浙江省教育厅科研计划项目(20071350)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：张小贤王志刚张家敏朱永良更多>>
- 相关机构：杭州医学院浙江省疾病预防控制中心浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC-a基因的克隆、原核表达及鉴定
- 2012年
- 目的:克隆甲型副伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白抗原(H1抗原)fliC-a基因,构建原核表达系统并鉴定重组蛋白的抗原性。方法:PCR方法扩增fliC-a基因,克隆到质粒pET-42a构建原核表达载体pET-fliC-a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白rfliC-a表达,用SDS-PAGE鉴定rfliC-a,Western blot和双向免疫扩散法鉴定rfliC-a的抗原性和免疫原性。结果:成功表达并纯化获得相对分子量为14.4 kDa的重组蛋白rfliC-a,rfliC-a能与兔抗甲型副伤寒沙门菌全菌血清发生特异性结合,免疫家兔获得高效价抗体。结论:成功构建了fliC-a基因原核表达系统,所表达的rfliC-a具有良好的抗原性。
- 张小贤张家敏王志刚朱永良
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌克隆原核表达
- fliC基因在快速分型鉴定伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的应用
- 2012年
- 目的:探讨沙门菌1相鞭毛蛋白抗原fliC基因在快速分型鉴定伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的应用。方法:根据伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白fliC-d和fliC-a基因以及菌体抗原rfbS基因的核酸序列,设计针对fliC-d、fliC-a及rfbS基因的3对特异性引物,采用多重PCR法进行检测。结果:实验结果显示,伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌分别在750 bp和329 bp处扩增出2条特异性目的条带,在258 bp处扩增出1条相同条带,非伤寒沙门菌株和甲型副伤寒沙门菌株均为阴性。结论:fliC基因检测可用于伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的分型鉴定,而rfbS基因则无助于分型鉴定。
- 张家敏张小贤王志刚
- 关键词：伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌多重PCR
