验依据。; 朱伟许文荣谷俊侠孙晓春金蓉珍; 关键词：间质干细胞再生障碍性贫血细胞培养

胎儿骨髓间质干细胞体外诱导为神经细胞的初步实验研究被引量：18: 2004年; 目的 :体外定向诱导胎儿骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经细胞。方法 :采用Ficoll淋巴细胞分离液分离MSC ,体外扩增、传代 ,采用 β 巯基乙醇等诱导剂诱导MSC分化为神经细胞 ,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NF2 0 0 )、神经元烯醇化酶 (NSE)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) ,并且用RT PCR鉴定NF2 0 0、NSE和GFAP的mR NA表达情况。结果 :胎儿骨髓MSC在体外扩增第 5代以后 ,经诱导后 ,形态学上可呈现神经细胞形态特征 ;免疫组化显示诱导出的神经细胞NF2 0 0、NSE和GFAP均有阳性表达 ;RT PCR也显示诱导后表达量明显增加。结论 :胎儿骨髓MSC在体外可以分化为神经细胞。; 孙晓春许文荣姚堃胡嘉波钱晖张锡然; 关键词：骨髓间质干细胞神经细胞 RT-PCR

骨髓间质干细胞下调免疫反应的实验研究被引量：6: 2006年; 目的:研究骨髓间质干细胞(M esenchym al stem cells,MSCs)下调免疫反应的作用及其机制。方法:采用流式细胞分析(FCM)鉴定MSCs的纯度,用3H-TdR掺入法测定MSCs对ConA刺激的淋巴细胞增殖的影响,利用RT-PCR和Real-tim e PCR检测TGF-β1、IL-8、IL-10的基因表达,同时进行皮肤移植模型研究。结果:MSCs对ConA刺激的淋巴细胞增殖的影响与MSCs和淋巴细胞的比值有关。RT-PCR结果显示MSCs对淋巴细胞分泌TGF-β1无显著性影响,而Real-tim e PCR的结果显示MSCs促进淋巴细胞分泌IL-10,减少淋巴细胞分泌IL-8。皮肤移植实验显示MSCs能延长异种移植皮肤的存活时间。结论:MSCs能下调免疫反应和抑制皮肤移植排斥反应,其可能的机制是通过促进淋巴细胞分泌IL-10以及减少淋巴细胞分泌IL-8来发挥作用。; 毛飞许文荣许化溪朱伟韩崇旭胡嘉波孙晓春钱晖; 关键词：骨髓间质干细胞免疫调节淋巴细胞

骨髓间质干细胞体外分化为成骨细胞的实验研究被引量：20: 2003年; 建立猪骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)体外分离培养方法。对猪MSCs体外分化为成骨细胞的能力进行研究。抽取猪骨髓 ,体外培养MSCs。取第二代MSCs ,以含有不同浓度的抗坏血酸、β -磷酸甘油、地塞米松及碱性成纤维细胞生长因子等条件培养基进行成骨细胞诱导分化。通过细胞形态变化 ,碱性磷酸酶染色及钙盐沉积对成骨细胞进行鉴定。结果表明MSC细胞形态由长梭形向多边形转变 ,ALP染色阳性 ,VonKossa染色阳性 ,经体外诱导分化后呈典型的成骨细胞样改变。猪骨髓MSCs可在体外长期、稳定培养 ,具有向成骨细胞分化的潜能 ,可以为骨组织工程研究提供较理想的细胞来源和动物模型。; 朱伟许文荣孙晓春连锋; 关键词：间质干细胞体外分化骨细胞

胎儿骨髓间质干细胞与细胞因子对脐血CD34^+细胞扩增作用被引量：3: 2004年; 目的　探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+ 细胞体外扩增的造血支持作用。方法　体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞 ;Mini MACS免疫磁珠分选 3份脐血CD34+ 细胞 ;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+ 细胞共培养体系 :第 1组为单独CD34+细胞培养 ,第 2组为胎儿骨髓间质干细胞 +CD34+ 细胞共培养 ,第 3组为细胞因子 (干细胞因子 ,白细胞介素 3,Flt3配体 ,血小板生成素 ) +CD34+ 细胞共培养 ,第 4组为胎儿骨髓间质干细胞 +细胞因子 +CD34+ 细胞共培养。用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+ 细胞。结果　胎儿骨髓间质干细胞表达CD2 9,CD4 4 ;免疫磁珠分选CD34+ 细胞的平均纯度为 97.4 % ;胎儿骨髓间质干细胞 +CD34+ 细胞共培养 2 8d ,有核CD34+ 细胞仍占有核细胞的 6 .4 3% ;CD34+ 细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养 2 8d ,有核细胞总数、CD34+ 细胞数分别被扩增 1.6 5× 10 5倍、788倍。结论　胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干 /祖细胞。; 胡嘉波许文荣毛飞朱伟孙晓春钱晖许化溪; 关键词：CD34^+细胞胎儿细胞因子扩增体外分离

大鼠骨髓间质干细胞体外分化为成骨细胞的实验研究被引量：12: 2004年; 目的 :建立大鼠骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)体外诱导分化为成骨细胞的模型。方法 :分离大鼠骨髓间质干细胞进行体外培养 ,观察其生物学特性。并选用一定的诱导剂诱导成骨细胞 ,通过形态学变化、碱性磷酸酶染色及钙沉积对成骨细胞进行鉴定。结果 :大鼠MSCs细胞形态呈长梭形 ,成骨细胞诱导后MSC细胞形态由长梭形向多边形转变 ,ALP染色阳性 ,VonKossa染色阳性 ,呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征。结论 :大鼠骨髓MSCs体外能被诱导分化为成骨细胞 ,为骨组织工程研究的优良种子细胞。; 孙晓春许文荣朱伟胡嘉波陈巧林钱晖王波; 关键词：骨髓间质干细胞成骨细胞

脐血造血干/祖细胞体外扩增及移植动物模型分析被引量：5: 2004年; 目的　探讨脐血造血干 /祖细胞体外扩增和体内重建造血的潜能。方法　利用造血干 /祖细胞培养、体外扩增、移植动物模型等技术 ,研究不同比密ficoll分离液分离的脐血造血干 /祖细胞的造血活性。结果　比密 1.0 6 4 g/ml分离液分离的 10 5个脐血MNC中 ,CFU GM集落数为 373± 2 89,BFU E为 12 1± 70。在G3(GM CSF和IL 3融合蛋白 )、IL 6、TPO(thrombopoietin)作用下 ,1.0 6 4 g/ml分离液分离的脐血造血干 /祖细胞在体外扩增 14d ,CFU GM扩增 5 2 .2倍。给经 8.5Gy致死剂量照射的小鼠输注 1.0 6 4 g/ml分离液分离的脐血造血干 /祖细胞 ,体内产生的脾结节 (CFU S)是输注 1.0 77g/ml分离液分离细胞的 2 .2倍。结论　比密 1.0 6 4 g/ml分离液分离的脐血造血干 /祖细胞 ,在体外具有较高的增殖。; 胡嘉波许文荣张锡然朱伟孙晓春顾可梁许化溪; 关键词：细胞体外扩增动物模型造血活性

骨髓间质干细胞诱导为神经细胞的研究进展被引量：5: 2002年; 孙晓春姚堃许文荣; 关键词：骨髓间质干细胞神经细胞

骨髓间质干细胞绿色荧光蛋白基因的转染和克隆化研究被引量：6: 2003年; 目的　建立能稳定表达绿色荧光蛋白 (GFP)并连续传代培养的骨髓间质干细胞 (MSCs)株。方法　采用电穿孔法将带有GFP的质粒 (pGFP N1)在不同条件下转染MSCs,经过G4 18筛选 ,有限稀释法筛选阳性克隆 ,荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达情况。结果　电穿孔以电容量 10 5 0 μF、电压 2 6 0V时效果最好 ,转染GFP的MSCs能在含有G4 18的培养基中生长 ,未转染的骨髓间质干细胞不断死亡。转染 2 4h后即能观察到少量荧光细胞 ,一个月后大部分荧光细胞呈集落样生长 ,荧光表达较强 ,转染率为 5 0 %～ 6 0 %。体外克隆后 ,能稳定表达至 10代 ,10代后荧光强度明显减弱。结论　GFP基因能在MSCs中进行有效的复制、转录和翻译 ,并可持续、稳定、高效表达 ;; 钱晖许文荣胡嘉波陈永昌孙晓春朱伟韩崇旭张锡然; 关键词：骨髓间质干细胞绿色荧光蛋白基因转染

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江苏省自然科学基金(BK2002006)

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