北京市自然科学基金(7042043)
- 作品数：6 被引量：34H指数：4
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- 雷帕霉素对人肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的抑制作用被引量：10
- 2007年
- 目的探讨雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对体外培养的人肾小管上皮细胞发生上皮肌成纤维细胞转化(Epi-thelial-Myofibroblast Transition,EMT)的作用,以及该作用与上皮细胞中锌指蛋白(Snail)基因水平变化的关系。方法体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为阴性对照组、转化生长因子β-1(TGF-β1)(1μg/L)阳性对照组和TGF-β1+RAPA组。TGF-β1+RAPA组不同浓度的雷帕霉素(0.1μg/L,1μg/L,10μg/L,100μg/L)与TGF-β1(1μg/L)共同作用,各组作用时间均为48h。用间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法分别检测细胞平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)表达,同时用RT-PCR方法检测细胞Snail mRNA水平的变化。再选取最大作用浓度的雷帕霉素作用不同时间(12h、24h、48h、72h),用RT-PCR、Western Blot方法检测α-SMA表达水平变化。结果间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法检测均表明,TGF-β1阳性作用组较阴性对照组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著增强(P<0.05),而E-cadherin表达则几乎消失,Snail mRNA表达水平显著增强(P<0.05)。与阳性对照组相比,雷帕霉素(10μg/L,100μg/L)与TGF-β1共同作用组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而E-cadherin表达则有部分恢复,显著高于阳性对照组(P<0.05),而Snail mRNA表达水平比阳性对照组显著降低(P<0.05)。雷帕霉素以浓度依赖方式抑制TGF-β1诱导的HKC细胞Snail mRNA表达。结论应用体外培养的肾小管上皮细胞研究表明,雷帕霉素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用。此作用可能与该药诱导的Snail表达下调有关。
- 李慧凛郑法雷赵班
- 关键词：转化生长因子Β-1雷帕霉素
- 己酮可可碱对肾小管上皮细胞转分化抑制作用的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的 :探讨己酮可可碱 (PTX)对单侧输尿管梗阻 (UUO)模型大鼠肾间质平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)表达的影响 ,并在体外研究其对肾小管上皮细胞转分化及其对Smad 7表达的作用。方法 :将实验大鼠分为假手术组、UUO对照组和UUO +PTX治疗组。用免疫组化法测定各组动物肾组织α -SMA表达。体外培养的人肾小管上皮细胞 (HK - 2 ) ,经TGF - β1及PTX干预后 ,用蛋白印迹检测α -SMA和Smad 7表达 ,用ELISA检测培养上清中Ⅰ型胶原含量。结果 :假手术组大鼠肾组织仅血管壁α -SMA免疫染色阳性。UUO对照组第 3d、第 7d、第 14d ,α -SMA表达程度分别为 (2 .90± 0 .71) %、(8.5 0± 0 .97) %、(17.9± 2 .70 ) % ,PTX治疗组则分别为 (2 .70± 0 .6 2 ) %、(6 .90±0 .83) %、(13.8± 1.9) % ,术后第 7d(P <0 .0 5 )、第 14d(P <0 .0 1)两组有统计学差异。TGF - β1(8ng/ml)刺激HK - 2细胞 72h后 ,α -SMA表达强度为 (87.7± 7.0 ) % ,培养上清中Ⅰ型胶原浓度为 (2 5 6 0 .4 9± 95 .0 3)ng/ml;而加入PTX 10、5 0、10 0、30 0、5 0 0 μg/ml干预 72h后 ,α -SMA表达强度 (F =174 .998,P <0 .0 0 1)和培养上清中的Ⅰ型胶原 (F =4 6 0 .883,P <0 .0 0 1)呈浓度依赖性减少。在TGF - β1刺激前 2 4h、TGF - β1刺激后 0h。
- 周秋根郑法雷文煜冰谭小月段林李艳
- 关键词：肾间质纤维化肾小管上皮细胞转分化己酮可可碱SMAD7
- MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系被引量：4
- 2009年
- 目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系。方法体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/mlTGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1、1.0、10、100ng/ml)处理细胞,或以同一浓度的MCP-1(1ng/ml)在不同时间点(0h、12h、24h、36h、48h、72h)处理细胞。用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α-SMAmRNA的表达,Westernblot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达。在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂(PD98059,10μmol/L),p38MAPK抑制剂(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑制剂(Y27632,500μmol/L)对HKC细胞ILK表达的影响。结果MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用后HKC细胞α-SMAmRNA和α-SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组(P<0.01),但低于阳性对照组(P<0.01);其中以1.0ng/mlMCP-1组作用后α-SMAmRNA和α-SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著(P<0.001)。1.0ng/mlMCP-1作用后细胞α-SMAmR-NA和α-SMA、ILK蛋白表达在0～48h内逐渐增加,48h达最高峰(P<0.01),72h时呈下降趋势。分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异(P>0.05)。结论MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38MAPK、ROCK途径有关。
- 赵班李慧凛连耀国吴华郑法雷
- 关键词：转化生长因子-Β1Α-平滑肌肌动蛋白单核细胞趋化因子-1整合素连接激酶
- 单核细胞趋化蛋白-1诱导肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的作用及机制探讨被引量：6
- 2008年
- 目的探讨单核细胞趋化蛋白（MCP）-1诱导肾小管上皮细胞发生上皮-肌成纤维细胞转化（EMT）的作用和细胞分子机制，主要是EMT过程中Erk1／2、P38MAPK、RhoA、RhoC、Snail表达水平的变化。方法将HK-2细胞分为阴性对照组，阳性对照组（TGF-β1、5μg／L），MCP-1作用组（0．1、1、10、100μg／L），观察不同时间（12、24、48、72h）MCP-1刺激与α-SMA表达水平之间的变化。用Western印迹方法检测肾小管上皮细胞PErk1／2、Erk1／2、P-P38MAPK、P38MAPK、RhoA蛋白水平的变化，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RhoC、Snail基因水平的变化。此外，分别观察Erk、P38MAPK、Rho信号通路的阻断剂（PD98059、SB203580、Y27632）对MCP-1诱导EMT的影响。结果在不同浓度MCP-1刺激下，HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平均明显增强，以1μg／L刺激下表达最强；在1μg／LMCP-1作用下，24、48、72hα-SMAm RNA及蛋白表均达显著高于阴性对照组（均P〈0．05），48h作用达到最高峰。在不同浓度（0．1、1、10、100μg／L）MCP-1刺激5min时，HK-2细胞（PErk1／2）／（Erk1／2）和（P-P38MAPK）／（P38MAPK）的比值均显著高于阴性对照组（均P〈0．05），并表现为剂量依赖性。不同浓度MCP-1刺激下RhoA蛋白水平和RhoC基因表达水平与阴性对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。PD98059可以部分阻断MCP-1诱导的肾小管上皮细胞α-SMA蛋白表达水平，与阳性对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；而SB203580及Y27632均不能阻断MCP-1诱导的α-SMA蛋白表达，与阳性对照组比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。MCP-1（10、100μL）刺激下Snail基因表达水平明显升高，与阴性对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MCP-1诱导体外培养的HK-2细胞发生EMT与上调Erk1／2信号转导通路有关，并可能与上调Snail转录因子水平有关，本研究未能�
- 李慧凛郑法雷赵班
- 关键词：单核细胞化学吸引蛋白质1肾小管成纤维细胞
- 慢性马兜铃酸肾病的临床特点与肾小管上皮-间充质转化被引量：1
- 2012年
- 目的探讨关木通等中药引起的慢性肾小管间质病变的临床病理特点,及对肾小管上皮-间充质转化(EMT)的可能作用。方法分析16例关木通等中药所致肾损害的临床表现、肾病理特点和肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的情况。对10例肾活检标本进行α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波型蛋白和Ⅲ型胶原表达的检测。结果本组16例患者均在服用关木通等中药后出现肾脏病变,10例中药成分中明确含有关木通,5例就诊时已进入尿毒症期或尿毒症前期。临床表现为多饮、多尿,血压一般正常。尿常规基本无白细胞,蛋白尿较轻,尿β2微球蛋白显著升高(>3000ng/ml),贫血13例,伴肾性糖尿14例、肾小管酸中毒10例。肾活检显示以小管间质病变为主,大片肾小管萎缩或扩张,小管上皮细胞浊肿、脱落,间质灶性或成片以单核细胞为主的淋巴细胞浸润及大片纤维化,小叶间动脉壁可增厚。肾小球无病变或轻度系膜细胞增生。肾小管上皮细胞α-SMA、波型蛋白表达增加,肾间质Ⅲ型胶原表达增加。7例予泼尼松15～50mg/d治疗8～72个月后,4例肾功能有所好转,2例血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平稳定,1例肾功能继续恶化。1例经过对症治疗2个月后肾功能正常,5年后肾小管酸中毒和肾性糖尿完全消失。结论关木通等中药可引起慢性小管间质病变,肾小管上皮细胞表型转化很可能是其重要机制之一。皮质激素可能对缓解关木通等中药所致肾小管间质病变有一定作用,其疗效尚需进一步观察。
- 于阳张晓明李艳叶文玲李雪梅郑法雷
- 关键词：中药关木通肾损害
- 骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad3信号转导的作用被引量：14
- 2005年
- 目的探讨骨形成蛋白7(BMP-7)对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子β1(TGFβ1)、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK2细胞分为以下各组:阴性对照组;阳性对照组:TGF-β1(5ng/ml)处理;MCP-1(0.1,1,10及50ng/ml)组,BMP7组(0.1,1,10,50ng/ml);MCP1(1ng/ml)加BMP-7(50ng/ml)组;MCP1(1ng/ml)加MCP1中和抗体(5μg/ml)组。应用半定量RTPCR方法检测HK-2细胞α平滑肌肌动蛋白(αSMA)mRNA表达,ELISA方法测定上清液中I型胶原分泌,Westernblot方法检测HK2细胞TGFβ1及Smad3表达。结果MCP1(0.1,1ng/ml)组HK2细胞αSMAmRNA表达较阴性对照组明显增强(P<0.01)。ELISA方法测定MCP1(0.1,1ng/ml)组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组(P<0.01)。MCP-1中和抗体与MCP-1(1ng/ml)共同作用24h后,HKC细胞αSMAmRNA表达几乎被完全抑制(P<0.001),而BMP7(50ng/ml)与MCP1(1ng/ml)共同作用24h后HK2细胞αSMAmRNA表达仅部分被抑制(P<0.01);MCP-1中和抗体或BMP7(50ng/ml)与MCP1(1ng/ml)共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP1(1ng/ml)组明显降低(P<0.05)。Westernblot方法检测显示,MCP1(1ng/ml)组HK2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调(P<0.01)。MCP1中和抗体或BMP7(50ng/ml)与MCP-1(1ng/ml)共同作用24h后,HK2细胞TGF-β1表达均分别比MCP1(1ng/mL)单独作用明显下调,以MCP1中和抗体的作用更强(P<0.01,P<0.05);在MCP1中和抗体或BMP7作用24h后,Smad3表达也有类似下调(P<0.01,P<0.05)。结论MCP1能诱导体外培养的HK2细胞发生转分化,该作用可能与TGFβ1及Smad3表达上调有关。BMP7能部分抑制MCP1诱导HK2细胞转分化,该作用可能与TGFβ1及Smad3表达部分下调有关;同时提示MCP1诱导的转分化可能涉及非TGFβ依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。
- 谭小月郑法雷周秋根段琳李艳
- 关键词：骨形成蛋白-7肾小管细胞转分化信号转导单核细胞趋化蛋白-1
