国家自然科学基金(81370303) 作品数:21 被引量:53 H指数:5 相关作者: 王如兴 钱玲玲 孙曼青 吴莹 党时鹏 更多>> 相关机构: 南京医科大学 山东省医学科学院 徐州医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 江苏省医学重点人才培养基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
二十二碳六烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道开放概率的影响 被引量:2 2015年 目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)的影响。方法选取体重(200±20)g,年龄6-8周的雄性SD大鼠20只为研究对象,采用随机数字表法分为糖尿病组(10只)和正常对照组(10只)。糖尿病组采用链脲霉素腹腔内注射,2周后测定大鼠血糖浓度,如血糖浓度低于300 mg/dl,则用等剂量链脲霉素再次腹腔内注射,当血糖浓度持续8周高于300 mg/dl视为造模成功。正常对照组大鼠腹腔内注射生理盐水。酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流并比较不同浓度DHA作用下正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0。两两比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析。结果当刺激电压为0、20、40、60、80、100、120 mV时,随着刺激电压增加,正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均增加(F=15.28、9.72,均P〈0.05)。与正常对照组相比,当刺激电压〉60 mV后,糖尿病组BK通道NP0明显降低(分别为0.56±0.05比0.22±0.02,1.11±0.09比0.33±0.09,2.85±0.10比0.86±0.12,3.05±0.15比1.01±0.13, t=3.62、4.27、6.32、8.14,均P〈0.05)。在刺激电压60 mV和钙离子浓度1mmol/L条件下,当电极外液DHA浓度为0、0.01、0.10、0.30、1.00mmol/L时,正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均无明显增加(F=3.01、2.61,均P〉0.05);继续增加DHA的浓度,当DHA浓度为3、5、10mmol/L时,对照组BK通道NP0呈浓度依赖性增加,糖尿病组NP0呈浓度依赖性增加(F=10.21、7.32,均P〈0.05)。在DHA浓度相同情况下,糖尿病组BK通道NP0均低于对照组(t=2.71-8.54,均P〈0.05)。结论糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道功能受损,但DHA仍可激活BK通道,增加NP0,从而扩张冠状动脉而� 季圆 王如兴 钱玲玲 党时鹏 吴莹 王萌 徐凤 王湘芸 汤徐 孙曼青 李肖蓉关键词:二十二碳六烯酸 糖尿病 冠状动脉 膜片钳 miRNA对糖尿病及其心血管并发症的调控 被引量:3 2014年 miRNA(微小RNA,microRNA)是一类在转录后水平调控基因表达的小分子RNA.近年来多项研究表明miRNA与糖尿病及其多种并发症的发生相关.本文主要就miRNA在糖尿病及其心血管并发症中的调控作用、生物标志物的价值以及在糖尿病治疗中的应用方面作一综述,为糖尿病的诊断及治疗开拓新的思路. 徐凤 钱玲玲 王如兴关键词:MIRNA 糖尿病 心血管并发症 不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制 2017年 目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞。采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化。结果:0.01~1.00μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24±0.05)μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00~10.00μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38±0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化。在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00μmol/L时,BK通道开放概率分别为(0.095 2±0.009 5)、(0.093 9±0.012 6)、(0.098 6±0.016 9)、(0.099 5±0.014 7)、(0.097 5±0.010 4)和(0.102 3±0.020 6)(P>0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3、10μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3±0.013 2)和(0.892 7±0.052 3)(P<0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37±0.10)μmol/L。结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活。 夏大云 钱玲玲 郁志明 孙曼青 汤徐 吴莹 党时鹏 季圆 王湘芸 柴强 陆彤 王如兴关键词:二十二碳六烯酸 冠状动脉平滑肌细胞 膜片钳 大电导钙离子激活钾通道与糖尿病血管病变的相关性探讨 被引量:6 2014年 糖尿病已成为严重危害人类健康的非传染性疾病之一[1].糖尿病患者常伴发大血管病变与微血管病变,从而引起心、脑、肾和视网膜等重要靶器官损害.因此,探讨糖尿病血管病变的发病机制具有重大临床意义,但其发生机制尚不完全清楚,可能与离子通道功能异常相关[2]. 钱玲玲 刘晓宇 王如兴关键词:大电导钙激活钾通道 糖尿病 糖尿病血管病变 n-3多不饱和脂肪酸对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞钙库操纵性钙通道的影响 被引量:1 2019年 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞(SMC)上钙库操纵性钙通道(SOCC)的功能和表达的影响。方法选用健康清洁级雄性SD大鼠共180只,按完全随机分组法分为正常组(N组)、未干预糖尿病组(D组)、低剂量n-3 PUFA干预糖尿病组(DL组)和高剂量n-3 PUFA干预糖尿病组(DH组),每组45只。采用链尿霉素连续2次腹腔注射建立1型糖尿病大鼠动物模型,成模后DL组和DH组大鼠分别按每日10 mg/kg和50 mg/kg n-3 PUFA灌胃,N组和D组每日相同剂量生理盐水灌胃,持续8周。采用三步酶消化法急性分离获取大鼠冠状动脉SMC;细胞内Ca2+荧光成像技术测定SOCC引起的冠状动脉SMC内Ca2+浓度变化(ΔF340/F380);血管张力测定技术测定SOCC引起的冠状动脉张力变化;Western blot测定冠状动脉SMC上基质交联分子1(STIM1)、钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)及瞬时受体电位C通道1(TRPC1)表达情况。结果N、D、DL和DH组冠状动脉SMC上SOCC引起的ΔF340/F380值分别为0.425±0.023、0.838±0.037、0.342±0.052和0.364±0.045,N、DL和DH组的ΔF340/F380明显低于D组(P<0.05),DL组和DH组间差异无统计学意义(P>0.05)。4组SOCC引起的冠状动脉张力变化分别为0.94±0.09、1.95±0.18、1.35±0.24和1.01±0.18,N组和DH组的冠状动脉张力低于D组(P<0.05),DL和D组间差异无统计学意义(P>0.05)。D组冠状动脉SMC上STIM1、Orai1和TRPC1蛋白表达高于N组(P均<0.05),DL组和DH组的STIM1蛋白表达低于D组(P<0.05),各组Orai1和TRPC1表达差异无明显意义(P>0.05)。结论糖尿病时大鼠冠状动脉SMC上SOCC表达增加,细胞内Ca2+浓度增加,冠状动脉张力增加,n-3 PUFA可以下调糖尿病大鼠冠状动脉SMC上SOCC的表达,降低细胞内Ca2+浓度和冠状动脉张力,对糖尿病冠状动脉起保护作用。 汤徐 钱玲玲 党时鹏 吴莹 刘晓宇 张桢烨 缪凌枫 王如兴关键词:糖尿病 冠状血管 钙通道 n-3多不饱和脂肪酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用及其机制 2016年 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)灌流后BK通道开放概率(NP0)。采用Western Blot和qRT-PCR分别测定未灌胃组和低、高剂量n-3 PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道α亚单位和β1亚单位基因及蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmoVL和刺激电压60mV条件下,EPA浓度为0、10、30、100、300和1000pmo/L时,BK通道NP0分别为0.0616±0.0938、0.1090±0.0957.0.1303±0.0964、0.2250±0.1804、0.3803±0.2472和0.4080±0.2705,呈浓度依赖性增加(P〈0.05,n=4);而DHA浓度为0、0.01、0.1和1μmol/L时,BK通道NP0分别为0.1200±0.0086、0.1190±0.0734、0.1250±0.0921和0.2890±0.0616,NP。无明显增加(P〉0.05);继续增加DHA的浓度,当DHA浓度为3、5、7.5和10μmol/L时,BK通道NP。分别为0.6326±0.0478、1.0980±0.0643、1.1587±0.0676和1.1640±0.0926呈浓度依赖性增加(P〈0.05,n=4)。BK通道仪亚单位蛋白表达分别为0.7929±0.1794、0.7760±0.0599和0.7905±0.0596(P〉0.05,n=24),β1亚单位蛋白表达分别为0.8971±0.2976、1.1407±0.1516和1.2392±0.2337(P〉0.05,n=24)。未灌胃组和低、高剂量n-3PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞上BK通道α亚单位基因表达分别为0.6403±0.2470、0.6301±0.2290和0.9217±0.0907(P〉0.05,n=24),B1亚单位基因表达分别为0.8531±0.3687、0.9919±0.2250和1.0865±0.3632(P〉0.05,n=24)。结论n-3PUFA并非通过影响BK通道亚单位表达增加BK通道激活,而是通过与BK通道作用后直接激活,从而扩张冠状动脉。 汤徐 季圆 钱玲玲 党时鹏 孙曼青 王湘芸 吴莹 夏大云 王文 柴强 王如兴关键词:N-3多不饱和脂肪酸 冠状动脉 大电导钙激活钾通道 单通道 膜片钳 二十二碳六烯酸通过磷脂酶C-三磷酸肌醇-钙离子途径激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道 被引量:2 2016年 目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;全细胞膜片钳实验技术记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录不同钙离子浓度条件下BK通道电流,并计算开放概率(NP1);钙离子成像技术测定不同浓度DHA作用后及分别采用磷脂酶(CPLC)受体抑制剂和三磷酸肌醇(IR)受体抑制剂预孵育冠状动脉平滑肌细胞后细胞内钙离子浓度变化。结果1μmol/LDHA可激活BK通道;在刺激电位60mV,电极外液钙离子浓度为0、0.01、0.1、1、3、10、50和100μmol/L条件下,BK通道NP。分别为0.0027±0.0004、0.0060±0.0014、0.0972±0.0106、0.1379±0.0329、0.4687±0.1637、2.0971±0.3104和3.1204±0.2427(P〈0.05,n=4)。未加DHA时,细胞内钙离子浓度荧光信号比值(R值)为0.51±0.01;加入0.001和0.01μmol/LDHA后,R值分别为0.53±0.02和0.55±0.01,与未加DHA相比差异无统计学意义(P〉0.05,n/〉5);当加入的DHA浓度为0.1、0.3、1、3、5和10μmol/L时,其R值分别为0.64±0.01、0.65±0.01、0.70±0.01、0.69±0.01、0.68±0.01和0.67±0.02,ECEn为(0.04±0.02)μmol/L,与未加DHA比较,差异有统计学意义(P〈0.05,nI〉4)。分别采用PLC受体抑制剂U73122和IR受体抑制剂2-APB预孵育冠状动脉平滑肌细胞,测定加入0.1μmol/LDHA后R值分别为0.52±0.01和0.49±0.02,低于未加抑制剂的R值(0.64±0.01,P〈0.05,n≥4)。结论DHA可通过PLC—IP,Ca^2+途径增加正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度激活BK通道,从而扩张血管,对心血管系统有一定的保护作用。 孙曼青 钱玲玲 党时鹏 吴莹 汤徐 季圆 王湘芸 夏大云 王文 柴强 陆彤 王如兴关键词:冠状血管 大电导钙激活钾通道 腺苷三磷酸对冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制 被引量:2 2015年 目的探讨腺苷三磷酸(ATP)对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;膜片钳实验技术记录全细胞状态下BK通道电流;钙离子成像技术记录ATP对细胞内钙离子浓度影响。结果膜片钳实验结果显示,加入1mmol/LATP前后,BK通道电流密度分别为(137±13)pA/pF和(179±15)pA/pF(P〈0.05);钙离子成像结果显示,加入0.5mmol/LATP前后,细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值分别为2.46±0.08和4.04±0.21(P〈0.05)。分别采用嘌呤(P2Y1)受体阻滞剂MRS2179、磷脂酶C(PLC)受体阻滞剂1373122和三磷酸肌醇(IP3)受体阻滞剂2-APB孵育冠状动脉平滑肌细胞,再测定加入0.5mmol/LATP后3组细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值,分别是2.70±0.06、2.65±0.12和2.69±0.13,与未加入3种阻滞剂相比,钙离子浓度荧光信号强度比值均明显降低(P〈0.05)。结论ATP可以通过P2Y1.PLC—IP3通路升高细胞内钙离子浓度,从而激活BK通道。 王湘芸 吴莹 钱玲玲 党时鹏 季圆 徐凤 王萌 汤徐 姚勇 王如兴关键词:腺苷三磷酸 大电导钙激活钾通道 钙离子 冠状动脉 平滑肌细胞 Role of BKCa channels in diabetic vascular complications 被引量:13 2014年 Objective This review focuses on the role of the large conductance calcium-activated potassium (BKCa) channels in diabetic vascular complications.Data sources Relevant articles published in English or Chinese from 1981 to present were selected from PubMed.The search terms were "BKCa channels" and "diabetes".Important references from selected articles were also retrieved.Study selection Articles regarding the role of BKCa channels in diabetic vascular complications and relevant mechanisms were selected.Results The BKCa channels are abundantly expressed in vascular smooth cells and play an important role in regulation of vascular tone.Multiple studies indicated that the expression and function of BKCa channels are altered by different mechanisms in diabetic vascular diseases such as coronary arterial disease,cerebral arterial disease,and diabetic retinopathy.Conclusion BKCa channels may play an important role in diabetic vascular complications and may be an effective therapeutic target for relieving and reducing the burden of diabetic vascular complications. Qian Lingling Liu Xiaoyu Wang Ruxingn-3多不饱和脂肪酸与高血压研究进展 2016年 高血压是一种常见心血管疾病,可引起心、脑和肾等重要靶器官损伤,严重可导致患者致残致死。目前国内外对高血压的预防和治疗研究较多,尤其是积极研发新的不良反应小的降压药物具有重要临床意义。n-3多不饱和脂肪酸多存在于海洋生物中,其主要成分为二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸,均为人体必需脂肪酸。近年来研究结果表明n-3多不饱和脂肪酸对降低血压有一定的作用,但其机制尚不完全清楚,故对n-3多不饱和脂肪酸的降压作用和机制作一综述。 孙曼青 钱玲玲 王如兴关键词:脂肪类 不饱和 高血压 离子通道