北京市自然科学基金(7042062)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- 负载抗原肽的树突状细胞增强腺病毒载体介导hTRP2诱发抗小鼠黑色素瘤免疫被引量：2
- 2006年
- 目的探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHCⅠ多肽TRP2p180-188 (SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果。方法Ad hTRP2免疫C57BL／6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或DC／SVYDFFVWL再免疫一次。用体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验和细胞内IFNγ染色(ICS)分析CTL杀伤活性和IFNγ的产生;或给免疫小鼠皮下接种B16．F10细胞,观察荷瘤小鼠的成活情况。结果测定脾脏中6 h CTL杀伤率和产生IFNγ的CD8+T细胞比例,结果分别是:Ad hTRP2(初免)- Ad hTRP2(加强)组为68．40％±5．50％和0．67％±0．16％,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为28．50％±6．40％和0．22％±0．07％,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为98．90％±0．90％和1．05％±0．21％。荷瘤实验显示,小鼠接种1×106 B16．F10细胞后3个月,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠无一成活,Ad hTRP2(初免)-Ad hTRP2(加强)组只有40％的小鼠存活,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠100％存活。结论用DC／SVYDFFVWL加强免疫能显著地增强Ad hTRP2初次免疫的效果,表明Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)免疫是一种克服重复应用腺病毒并不能提高抗肿瘤免疫效应的有效方式。
- 谭晓华刘畅万永红
- 关键词：腺病毒载体树突状细胞抗原肽
- 以Ad SIINFEKL—Luc为抗原研究免疫反应的量效关系
- 2007年
- 目的定量地探讨腺病毒载体编码的已知抗原与其诱发的抗原特异性细胞免疫反应的量效关系。方法用不同MOI的编码鸡卵清蛋白MHCI多肽SIINFEKL（OVAp257-264）与荧光素（luciferase，Luc）融合蛋白的腺病毒（Ad SIINFEKL-Luc）感染小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC），在不同的时间点定量检测DC中Luc的表达；相应地，用表达不同水平SIINFEKL-Luc融合蛋白的DC皮下免疫C57BL／6小鼠，通过体内CTL杀伤试验和细胞内γ干扰素（IFN-γ）染色（ICS）定量分析CTL杀伤活性及其产生IFN-γ的能力。结果Luc在DC中的表达水平与Ad SIINFEKL-Luc所用剂量具有剂量效应关系，AdSIINFEKL-Luc一次感染后在DC中持续4d仍然检测得到Luc的表达。分别用0．1、1、10和100MOI的Ad SIINFEKL-Luc／5×10^5 DC免疫小鼠1周，体内CTL杀伤试验分析小鼠脾细胞4hCTL杀伤率分别是14．4％±2．3％、32．6％±4．5％、86．7％±3．8％和99．8％±0．3％。ICS分析脾脏IFN-γ产生的CD8^＋T细胞占总CD8^＋T细胞比率分别是0．49％±0．12％、1．74％±0．21％、4．12％±0．34％和9．53％±0．58％。结论Ad SIINFEKL-Luc表达抗原水平的高低与其诱发特异性细胞免疫反应的强弱明显相关。在一定范围内，抗原表达高低与其诱发的抗原特异性细胞免疫反应的强弱呈正相关。
- 谭晓华万永红
- 关键词：腺病毒载体树突状细胞融合蛋白免疫反应
- pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)重组质粒的构建、表达及鉴定
- 2008年
- 目的:利用基因工程技术构建pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)重组质粒,为其应用于肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:以本实验室构建保存的pcDNA3.1 hKDR为模板,PCR扩增hKDR(Ig1-3)cDNA片段后用Nco I和Xho I酶切后插入pmRNA IRES多克隆位点的相应位点中,经PCR、酶切和测序鉴定其序列正确性,然后用试剂盒体外转录出相应的mRNA,用脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选后通过免疫组化和Western blot检测该融合蛋白。结果:PCR、酶切和测序证实pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)构建成功,体外转录出相应的mRNA,免疫组化和Western blot检测出其蛋白表达。结论:成功构建含pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)的真核表达重组质粒,有助于进一步研究其抗肿瘤作用。
- 孙林英刘畅胡锋涛刘秀丽邵晓婷刘端祺谭晓华
- 关键词：质粒基因表达调控
- IRES增强mRNA在树突状细胞中的翻译效率有效地诱发抗肿瘤免疫被引量：2
- 2007年
- 目的旨在寻求一种能完全替代目前常规体外转录合成肿瘤相关抗原(TAA)mRNA的方法。方法构建4个质粒包括 pmRNA 荧光素(Luc)、pmRNA IRES-Luc、pmRNA 鸡卵清蛋白(OVA)和 pmRNA IRES-OVA,用 Luc 报告系统检测不同形式的 Luc mRNA 转染小鼠树突状细胞(DC)后的蛋白表达水平;以 OVA 作为靶抗原,以小鼠黑色素瘤肺转移作为动物模型,通过体内细胞毒性 T淋巴细胞(CTL)杀伤实验及荷瘤实验,比较 Capped-OVA mRNA 和 IRES-OVA mRNA 修饰 DC 所诱发的抗原特异性细胞免疫反应。结果将 IRES 序列插入 mRNA 转录模板编码基因 cDNA 序列前,不影响体外转录合成相应 mRNA 的产量。不同形式 Luc mRNA 转染 DC 后8h,IRES-Luc mRNA 较Capped-Luc mRNA 表达的酶活性高1倍,而较 Uncapped-Luc mRNA 高20倍;IRES-Luc mRNA 和Capped-Luc mRNA 转染 DC 96 h 后仍能检测到 Luc 活性。用 Capped-OVA mRNA 和 IRES-OVA mRNA修饰 DC 免疫小鼠1周后行体内 CTL 杀伤实验,结果示 Capped-OVA mRNA/DC 免疫组4 h CTL 杀伤率为(28±3)%,而 IRES-OVA mRNA/DC 免疫组4 h CTL 杀伤率为(32±4)%。荷瘤实验显示,Capped-OVA mRNA/DC 和 IRES-OVA mRNA/DC 免疫小鼠后均能保护小鼠肺部免受黑色素瘤转移结节形成。结论含 IRES 序列的 TAA mRNA 可作为一种更经济、适用的方法,完伞可以取代 Cap 化mRNA 修饰 DC,并能诱导与 Cap 化 mRNA 修饰 DC 同样有效的抗原特异性细胞免疫反应。
- 谭晓华万永红
- 关键词：癌症疫苗树突细胞免疫疗法
- 以树突状细胞为基础的血液恶性肿瘤免疫治疗研究进展
- 2007年
- 机体的免疫应答，是抗原递呈细胞（antigenpresenting cell，APC）首先捕获抗原，经过加工处理后将抗原信号传递给T细胞和B细胞。引发一系列的免疫反应。树突状细胞（dentritic cell，DC）是已知的功能最强的专职APC，能够摄取抗原，还可以摄取和转运抗原的特殊膜受体，同时能高效摄取低浓度抗原，是促进T、B淋巴细胞增殖的高效刺激因子。而且，少量的抗原与DC作用足以激活T细胞。因此，DC被认为是联系天然防御功能和获得性免疫的关键。
- 李慧谭晓华
- 关键词：树突状细胞肿瘤免疫治疗抗原递呈细胞B淋巴细胞增殖激活T细胞恶性血液
- mGM-CSF-mMIP-3α重组质粒的构建、表达及鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的:构建pCDNA3.1mGM-CSF-mM IP-3α重组质粒,为mGM-CSF-mM IP-3α基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法:利用本实验室保存的pCDNA3.1mGM-CSF和pCDNA3.1mM IP-3α质粒,采用分子生物学技术构建了pCDNA3.1mGM-CSF-mM IP-3α重组质粒。用PCR、酶切进行鉴定,然后用脂质体转染B16细胞,用G418筛选后通过ELISA和W estern b lot检测该融合蛋白。结果:重组质粒中含有mGM-CSF-mM IP-3α基因,转染B16细胞后,其表达产物能分泌到肿瘤细胞外,分泌到细胞外的产物用ELISA和W esternb lot检测证明能与特异性mGM-CSF和mM IP-3α抗体结合。结论:成功构建含mGM-CSF-mM IP-3α真核表达重组质粒,有助于进一步研究其抗肿瘤作用。
- 刘畅孙林英刘秀丽邵晓婷谭晓华刘端祺
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子重组质粒基因疗法
- hKDR融合基因致敏树突状细胞对小鼠肝癌细胞杀伤活性研究
- 2006年
- 目的:探讨hKDR融合基因致敏树突状细胞(DC)激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠肝癌细胞的杀伤活性。方法:自小鼠骨髓中获取DC,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和hKDR融合基因的mRNA致敏DC;用致敏的DC免疫小鼠取其脾脏获得CTL,即效应细胞,用脂质体将pCDNA hKDR转染至小鼠肝癌Hepal-6细胞株中,作为靶细胞;将效应细胞与靶细胞按不同比例混合,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒作用。结果:未经修饰的DC激活的CTL与靶细胞比例为100∶1、50∶1、25∶1情况下,其杀伤率分别为19.2%、12.3%、6.9%;经hKDR修饰的DC激活的CTL与靶细胞比例为100∶1、50∶1、25∶1情况下,其杀伤率分别为71.6%、55.8%、22.7%,将两组结果在相同的比例下两两比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论:hKDR融合基因致敏DC激活的CTL对小鼠肝癌细胞具有较强的杀伤作用,且杀伤能力随效应细胞与靶细胞比例增高而增强。
- 刘秀丽孙林英邵晓婷刘端祺谭晓华
- 关键词：肝肿瘤杀伤活性
