福建医科大学科学研究发展基金(FJGXY04027)
- 作品数：7 被引量：33H指数：4
- 相关作者：刘炳亚兰斌朱正纲陈雪华蔡劬更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院福建医科大学上海第二医科大学附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划福建医科大学科学研究发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胃癌细胞周期基因表达谱的变化被引量：5
- 2006年
- 目的检测胃癌MKN45细胞周期基因表达谱的变化,从基因组学角度阐明胃癌细胞增殖的机制。方法应用双胸腺嘧啶核苷法和胸腺嘧啶核苷-偌考达唑法,分别阻断胃癌细胞株MKN45于G2／M和G1／S交界点后释放;流式细胞仪监测细胞同步化程度;cDNA基因芯片检测细胞周期中G2／M交界点、M／G1过渡期、G1早期、G1晚期、G1／S交界点、S早期、S晚期、G2早期和G2末期的基因表达谱,专业软件进行聚类分析;借助基因数据库,重点对MKN45细胞周期G1末期及G2期上调基因表达进行分析。定最PCR测定cyclin E、cyclin B、plk1、STK15基因在上述9个时间点的mRNA水平变化。结果分析基因芯片检测,得到9个时间点均可信的2001个基因,其中959个基因出现改变(上调或下调),在G1末期或G2期上调基因379个,S期和M期上调基因40个(与G1末期和G2期上凋基因重合),在G1末期上调基因中,功能主要涉及DNA代谢、转录与翻译、蛋白质转运、泛素化和信号转导等;G2期上调基因主要涉及RNA合成与加工、蛋白质转运、细胞骨架合成、凋亡与抑凋亡、转录调节、泛素化、信号转导、有丝分裂调节以及癌基因的表达等。定量PCR检测4个基因的mRNA水平变化趋势,与基因芯片检测结果基本一致。结论在MKN45细胞周期演进中,DNA复制及染色体分离所需的各种物质准备分别在G,末期及G2期完成,这种准备涉及多种类基因,成为推动MKN45细胞周期进程的主要动力,其中部分基因可能与肿瘤的过度增殖有关。基因芯片检测结果具有较好的可信度,为今后胃癌细胞周期相关基因功能研究提供了帮助。
- 兰斌刘炳亚陈雪华张济王侃侃朱正纲
- 关键词：胃肿瘤基因表达谱
- STK15和ki67基因在胃癌组织中的表达研究被引量：4
- 2006年
- 目的研究丝氨酸/苏氨酸激酶15(STK15)基因在胃癌组织中的表达,及其与临床病理指标以及ki67表达的关系。方法采用免疫组化检测STK15和ki67在89例胃癌组织中的表达。结果STK15在胃癌组织中的表达阳性率为34.83%(31/89),显著高于邻近的非癌组织的4.49%(12/89)(P<0.01);STK15基因过表达与分化型胃癌及其侵润深度密切相关(P<0.05),而与ki67的表达无相关性。结论STK15基因可能在胃癌发生、发展中起相应作用,其过表达程度可作为胃癌的某些生物学行为新的判定指标。
- 兰斌陈雪华刘炳亚瞿颖蔡劬朱正纲
- 关键词：胃肿瘤丝氨酸/苏氨酸激酶15KI67
- 保罗样激酶1表达对胃癌的生物学行为及预后判定的意义被引量：9
- 2007年
- 目的探讨保罗样激酶1（plk1）在胃癌组织中的表达情况以及与胃癌临床病理指标、患者预后的关系。方法采用免疫组织化学回顾检测plk1在89例切除胃癌组织中的表达，分析其与胃癌临床病理学指标的关系；并分析on,1表达与患者生存的关系。结果plk1在胃癌组织中的阳性率为42．7％（38／89），明显高于邻近非癌组织的13．5％（12／89）（P〈0．01）。plk1基因表达与胃癌的分化程度、浸润深度、TNM分期密切相关（P〈0．05）。plk1表达阳性患者的预后明显较阴性患者差（P〈0．05）。结论plk1基因可能在胃癌发生发展中起促进作用，其过表达程度可作为胃癌的某些生物学行为及判定预后的新的参考指标。
- 兰斌刘炳亚陈雪华瞿颖张晓青蔡劬朱正纲
- 关键词：胃肿瘤保罗样激酶1免疫组织化学预后
- 丝氨酸/苏氨酸激酶15基因沉默诱导胃癌细胞凋亡被引量：2
- 2006年
- 目的观察丝氨酸/苏氨酸激酶15基因(STK15)沉默后对胃癌细胞MKN45凋亡的诱导作用,阐述STK15基因对胃癌细胞生存的关键作用。方法化学合成小片断干扰RNA(siRNA)抑制MKN45细胞STK15基因的表达；实时定量PCR及Western印迹检测STK15 mRNA及蛋白质表达的变化；流式细胞仪检测MKN45周期分布及凋亡的变化；Hoechest染色观察凋亡形态变化,Western印迹检测pro-caspase 3水平的变化。结果经靶向STK15的siRNA作用48 h后,STK15 siRNA mRNA及蛋白质表达明显下降；较多MKN45细胞呈现G_2期细胞DNA含量(P＜0．05)；细胞凋亡率较对照组明显上升(P＜0．05)；伴随pro-caspase 3水平下降。结论抑制STK15基因表达通过caspase 3途径导致MKN45细胞凋亡,STK15基因对胃癌细胞增殖及存活起着关键作用。
- 兰斌刘炳亚陈雪华瞿颖张晓青蔡劬戴起宝张健朱正纲
- 关键词：胃肿瘤丝氨酸/苏氨酸激酶15细胞凋亡
- 小片断干扰RNA抑制保罗样激酶1基因的表达诱导胃癌细胞凋亡被引量：6
- 2006年
- 目的观察抑制保罗样激酶基因(pololikekinase1,plk1)表达对胃癌细胞——MKN45凋亡的诱导,探讨plk1基因对胃癌细胞增殖及生存力的作用。方法化学合成小片断干扰RNA(siRNA)阻断MKN45细胞plk1基因的表达;实时定量PCR及Westernblot检测干扰前后plk1mRNA及蛋白质表达的变化;免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管改变,流式细胞仪检测MKN45细胞周期及凋亡的变化;Westernblot检测pro-caspase3水平的变化。结果经靶向plk1的siRNA作用后,plk1siRNAmRNA及蛋白质表达明显下降;MKN45细胞纺锤体结构变得模糊,失去完整性;较多MKN45细胞呈现G2期细胞DNA含量(P<0.05);MKN45细胞在48、72h凋亡率较对照组明显上升(P<0.05);伴随pro-caspase3水平在72h出现下降。结论抑制plk1基因表达可导致MKN45细胞凋亡,凋亡机制可能通过caspase3途径;plk1基因对胃癌细胞增殖及存活起着至关重要的作用。
- 兰斌刘炳亚陈雪华瞿颖张晓青蔡劬朱正纲
- 关键词：胃肿瘤RNA小分子干扰细胞凋亡
- 保罗样激酶1表达抑制导致胃癌MKN45细胞有丝分裂停滞被引量：3
- 2006年
- 目的探讨保罗样激酶1(PLK1)基因在胃癌MKN45细胞有丝分裂中的作用。方法应用RNA干扰(RNAi)技术阻断MKN45细胞PLK1基因的表达;real time定量PCR和Westernblot检测干扰前后PLK1mRNA及蛋白质表达的变化;免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管及有丝分裂表型的改变;倒置显微镜观察MKN45细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果经靶向PLK1的小型干拢RNA(siRNA)作用后,MKN45细胞的PLK1mRNA及蛋白质表达明显下降;细胞微管结构变得模糊,失去完整性;PLK1细胞有丝分裂表型发生明显变化,有丝分裂开始时,较高比例(46.3%)的细胞处于Ⅰ亚期,较低比例的细胞处于Ⅱ亚期(1.2%)及Ⅲ亚期(1.7%),有较高比例的带哑铃状细胞核的MKN45细胞(32.8%)及细胞间连接有胞质桥的MKN45细胞(8.4%),与对照siRNA组比较,差异有统计学意义(P<0.05);较多MKN45细胞呈圆形改变,并呈现G2期细胞的DNA含量,siRNA作用24、48及72h后,PLK1-组G2期DNA含量细胞分别为43.7%、41.0%和58.5%,与对照siRNA组在3个时间点差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PLK1基因在MKN45细胞有丝分裂过程中起着关键作用,抑制其表达可导致MKN45细胞有丝分裂停滞。
- 兰斌刘炳亚陈雪华瞿颖张晓青蔡劬戴起宝朱正纲
- 关键词：胃肿瘤保罗样激酶1RNA干扰细胞周期
- STK15基因沉默导致胃癌细胞分裂停滞被引量：4
- 2006年
- 目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶15(serine/threoninekinase15,STK15)基因在胃癌细胞有丝分裂中的作用。方法应用RNA干扰技术(RNAi)抑制胃癌细胞株MKN45细胞STK15基因表达;realtime定量PCR及Westernblot检测干扰前后STK15mRNA及蛋白质表达的变化;倒置显微镜观察MKN45细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化;MTT法检测细胞增殖速度的变化;免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管及有丝分裂表型的改变。结果STK15基因沉默后,其mRNA及蛋白质表达明显下降,realtimePCR结果显示,转染后48h,STK15-组STK15mRNA水平较对照siRNA组的下降了89.54%;Westernblot灰度比半定量检测显示,STK15蛋白水平较对照siRNA组降低了57.18%。较多MKN45细胞呈圆形改变并呈现G2期细胞的DNA含量,STK15-组3个时间点的圆形细胞占18.95%,而对照siRNA组为8.34%,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,STK15-组G2期DNA含量细胞平均值为26.13%,而对照siRNA组G2期DNA含量细胞平均值12.46%(P<0.05)。细胞增殖速度减慢(P<0.05)。细胞有丝分裂表型发生改变(P<0.05)。结论STK15基因在MKN45细胞有丝分裂过程中可能起着关键作用,阻断其表达可导致MKN45细胞有丝分裂停滞。
- 兰斌陈雪华刘炳亚瞿颖张晓青蔡劬戴起宝张健朱正纲
- 关键词：细胞周期有丝分裂RNA干扰
