国家高技术研究发展计划(2012AA022501)
- 作品数：15 被引量：23H指数：2
- 相关作者：杨静付汉江朱捷郑晓飞夏燕平更多>>
- 相关机构：军事医学科学院河南中医药大学安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- siRNA缀合物的研究进展被引量：1
- 2016年
- 小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)能够对靶m RNA进行高效性、高特异性转录后调控,具有可传递性等特点,已被用于多种疾病的治疗研究.但其自身存在的诸多缺陷(如稳定性差、难以跨膜等)限制了它在临床上的广泛应用.对核苷酸单元进行结构改造,或构建缀合物,均可以在一定程度上提高si RNA的成药性.本文针对各类si RNA缀合物的研究进展进行了系统总结,阐述了各自独特的生物学特点及潜在的不足,并对其临床应用前景进行了展望.
- 孙晶杨振军
- 关键词：小干扰RNA化学合成基因沉默
- 两亲性阳离子纳米粒外层亲/疏水修饰对其细胞转染行为的影响研究
- <正>目的阳离子聚合物作为一类重要的非病毒基因载体,在基因治疗方面有着广泛的应用前景。由于阳离子聚合物较低的免疫原性,其结构的可控及可调节性较强,以及对核酸的良好负载能力,近些年各种各样具有不同结构特点的阳离子基因载体被...
- 韩尚聪万海英林道舒汤华董岸杰
- 文献传递
- 4'-C-(2-甲氧乙氧基)修饰的2'β-F-/2'α-F-2'-脱氧尿苷的合成及其修饰的反义核酸性质评价
- 2016年
- 核酸的化学修饰是反义寡核苷酸分子成药的关键技术,本文以相应的2'-氟阿拉伯糖尿苷(2'-F-ara U)及2'-氟尿苷(2'-F-r U)为起点,通过在糖基的4'-位引入2-甲氧乙氧基(MOE),合成了新的单体2'-F-4'-C-MOE-ara U及其差向异构体2'-F-4'-C-MOE-r U,并将它们转化为相应的亚磷酰胺,用于所需DNA序列的合成。它们对于ds DNA和DNA-RNA双螺旋的热稳定性的影响显示,与2'-F-4'-C-MOE-r U及2'-F-ara U修饰的寡核苷酸相比,2'-F-4'-C-MOE-ara U修饰,特别是在5'-嘧啶-嘌呤-3'(5'-pyrimidine-purine-3')步序上形成C-H…F-C假氢键时,可显著增强寡核苷酸对互补RNA的亲和力,并能够保持对互补DNA的亲和力。同时,2'-F-4'-C-MOE-ara U修饰后的寡核苷酸对完全配对的RNA/DNA单链均具有良好的结合特异性;而2'-F-4'-C-MOE-r U仅对互补RNA具有较好的杂交能力。不过,3'-末端2'-F-4'-C-MOE-ara U修饰的寡核苷酸对核酸酶水解的稳定性却低于2'-F-4'-C-MOE-r U修饰。这些结果表明了在2'-F-ANA单元上进一步引入4'-位修饰的可行性,以及2'-F取代单体对于双螺旋结构的稳定性具有显著影响,为进一步的核酸化学修饰和反义核酸药物的开发提供了新的技术支持。
- 马薇王靖鲁丹丹杨静秦炳杰何小羊王升启
- 关键词：氟化学修饰反义核酸
- 大鼠成骨细胞特异单链DNA适配体的筛选与鉴定
- 2015年
- 目的:筛选能特异识别大鼠成骨细胞的单链DNA(ssDNA)适配体并对其进行鉴定。方法:利用完整细胞为靶标的消减细胞SELEX技术筛选大鼠成骨细胞特异ssDNA适配体,通过荧光显微镜、流式细胞术、基因克隆测序、MEME在线软件和RNA structure分析软件,分析适配体的一、二级结构,并对筛选得到的适配体进行鉴定。结果:经过6轮消减细胞SELEX筛选,荧光显微镜鉴定文库已富集;通过流式细胞术检测及测序分析,得到2条适配体L54和L66与大鼠成骨细胞特异结合,其平衡解离常数分别为494.4±133.3和511.4±160.7 nmol/L。结论:筛选获得特异识别大鼠成骨细胞的ssDNA适配体。
- 李慧丁红梅李洁黄皑雪苏雪婷梁超张令强赵强李少华邵宁生
- 关键词：大鼠成骨细胞DNA文库适配体
- 卷柏多糖抗肠道病毒71型活性及机制研究被引量：9
- 2015年
- 目的:研究卷柏多糖对肠道病毒71型(EV71)的抑制作用,并初步探讨其抗病毒机制。方法:测定30%、50%醇沉卷柏多糖对Vero细胞的毒性和对EV71感染致Vero细胞病变的抑制作用,筛选出选择指数(SI)高的卷柏多糖醇沉部位,检测活性高的卷柏多糖部位对EV71的直接灭活作用及对病毒生活周期的影响。结果:30%和50%醇沉卷柏多糖及利巴韦林抑制EV71致细胞病变的IC50值分别为23.62±2.50、10.43±0.38和38.66±4.91 mg/L,SI分别为>169、>384和101,提示50%醇沉卷柏多糖抗EV71活性最好。机制研究显示,50%醇沉卷柏多糖对EV71无直接杀病毒作用;与模型组相比,50%醇沉卷柏多糖可显著抑制EV71对Vero细胞的吸附作用(P<0.05),而对EV71的进入、复制及释放环节无影响。结论:卷柏多糖具有抗EV71活性,可能通过抑制病毒的吸附达到抗病毒作用。
- 夏燕平马腾齐向云李庆军王升启杨静
- 关键词：多糖卷柏肠道病毒71型VERO细胞
- 利用CRISPR/Cas方法建立RNaseL基因稳定敲除细胞株被引量：1
- 2015年
- 目的利用CRISPR/Cas9技术建立人RNase L基因稳定敲除的细胞株。方法根据Gen Bank中RNase L基因序列,设计RNase L敲除的小指导RNA(sgRNA)序列,将其克隆到p Cas-Guide真核表达载体中,获得p Cas指导RNA(gRNA)载体;设计供体DNA的同源臂序列,通过搭桥PCR将左同源臂、潮霉素B抗性基因和右同源臂扩增成为一条片段作为同源重组的修复模板,并将其克隆到p Back Zero-T表达载体上,获得p Back Zero-T-RNase LK载体。将上述两个载体共转染HEK293细胞,用潮霉素B筛选,通过Western印迹和DNA测序等技术验证RNase L从基因组上敲除。结果与结论成功构建了载体p Cas-gRNA和p Back Zero-T-RNase LK,Western印迹和DNA测序结果表明,成功获得5株RNase L缺失的细胞株,为探讨RNase L的生物学功能和研究其分子机制奠定了基础。
- 李瑞花付汉江钟一然沈远朱捷郑晓飞
- 关键词：RNASE同源重组转染
- poly(U)加尾microRNA检测方法建立及其检测被引量：2
- 2013年
- 目的建立一种poly(U)加尾RT-PCR检测微RNA(microRNA,miRNA)分子的新方法。方法提取细胞总RNA,用poly(U)聚合酶在miRNA 3'端添加U尾,逆转录为cDNA,实时定量PCR检测miRNA分子。结果经poly(U)聚合酶加尾RT-PCR方法可以成功地检测miRNA分子。结论本研究建立的poly(U)加尾RT-PCR方法可有效地检测并分析miRNA分子,具有特异性强,灵敏度高的特点,为miRNA的检测分析及功能机制研究提供了一种新方法。
- 李珊珊付汉江铁轶朱捷邢瑞云郑晓飞
- 关键词：微RNAPCR
- 血浆miRNA快速制备方法建立和优化被引量：1
- 2014年
- 目的建立并优化用于血浆microRNA(miRNA)检测分析的miRNA快速提取方法。方法使用含表面活性剂的提取液和加热方法提取血浆miRNA,采用RNA酶抑制剂抑制RNA降解,利用检测miRNA的poly(A)加尾、逆转录反应和实时定量PCR法检测血浆miRNA表达水平,评估方法的可行性。结果成功建立了提取液和加热提取miRNA一步法,实时定量PCR结果表明该方法具有良好的扩增特异性、可重复性,方法稳定可靠。结论提取液和加热一步法简便、快速、低成本,血浆用量少,为临床血浆miRNA检测分析提供了一种新的技术方法。
- 李函蔚钟一然付汉江铁轶朱捷李桂英郑晓飞
- 关键词：血浆微RNA
- 流感泰得在小鼠体内抗H1N1型FM1株流感病毒活性研究
- 2015年
- 目的:研究流感泰得预防给药在小鼠体内对H1N1型FM1株流感病毒的抑制作用及对病毒感染小鼠的保护作用。方法:BALB/c小鼠随机分为正常对照组,病毒对照组,磷酸奥司他韦组,流感泰得2.5、5、10 mg/kg组,提前24h和1 h滴鼻给药2次,于第二次给药1 h后滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,连续观察14 d,统计小鼠存活率、平均存活天数、体重变化;按以上方法于造模后第5 d天取肺脏,计算肺指数、肺脏病毒滴度。结果:与病毒对照组相比,流感泰得3个剂量组可明显提高病毒感染小鼠的存活率,延长平均存活时间,缓解病毒感染引起的体重降低,降低病毒感染小鼠的肺指数和肺脏病毒滴度。结论:流感泰得在小鼠体内预防给药具有抗H1N1型FM1株流感病毒活性。
- 李庆军张波夏燕平王升启杨静
- 关键词：流感病毒抗病毒活性
- Poly(A)加尾-RNase H消化-RT-PCR法分析应激诱导生成5'端tRNA半分子被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5'端转移RNA(tRNA)半分子的方法。方法提取应激诱导细胞RNA,用poly(A)加尾酶在RNA分子3'端加尾后,加入与待测tRNA的3'端部分序列互补的简并DNA探针杂交,经RNase H消化与DNA探针互补的tRNA序列,再由oligo(d T)n锚定引物进行逆转录获得互补DNA(c DNA),以5'端tRNA半分子和锚定引物的序列为PCR反应的上下游引物,PCR扩增检测5'端tRNA半分子。结果经poly(A)加尾-RNase H消化-RT-PCR-电泳等步骤,可以实现对5'端tRNA半分子的检测分析。结论 poly(A)加尾-RNase H消化-RT-PCR法的建立实现了5'端tRNA半分子的简便、快速检测分析,为tRNA半分子生物学功能研究和检测分析提供了工具。
- 刘荻付汉江刘继来朱捷郑晓飞
- 关键词：RNASE
