国家自然科学基金(30330350)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：胡晶莹赵新泰甘愉赵仰星孔伟更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院上海市肿瘤研究所上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
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- 肝癌抑制基因-1肿瘤靶向性表达及其特异性抗肿瘤作用
- 2008年
- 目的建立肝癌抑制基因-1（HCCS1）肿瘤靶向性表达载体，提高肿瘤治疗的安全性。方法活细胞计数试剂盒测定HCCS1高表达对正常细胞和肿瘤细胞的影响，荧光素酶试验检测肿瘤特异性启动子PEG3p在正常肝细胞和肝癌细胞中的相对转录活性，AdEasyTM系统包装并利用PCR鉴定重组腺病毒Ad—PEG-3p—HCCS1，Westernblot检测重组腺病毒感染后HCCS1在正常细胞和肿瘤细胞中的表达情况，结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验观察该重组腺病毒体外抗肿瘤的靶向性。结果HCCS1高表达对肿瘤细胞株BEL7404和SW-620的生长抑制作用明显超过正常细胞株L02和正常人肺成纤维细胞，96h抑制率达60％。荧光素酶试验显示，PEG-3p在BEL-7404、BEL7405、QGY-7703中的相对转录活性分别为L02的3．9、4．7、1．5倍。成功构建了新抑癌基因HCCS1肿瘤靶向性表达的重组腺病毒Ad—PEG3p—HCCS1，Westernblot检测结果显示，在BEL7404和QGY7703中，HCCS1表达高于在L02中的表达。结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验显示，Ad—PEG-3p—HCCS1与Ad—CMVHCCS1相比，在不降低对肿瘤抑制效果的前提下，明显降低了对正常细胞的杀伤作用。结论肿瘤细胞对HCCS1的生长抑制作用更为敏感，PEG3p在肝癌细胞中也具有肿瘤特异性，AdPEG-3p—HCCS1可特异性地在肿瘤细胞中表达HCCS1，从而提高HCCS1基因治疗的安全性。
- 张剑甘愉胡晶莹赵新泰
- 关键词：腺病毒载体
- 肝癌抑制基因-1与转运功能相关的451bp序列区的确定被引量：1
- 2008年
- 背景与目的:肝癌抑制基因-1(HCCS1)是一种潜在的肝癌抑制基因,并且在细胞内蛋白分拣运输中也发挥着重要作用,其抑癌作用有可能是通过其蛋白转运的功能而发挥的,本文以寻找HCCS1序列中与转运相关的最小功能序列区域为目的。方法:通过亚克隆技术,构建以pEGFP-C2为载体的含不同长度HCCS1cDNA片段的亚克隆,将构建的亚克隆转染子宫颈癌HeLa细胞,通过免疫荧光共聚焦显微镜观察不同长度HCCS1蛋白的分布,以及与6-磷酸甘露糖受体(M6PR)的共定位。结果:成功构建了以pEGFP-C2为载体的10个含有不同长度HCCS1片段的亚克隆;HCCS1cDNA从3'端向5'端逐渐缺失的片段中:2100bp片段至778bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白呈颗粒状分布于核周的胞质内,其中2100bp片段至1571bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白均呈颗粒状、极性分布于核周的胞质内,且与M6PR有共定位;而1120bp片段至778bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白虽然也呈颗粒状分布于核周,但极性分布消失,且与M6PR共定位消失;HCCS1cDNA片段678bp片段至339bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白呈散点状弥散分布于胞质以及胞核内。结论:确定了HCCS1cDNA1571bp片段的3'端451bp的序列为与HCCS1转运功能相关的最小区域范围。
- 孔伟甘愉胡晶莹朱明洁赵仰星赵新泰
- 关键词：转运
