广东省科技攻关计划(2005A20901003)
- 作品数：10 被引量：27H指数：4
- 相关作者：黄淑坚龚中贵梁小英冼琼珍辛朝安更多>>
- 相关机构：华南农业大学佛山科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 抗禽流感iRNA提取及其部分免疫活性的研究被引量：1
- 2007年
- 为了比较不同方法抽提抗禽流感iRNA的含量、纯度,以及了解iRNA对小鼠的免疫活性,本研究就抗禽流感iRNA提取及其部分免疫活性进行了研究。结果表明:酚-氯仿抽提与Trizol reagent试剂盒抽提的效果差异不显著,所得到的iRNA含量和纯度较高,而冷热酚法抽提的效果则明显不及酚-氯仿法与Trizol reagent试剂盒;小白鼠腹腔注射提取的iRNA制剂,小白鼠生长良好,10 d内未见小白鼠有死亡,由此说明iRNA对小白鼠是安全的;禽流感HI试验及ELISA试剂盒检测iRNA免疫小白鼠血清抗体,结果为阴性,由此说明抽提的iRNA不能诱导机体产生体液免疫。
- 黄淑坚龚中贵冼琼珍顾万军
- 关键词：禽流感IRNA免疫活性抽提
- H5、H9亚型禽流感分子鉴别诊断方法的建立
- 2007年
- 为了快速、敏感、特异地鉴别诊断禽流感,根据H5、H9亚型禽流感病毒HA基因序列的保守区域设计出并合成2对特异性引物,利用这2对引物对H5、H9亚型禽流感病毒的HA基因片段进行二联RT-PCR扩增,并对二联RT-PCR检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这2对引物能特异性地扩增出H5、H9亚型禽流感病毒HA基因片段,大小分别为490bp和686bp;该检测方法敏感性高,特异性强;初步建立了快速、敏感、特异地鉴别检测H5、H9亚型禽流感病毒的分子诊断方法。
- 黄淑坚龚中贵陈秀玲梁小英冼琼珍马春全王林川辛朝安
- 关键词：禽流感病毒H5亚型H9亚型
- H5、H9亚型禽流感病毒快速鉴别诊断方法的建立被引量：3
- 2007年
- 为了快速、敏感、特异地鉴别诊断我国目前流行的禽流感,根据H5、H9亚型禽流感病毒HA基因序列的保守区域设计并合成2对特异性引物,利用这2对引物对H5、H9亚型禽流感病毒的HA基因片段进行二联RT-PCR扩增,并对二联RT-PCR检测方法进行了敏感性及特异性试验。结果表明,这2对引物能特异地扩增H5、H9亚型禽流感病毒HA基因片段,大小分别为490bp和686bp;该检测方法敏感性高,特异性强;初步建立起快速、敏感、特异地鉴别检测H5、H9亚型禽流感病毒的分子诊断方法。
- 黄淑坚龚中贵陈秀玲梁小英冼琼珍马春全王林川辛朝安
- 关键词：禽流感病毒H5亚型H9亚型
- 呼吸道病型H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定被引量：5
- 2007年
- 广东省某鸡场发生一起以严重呼吸困难症状、急性死亡为特征的病例,5 000羽122日龄清远麻鸡在一周内连续死亡400多羽。剖检后几乎所有病死鸡支气管充满干酪样物质,导致支气管严重阻塞,气管及支气管黏膜严重出血。病料接种SPF鸡胚绒毛尿囊膜获得一株病毒。通过AGP试验,该病毒能与禽流感标准阳性血清形成明显沉淀线;通过HA试验,该病毒能够凝集鸡红细胞,但此血凝现象不能被抗NDV血清、抗EDSV-76血清、抗H5亚型流感单因子血清、抗H7亚型流感单因子血清所抑制,而能被抗H9亚型禽流感单因子血清所抑制;进而通过RT-PCR方法,最终确诊该病毒为H9亚型禽流感病毒。动物回归试验,攻毒鸡表现与临床发病鸡一致的症状及病理变化,并能再次分离到该病毒。
- 黄淑坚龚中贵陈秀玲梁小英冼琼珍顾万军王林川辛朝安
- 关键词：呼吸道病H9亚型禽流感病毒
- 禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR诊断方法的建立被引量：5
- 2006年
- 利用分子生物学方法,选择禽流感病毒的M基因、新城疫病毒的F基因以及传染性支气管炎病毒的N基因,分别在基因序列的保守区域设计1对特异性引物,利用所合成的3对引物对相应靶基因进行RT-PCR扩增,在优化单项RT-PCR条件的基础上,建立禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR的检测方法,同时对该检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这3对引物分别能特异性地扩增出禽流感病毒的M基因片段、新城疫病毒的F基因片段及传染性支气管炎病毒的N基因片段,大小分别为385 bp、520 bp和748 bp,初步建立了快速、敏感、特异鉴别检测禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒的分子诊断方法。
- 黄淑坚龚中贵陈秀玲梁小英冼琼珍顾万军王林川辛朝安
- 关键词：禽流感新城疫传染性支气管炎
- 新城疫强、弱毒株分子生物学鉴别诊断方法的建立被引量：2
- 2009年
- 为了快速、敏感、特异地鉴别区分新城疫强、弱毒株,根据新城疫病毒F基因序列设计出并合成两对特异性引物,XsXq、XrXa,用来区分新城疫强毒株和弱毒株,其中XsXa可组合用来扩增新城疫所有毒株,利用这三对引物对新城疫病毒的F基因片段进行多联RT-PCR扩增,并对该多联RT-PCR检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这三对引物能特异性地扩增出新城疫强、弱毒株及NDV毒株的F基因片段,大小分别为259bpNDV(F48E9)、522bpNDV(LaSota)、757bp(NDV),该检测方法敏感性高,特异性强,初步建立起快速、敏感、特异的鉴别诊断新城疫强、弱毒株的分子诊断方法。
- 黄淑坚龚中贵黄兴国吴志新蔡丽丽梁小英
- 关键词：新城疫强毒株弱毒株
- 支气管炎型H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定被引量：5
- 2006年
- 广东省某鸡场发生一起以严重呼吸困难、急性死亡为特征的病例,5000只鸡在1周内连续死亡400多只。通过病理剖检,几乎所有病死鸡支气管都充满干酪样物质,导致支气管严重阻塞,气管及支气管黏膜严重出血。采集病死鸡的肝脏、脾、肺和气管干酪样物质,病料经处理后通过SPF鸡胚绒毛尿囊膜接种获得一株病毒。通过琼脂凝胶免疫扩散(AGP)试验,该病毒能与禽流感标准阳性血清形成明显沉淀线,初步确定该病毒为禽流感病毒;通过血凝HA试验,该病毒能够凝集鸡红细胞,但此血凝现象不能被抗NDV血清、抗EDSV-76血清、抗H 5亚型流感单因子血清、抗H 7亚型流感单因子血清所抑制,而能被抗H 9亚型禽流感单因子血清所抑制,以及通过H 9亚型流感病毒的RT-PCR分子生物学诊断方法,最终确诊该病毒为H 9亚型禽流感病毒。动物回归试验,攻毒鸡表现与临床发病鸡一致的症状及典型病理变化,患鸡支气管被干酷样物严重阻塞,气管、支气管黏膜较严重出血,通过病料的病毒分离与鉴定,能再次分离到该病毒。
- 黄淑坚龚中贵陈秀玲梁小英冼琼珍顾万军王林川辛朝安
- 关键词：支气管炎H9亚型禽流感病毒
- H5、H7和H9亚型禽流感分子鉴别诊断方法的建立被引量：2
- 2007年
- 为快速、敏感、特异地鉴别诊断现较为重要的禽流感病毒亚型,根据H5、H7和H9亚型禽流感病毒HA基因序列的保守区域设计出并合成3对特异性引物,利用这3对引物对H5、H7和H9亚型禽流感病毒的HA基因片断进行多联RT-PCR扩增,并对多联RT-PCR检测方法进行敏感性及特异性实验。结果表明:3对引物能特异性地扩增出H5、H7和H9亚型禽流感病毒HA基因片段,大小分别为490bp,365bp和686bp;该检测方法敏感性高,特异性强;初步建立起快速、敏感、特异地鉴别检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的分子诊断方法。
- 黄淑坚龚中贵陈秀玲梁小英冼琼珍顾万军王林川辛朝安
- 关键词：H5亚型H7亚型H9亚型
- 繁殖障碍型H3亚型猪流感病毒的分离与鉴定被引量：6
- 2007年
- 于广东惠州市某猪场采集流产死胎的肺组织、胎衣及鼻棉拭子,病料处理后经SPF鸡胚绒毛尿囊腔接种获得1株有血凝(HA)活性的病毒,通过AGP试验初步确定为猪流感流感病毒;但此病毒的血凝现象不能被抗H1亚型猪流感单因子血清、抗H5亚型猪流感单因子血清、抗H7亚型猪流感单因子血清、抗H9亚型猪流感单因子血清抑制,而能被抗H3亚型猪流感单因子血清抑制;通过H3亚型猪流感病毒RT-PCR分子生物学诊断,最终确定该病毒为H3亚型猪流感病毒。动物回归试验结果显示,攻毒小鼠出现精神萎靡、厌食、嗜睡、被毛松乱、呼吸较急促,攻毒后7 d采集小鼠血清进行检测,HI效价为3log2～4log2;剖检发现病毒性肺炎,且能从病料中再次分离到H3亚型猪流感病毒。
- 黄淑坚龚中贵吴志新梁小英冼琼珍
- 关键词：繁殖障碍型H3亚型猪流感病毒
- 高致病性禽流感分子鉴别诊断方法的建立被引量：1
- 2006年
- 为了快速、敏感、特异地鉴别诊断高致病性禽流感,根据H 5,H 7亚型禽流感病毒HA基因序列的保守区域设计出并合成两对特异性引物,利用这两对引物对H 5,H 7亚型禽流感病毒的HA基因片断进行二联RT-PCR扩增,并对二联RT-PCR检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这两对引物能特异性地扩增出H 5,H 7亚型禽流感病毒HA基因片段,大小分别为490 bp和375 bp;该检测方法敏感性高,特异性强;初步建立起快速、敏感、特异地鉴别检测H 5,H 7亚型高致病性禽流感病毒的分子诊断方法。
- 黄淑坚龚中贵陈秀玲梁小英冼琼珍顾万军王林川辛朝安
- 关键词：禽流感病毒H5亚型H7亚型
